导读:本文包含了克隆与鉴定论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:盐胁迫,耐盐基因,耐盐性,种质资源鉴定
克隆与鉴定论文文献综述
袁雨豪,高小丽,高金峰,冯佰利[1]（2019）在《糜子耐盐性种质资源鉴定及相关耐盐基因的克隆与功能研究》一文中研究指出为了达到改良、修复和利用盐渍化土壤的目的,耐盐品种的筛选和选育是当前研究的热点。本研究以2个糜子品种(耐盐品种ST 47;盐敏感品种SS 212)为试验材料,全面评估在NaCl(1%)胁迫Oh、12h、1d、3d、7d和复水7d(RW7d)条件下糜子表型,生理,及转录组对盐胁迫和复水的动态变化。通过基因共表达网络分析,揭示了糜子防御和适应盐胁迫机制。生理和转录组结果表明,与SS 212相比,ST47表现出更强的耐盐性和更快的恢复速度。对盐胁迫响应上调的基因参与了细胞壁的生物合成和对非生物胁迫的响应,在SS 212中参与了磷酸化和DNA修复。这些结果为提高植物耐盐性和研究高粱耐盐性候选基因的功能提供了有价值的信息。(本文来源于《科技创新与扶贫攻坚——陕西省农作物学会第二届会员代表大会暨2019年学术年会摘要集》期刊2019-12-13）
董雪,徐雨昕,郭晶,龚忠阔,夏霖亚[2]（2019）在《重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定》一文中研究指出通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV共转染HEK-293F细胞,可显着抑制C6细胞增殖(P<0.01);转染24～144h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达;所得纯化蛋白和标准品一致;纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖(P<0.05～0.01),与标准品抑制效果相似.(本文来源于《吉林大学学报(理学版)》期刊2019年06期）
赵丹华,李玉华[3]（2019）在《带荧光素酶基因的乙型脑炎病毒SA14-14-2感染性克隆的构建及鉴定》一文中研究指出目的:构建带有荧光素酶基因的乙型脑炎(简称乙脑)病毒感染性克隆,并通过体外拯救获得恢复病毒,用于乙脑病毒致病机理研究、病毒感染在小鼠体内的动态分布以及乙脑疫苗免疫效果评价的高通量方法建立。方法:应用反向遗传学、融合PCR以及无缝拼接等体外重组技术,将荧光素酶报告基因(F-LUC)插入到乙脑病毒SA14-14-2全长感染性克隆的5'非编码区与C蛋白编码区之间,线性化后体外转录为RNA并转染BHK_(21)细胞,在细胞感染和动物试验分别检测恢复病毒的拯救和F-LUC的表达情况。结果:成功构建了带有F-LUC报告基因的SA14-14-2乙脑病毒全长感染性克隆,并拯救获得了重组病毒。基因序列分析及细胞与动物水平均证明拯救的病毒可较高水平表达荧光素酶基因。结论:本研究构建出带有荧光素酶报告基因F-LUC的SA14-14-2感染性克隆,并拯救获得带有荧光素酶的重组乙脑病毒,为乙脑血清中和抗体的高通量筛选、病毒感染在小鼠体内的动态分布和致病机理研究奠定了基础。(本文来源于《中国药事》期刊2019年11期）
宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权[4]（2019）在《磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达》一文中研究指出为了从磷矿区土壤分离高效溶磷菌,为开发施用于矿区复垦的高效微生物解磷菌肥提供试验基础,利用磷酸钙培养平板筛选磷矿区土壤中的解磷菌,采用PCR法扩增16S rDNA序列进行鉴定,探讨不同碳源、氮源、起始pH值和温度下菌株的生长情况,另外还进一步克隆表达该菌株的碱性磷酸酶。结果显示,经筛选得到1株高活性的解磷菌,16S rDNA鉴定其为成团泛生菌(Pantoea agglomerans);该菌株最佳碳源为甘油、氮源为NH4Cl类无机氮,起始pH值为9,培养温度为33℃;在最适培养条件下,有效溶磷量达到了287.48 mg/L;成功克隆了该菌株中的碱性磷酸酶基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,重组菌裂解液活性为原始菌株裂解液的32.77倍。分离得到的菌株及重组表达的碱性磷酸酶在矿区复垦、农业种植和工业上均具有广泛的应用前景。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年11期）
李言言,刘阿华,王毅,宁梦夏,马文涛[5]（2019）在《山羊乳酪蛋白单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出制备山羊乳酪蛋白单克隆抗体可以为检测乳品中山羊乳成分提供免疫学检测手段。以山羊酪蛋白免疫Balb/c小鼠,应用细胞融合技术,制备特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体,对获得的阳性杂交瘤细胞进行连续传代和反复冻存以测定其稳定性,并对其分泌的单克隆抗体应用ELISA进行抗体特异性分析,对特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体进行抗体亚型鉴定和染色体组型分析。最终,成功的筛选出可以分泌特异性识别山羊乳酪蛋白的单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,被命名为7H。经染色体组型分析,染色体数目为102条;单克隆抗体7H类别为IGg1,轻链为κ;经连续传代和反复冻存,ELISA检测细胞上清抗体发现其OD450nm值无显着性差异。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年11期）
韩天娇,桓霏,刘萌,曹敏杰,刘光明[6]（2019）在《葡萄牙牡蛎中新型过敏原肌质钙结合蛋白的纯化、克隆及鉴定》一文中研究指出目的:牡蛎因其味道鲜美,蛋白含量丰富,受到人们的青睐,但随之引起的高过敏率也同样不容小觑,对牡蛎中过敏原的探究迫在眉睫。方法:本研究以葡萄牙牡蛎(Crassostrea angulata)为研究对象,利用硫酸铵盐析和柱层析等方法对葡萄牙牡蛎中的20 kDa左右的蛋白进行分离纯化,并利用液相串联质谱的方式对纯化蛋白进行鉴定,之后采用免疫学方式研究目的蛋白致敏性;选用pET-22b载体对目的蛋白进行克隆表达;之后采用多克隆抗体对天然及重组蛋白的IgG结合活性进行研究;通过Dot-blot、ELISA等方法对重组目的蛋白进行致敏性分析。结果:经质谱鉴定后确定纯化出的分子量在20 kDa的蛋白为葡萄牙牡蛎中的肌质钙结合蛋白(SCP);通过Western-blot结果得到天然及重组SCP均可与兔抗牡蛎SCP多克隆抗体结合;血清学试验表明天然与重组SCP均具有IgE结合能力,为牡蛎中一种新型过敏原。结论:本研究首次分离鉴定了葡萄牙牡蛎中的新型过敏原SCP,并对其进行克隆表达,为全面研究牡蛎中的过敏组分提供依据。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
原晓龙,陈中华,李云琴,王毅[7]（2019）在《一个含有CMeT新型NR-PKS基因的克隆与鉴定》一文中研究指出地衣中含有种类丰富并具有生物活性的聚酮类化合物,目前对地衣聚酮类化合物的生物合成尚不清楚。本研究通过对皮革肾岛衣地衣型真菌转录组数据的分析,获得一个新的含有甲基转移酶结构域的非还原型聚酮合酶(NR-PKS)基因(NpPKS1),利用RT-PCR技术首次从皮革肾岛衣地衣型真菌中克隆得到该基因全长cDNA,并检测不同培养基对NpPKS1基因表达的影响。结果显示:NpPKS1基因cDNA全长7 857 bp,编码2 618个氨基酸;该蛋白不存在信号肽,在细胞质基质中发挥作用;与含有甲基转移酶结构域的构巢曲霉(Aspergillus nidulans, XP_664052)、壳球孢菌(Macrophomina phaseolina, EKG19938)聚为一支;表达分析显示该基因在不同培养基上的表达量差异极其显着,在BMG培养基上的表达量最高,其相对表达量可达39.15。本研究为下一步异源表达皮革肾岛衣地衣型真菌的聚酮合酶、探讨皮革肾岛衣聚酮化合物的生物合成及基因资源的有效利用提供必要的研究材料。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年20期）
李旭,魏德强[8]（2019）在《以烟草花叶病毒为载体的μE_3单克隆抗体的制备及鉴定》一文中研究指出目的:获得半抗原雌叁醇(μE_3)高特异性和高亲和力的单克隆抗体。方法:本研究利用烟草花叶病毒(TMV)作为抗原的载体,通过化学方法与半抗原雌叁醇(μE_3)连接形成TMV-EPMK-μE_3复合体,利用该复合体免疫小鼠,再通过杂交瘤筛选技术来获得具有高亲和力的μE_3单克隆抗体。结果:TMV-EPMK-μE_3免疫的小鼠血清效价达到1∶100 000,通过细胞融合及筛选获得4株分泌抗体效价较高的杂交瘤细胞,然后进行了亚克隆,分别命名为TE1-1、TE2-1、TE3-1和TE 4-1。抗体的效价均在10~(-8)左右,最低检测限约为1 ng。SDS-PAGE电泳结果显示4株抗体分别在25 kD和50 kD处各有一条清晰的条带,纯度都在95%以上。获得的4株抗体通过罗氏亚型鉴定试剂盒测定轻链类型均为κ;TE2-1和TE4-1单抗重链为IgG2a、 TE1-1和TE3-1单抗重链为IgG2b。TE1-1和TE3-1为TMV-EPMK-μE_3的特异性抗体。结论:利用烟草花叶病毒(TMV)作为抗原载体,提高了半抗原μE_3免疫原性,进而使μE_3能够刺激机体产生有效免疫应答。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年20期）
王玲,严静,刘梦,王跃进,张朝红[9]（2019）在《葡萄ASN和GS家族基因鉴定、克隆和表达分析》一文中研究指出植物中的天冬酰胺合成酶(ASN)和谷氨酰胺合成酶(GS)在氮代谢和再利用中起重要作用。之前在多个品种中已证实葡萄VviASN1基因表达量在无核品种种子发育/败育的前中期显着高于有核品种。因此本研究中从葡萄全基因组中鉴定天冬酰胺合成酶基因VviASN和谷氨酰胺合成酶基因VviGS,克隆得到基因序列,分析两个基因家族成员的基本序列特征和表达模式。同时测定有核和无核葡萄种子中天冬酰胺(Asn)和谷氨酰胺(Gln)的含量,以期进一步揭示VviASN和VviGS在葡萄种子败育过程中发挥的作用。通过拟南芥的ASN和GS家族成员氨基酸序列在葡萄基因组中鉴定葡萄对应家族成员;通过RT-PCR方法克隆基因cDNA序列;实时荧光定量PCR技术分析VviASN和VviGS在黑比诺、红地球、杨格尔、赫什无核、红宝石无核、火焰无核和无核白等7个有核和无核葡萄品种种子中的表达模式以及在黑比诺葡萄中的组织特异性;采用高效液相色谱—质谱(LC–MS)法测定有核葡萄黑比诺和无核葡萄火焰无核种子中Asn和Gln含量;同时通过实时荧光定量PCR技术分析了这两个基因家族成员对外源MeJA处理后的响应模式。本研究中鉴定了VviASN1、VviASN2和VviGS1.1、VviGS1.2、VviGS1.3、VviGS2a和VviGS2b共7个基因,并克隆得到了它们的cDNA序列。对VviASN和VviGS的生物信息学分析包括染色体定位、系统发育分析、基因结构、多序列比对和保守结构域分析,结果表明葡萄中鉴定到的基因符合这2个基因家族成员的特征。组织特异性分析表明VviASN1仅在花中高表达,而VviGS2a仅在叶中高表达。实时荧光定量PCR分析表明,无核葡萄胚珠发育过程中VviASN1、VviASN2、VviGS1.1和VviGS1.2的转录水平高于有核葡萄。氨基酸含量的测定表明,无核葡萄种子中Asn的含量高于有核葡萄,而Gln则相反。除了VviGS2a对MeJA处理没有响应外,其他6个基因成员都对外源MeJA的处理有不同程度的响应。总之,研究结果为探索葡萄ASN和GS基因家族成员在其种子发育/败育和激素响应过程中的作用提供了一个全新的综合研究思路。(本文来源于《中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集》期刊2019-10-21）
吴忠香,张雪梅,徐婧雯,宋杰,李慧[10]（2019）在《抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定》一文中研究指出目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒p GEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E. coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204 800、1∶204 800、1∶3 200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5. 5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
克隆与鉴定论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过优化密码子获得带有信号肽的人源抗血管内皮生长因子(VEGF)抗体的重链和轻链DNA序列,分别构建表达载体pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV,将表达载体共转染HEK-293细胞后,与C6胶质瘤细胞共培养,并将所得蛋白进行分离纯化.实验结果表明:pcDNA-VEGFH和pcDNA-VEGFV共转染HEK-293F细胞,可显着抑制C6细胞增殖(P<0.01);转染24～144h后的细胞培养上清液中均有蛋白表达;所得纯化蛋白和标准品一致;纯化所得抗体蛋白能明显抑制C6细胞增殖(P<0.05～0.01),与标准品抑制效果相似.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆与鉴定论文参考文献
[1].袁雨豪,高小丽,高金峰,冯佰利.糜子耐盐性种质资源鉴定及相关耐盐基因的克隆与功能研究[C].科技创新与扶贫攻坚——陕西省农作物学会第二届会员代表大会暨2019年学术年会摘要集.2019
[2].董雪,徐雨昕,郭晶,龚忠阔,夏霖亚.重组人源抗血管内皮生长因子单克隆抗体的制备及鉴定[J].吉林大学学报(理学版).2019
[3].赵丹华,李玉华.带荧光素酶基因的乙型脑炎病毒SA14-14-2感染性克隆的构建及鉴定[J].中国药事.2019
[4].宁清,刘迪,靳翔,弓亚杰,薛智权.磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达[J].山西农业科学.2019
[5].李言言,刘阿华,王毅,宁梦夏,马文涛.山羊乳酪蛋白单克隆抗体的制备与鉴定[J].动物医学进展.2019
[6].韩天娇,桓霏,刘萌,曹敏杰,刘光明.葡萄牙牡蛎中新型过敏原肌质钙结合蛋白的纯化、克隆及鉴定[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[7].原晓龙,陈中华,李云琴,王毅.一个含有CMeT新型NR-PKS基因的克隆与鉴定[J].分子植物育种.2019
[8].李旭,魏德强.以烟草花叶病毒为载体的μE_3单克隆抗体的制备及鉴定[J].中国免疫学杂志.2019
[9].王玲,严静,刘梦,王跃进,张朝红.葡萄ASN和GS家族基因鉴定、克隆和表达分析[C].中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集.2019
[10].吴忠香,张雪梅,徐婧雯,宋杰,李慧.抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定[J].中国生物制品学杂志.2019