导读:本文包含了克隆文库论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:文库,宏基,糖苷酶,硅藻,法医,菌根,瘤胃。
克隆文库论文文献综述
胡蝶,皮之云,张志荣,陈燕祥,邢豫明[1]（2019）在《运用18S rDNA克隆文库检测滇池硅藻种群多样性》一文中研究指出目的构建18S rDNA克隆文库检测滇池硅藻种群的多样性。方法用硅藻18S rDNA特异性引物对滇池6个采集点水样的硅藻进行DNA扩增,构建硅藻18S rDNA克隆文库,随机挑取克隆子进行测序,通过BLAST进行序列比对,分析滇池硅藻种群分布,运用MEGA v7.0.14软件构建滇池水域硅藻18S rDNA系统发育树。结果 240个克隆子测序获得167条硅藻序列,包括冠盘藻属、等片藻属、直链藻属等11个硅藻种属,6个采集点间硅藻种群分布存在一定差异。结论滇池硅藻种群分布具有一定特征,硅藻18S rDNA序列分析对法医学溺死地点推断有一定参考价值。(本文来源于《法医学杂志》期刊2019年04期）
陆坚,路卫卫,李伟亮,郭晓敏,杜丽琴[2]（2018）在《高糖土壤宏基因组文库β-葡萄糖苷酶基因克隆表达及酶学性质分析》一文中研究指出【目的】通过宏基因组技术获取土壤微生物总DNA,运用基因克隆、功能筛选、基因表达等手段挖掘新型β-葡萄糖苷酶,为新型微生物资源的开发利用提供科学依据。【方法】提取高糖土壤宏基因组DNA,构建宏基因组文库;筛选文库并对阳性克隆子亚克隆,获得β-葡萄糖苷酶基因;PCR扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌进行表达;采用镍亲和层析对重组酶纯化,研究其酶学性质。【结果】成功构建约含9.2万个克隆的高糖土壤宏基因组文库,获得一个新型β-葡萄糖苷酶基因unbgl3A。该基因大小为2241 bp,在氨基酸水平上,与Gen Bank数据库中已知β-葡萄糖苷酶的一致性为73%;该酶最适pH为6.0,最适温度为50℃,对对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)的K_m值为6.45 m M,V_(max)为50μmol/(mg·min)。在15～50℃热处理1 h后仍保留90%以上的酶活力,热稳定性较好,且被多种糖激活。【结论】宏基因组技术是获取新酶有效手段,获得的Unbgl3A具有良好酶学性质,可为进一步挖掘其应用潜力及研究耐热机理奠定基础。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年12期）
万真真[3]（2018）在《16S rDNA克隆文库法分析油藏细菌群落结构多样性》一文中研究指出本文利用细菌16S rDNA克隆文库法对大港油田油藏内源微生物群落结构进行系统分析。文库构建结果表明,油藏细菌由8个门类构成,分别为Alphaproteobacteria(46%)、Betaproteobacteria(35%)、Firmicutes(8%)、Nitrospirae(2%)、Synergistetes(1%)、Dictyoglomia(1%)、Deferribacteres(1%)、Gammaproteobacteria(1%)以及Unclassified bacteria。其中,存在如鞘胺醇单胞菌(Sphingomonas)、代尔夫特菌(Delftia)等大量具有石油烃降解功能的细菌种属。探索极端油藏环境中微生物群落结构特征,为微生物驱油技术的开发奠定了良好的基础。(本文来源于《安庆师范大学学报(自然科学版)》期刊2018年02期）
胡蝶[4]（2018）在《18SrDNA克隆文库联用扫描电镜检测滇池水域硅藻种群多样性研究》一文中研究指出[目的]利用18SrDNA克隆文库联用扫描电镜检测滇池不同水域硅藻种群分布特征,用于法医学溺死鉴定。[方法]应用Power Soil DNA Isolation Kit提取滇池水样中的硅藻DNA,然后针对滇池硅藻种群利用Primer Premier 5.0软件设计硅藻18SrDNA引物,并与文献报道的两对硅藻18srDNA特异性引物A145F/Dia516R及通用性引物18sF/18sR,分别对滇池水域中的硅藻18srDNA进行PCR扩增、克隆和测序检测,并比较其特异性与敏感性,筛选出适合作为滇池水域的硅藻DNA扩增及检验的备选引物。在滇池设立6个采集点采集水样,用上步筛选的引物对滇池6个采水点水样总DNAPCR扩增,构建硅藻18srDNA克隆文库,随机挑取克隆子进行测序,在NCBI数据库进行序列比对,分析滇池硅藻种群分布。之后应用扫描电镜检测滇池硅藻种群,对比两种检测方法的结果,并编集滇池水域硅藻种群扫描电镜图谱。[结果](1)Power Soil DNA Isolation Kit能够有效提取水样中的硅藻DNA,且DNA纯度高,可直接用于下游实验。(2)引物筛选,特异性强弱依次是605F/605R,467F/467R,18sF/18sR,A145F/Dia516R,其敏感性强弱依次是 605F/605R,18sF/18sR,467F/467R 和A145F/Dia516R。(3)18SrDNA克隆文库检测滇池6个采集点水样,检出冠盘藻属、等片藻属、直链藻属、菱形藻属、小环藻属、海链藻属、脆杆藻属、舟形藻属、异极藻属、曲壳藻属、楔形藻属11个硅藻种属。(4)扫描电镜检测滇池6个采集点水样,检出冠盘藻属、等片藻属、直链藻属、菱形藻属、小环藻属、脆杆藻属、舟形藻属、异极藻属、曲壳藻属、弯楔藻属、桥弯藻属、卵形藻属、针杆藻属、平板藻属14个硅藻种属。[结论](1)试剂盒Power Soil DNA Isolation Kit能够有效提取水样中的硅藻DNA,18SrDNA克隆文库法用于水样硅藻种群分析效果好,此法要用于水中尸体溺死诊断还需深入研究探索。(2)引物605F/605R适合作为滇池水域的硅藻DNA扩增及检验的备选引物。(3)滇池全湖检出15类硅藻,包括冠盘藻、等片藻、直链藻、菱形藻、小环藻、海链藻、脆杆藻、舟形藻、异极藻、曲壳藻、弯楔藻、桥弯藻、卵形藻、针杆藻、平板藻,不同水域硅藻种群存在一定差异。(本文来源于《昆明医科大学》期刊2018-05-01）
马艺飞[5]（2018）在《毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库筛选及SNF2基因克隆表达与功能研究》一文中研究指出毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)是7种鸡球虫中致病性最大的虫种之一,主要危害8～18周龄的鸡,引起急性小肠球虫病,给养鸡业造成极大的经济损失,因此迫切需要寻找可行的防控措施。鸡球虫的生活史包括孢子生殖、裂殖生殖和配子生殖叁个阶段,其生长发育过程中的一些关键性调控因子可能是防控鸡球虫病的有效作用靶点。在本课题组的前期研究工作中,已应用SMART技术构建了毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库。在此基础上,本研究对该文库进一步筛选,以获取毒害艾美耳球虫的功能基因,并对毒害艾美耳球虫SNF2基因进行克隆表达和免疫原性分析,为研究毒害艾美耳球虫亚单位疫苗奠定基础。首先,用免疫学和质粒文库两种方法对毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库进行筛选,获取EST序列。(1)免疫学方法:用制备的鼠抗子孢子可溶性蛋白多抗作为一抗,对文库进行筛选,初筛得到40个疑似阳性克隆,经两次复筛后获得190个阳性克隆;将复筛得到的阳性噬菌体载体λTriplEx2转化为质粒载体pTriplEx2后,送公司测序,得到26条球虫基因组的EST序列,共5个重迭群。(2)质粒文库方法:直接将λTriplEx2噬菌体文库转化为pTripIEx2文库,选出150个克隆,送公司测序,得到53条EST序列,共21个重迭群。比较两种方法获得的EST序列,有5条序列相同。对21个重迭群的生物信息学分析显示,其分别编码参与DNA复制过程的SNF2家族解旋酶、延伸因子G,参与RNA前体剪接过程的剪切因子,调节蛋白如丝氨酸蛋白酶抑制剂,参与细胞周期调控的PUA结构域蛋白,线粒体内膜tim17亚单位,结构域蛋白如丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶、腺苷酸环化酶相关蛋白,子孢子入侵相关的微线体蛋白mic-1、核糖体蛋白、顶体膜抗原、MA2(ma-2)mRNA,Etm033F10 假设蛋白,Etm087F12 假设蛋白,Etm032G09 假设蛋白和Etm128F02假设蛋白。其次,从获得的EST序列中选取毒害艾美耳球虫SNF2基因开展研究。根据GenBank中毒害艾美耳球虫SNF2基因序列设计3对引物,用RT-PCR的方法,通过分段扩增再拼接的方法获得了毒害艾美耳球虫全长SNF2基因序列,并对该基因进行了氨基酸序列、功能结构域等分析研究。该基因全长3 426 bp。接着对SNF2基因N端结构域序列进行截短原核表达,表达的融合蛋白大小为36 kDa左右,主要以包涵体形式存在。用表达产物制备鼠多抗,再以该多抗经Western blot检测子孢子可溶性蛋白,发现天然的SNF2蛋白大小为120 kDa左右,与预测的理论值相符。最后,将纯化复性的重组蛋白rEnSNF2按不同剂量(200、100、50 μg/羽)免疫无球虫感染的雏鸡,免疫2次后,除未免疫未攻虫组外,其余各试验组均感染毒害艾美耳球虫孢子化卵囊,以成活率、卵囊减少率、病变记分、平均增重等为指标,评测重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,rEnSNF2以每羽鸡200μg的免疫剂量保护效果最好,与未免疫未攻虫组相比,重组蛋白rEnSNF2能降低病变记分与卵囊产量,提高存活率,并能诱导机体产生特异性抗体。(本文来源于《扬州大学》期刊2018-04-01）
陈琳,余海翔,张忠明[6]（2018）在《运用Gibson克隆技术构建蒺藜苜蓿成熟根瘤的酵母AD-cDNA文库》一文中研究指出以蒺藜苜蓿(A17)的成熟根瘤为材料,联合应用Gibson克隆技术和SMART cDNA技术构建cDNA文库,其转化效率达到7.74×10~5cfu/3μg pGADT7-Rec-New。随机菌落PCR检测结果表明,插入DNA片段的大小为0.5~2.0kb,其中插入片段>0.75kb的占45.6%,文库的重组效率达到91.7%,构建的cDNA文库以质粒形式保藏备用。采用此法不仅可以构建用于酵母单杂交或双杂交的文库,同样也适用于其他质粒文库的构建。利用酵母单杂交技术,以在根瘤中高表达基因启动子元件为诱饵,筛选构建的文库,得到拟似与DNA互作的蛋白质。(本文来源于《华中农业大学学报》期刊2018年02期）
姚健,陈庆隆,钟国祥,马吉平,桂伦[7]（2018）在《牛瘤胃宏基因组文库来源的新型木聚糖酶基因的克隆、表达及酶学性质》一文中研究指出为了从牛瘤胃的微生物中获取新型的木聚糖酶,采用直接法提取牛瘤胃内容物微生物总DNA,构建宏基因组文库,通过功能驱动法筛选得到1个木聚糖酶基因(yh-1),该基因大小为987 bp,编码329个氨基酸;SDS-PAGE电泳分析YH-1的相对分子量为36.2 kDa,该酶的最适反应温度和最适反应pH是50℃和8.0~8.5;该酶有较强的温度稳定性,50℃条件下保温60 min,仍保留90%以上的剩余酶活性,65~75℃保留80%以上的剩余酶活性;2 mmol/L Zn~(2+)、Na~+、Co~(2+)和Ni~(2+)对该酶具有一定的激活作用;经过24 h的处理后,该酶可以从玉米芯、稻草和甘蔗叶中分别获得0.014、0.381和0.19 mg的还原糖。上述特征使得该酶在烘焙体系以及其他领域具有广泛的应用前景。(本文来源于《微生物学杂志》期刊2018年01期）
赵辉,张帅,雒珺瑜,张利娟,王爱英[8]（2017）在《16S rDNA克隆文库方法分析中华通草蛉共生细菌组成》一文中研究指出中华通草蛉chrysoperla sinica(Tjeder)是农田生态系统中重要的捕食性天敌,为探索内生菌与宿主取食和生殖生理关系,本研究采用16S r DNA克隆文库的方法探究了中华通草蛉成虫内生菌的组成,分析了雌、雄成虫体内内生菌菌群结构是否存在差异。研究结果表明,中华通草蛉内生菌主要分3大类群:γ变形菌γ-Proteobacteria、α变形菌α-Proteobacteria和β变形菌β-Proteobacteria。按照属划分,中华通草蛉成虫共生细菌主要包含沃尔巴克氏体Wolbachia sp.、立克次氏体Rickettsia sp.、肠杆菌属Enterobacter sp.、免培养细菌Methyloversatilis sp.、沙雷氏菌Serratieae sp.、泛生菌属Pantoea sp.和欧文氏菌Erwinia sp.。仅在雌虫中存在Cosenzaea sp.,雄虫中存在醋酸杆菌属Acetobacter sp.、Asaia sp.、Rosenbergiella sp.、柠檬酸杆菌属Citrobacter sp.。得到中华通草蛉内生菌的优势菌群为沃尔巴克氏体Wolbachia pipientis,在雌、雄成虫中分别占23.2%和18.4%。结果证明中华通草蛉存在多种内生菌,雌、雄群体间存在差异。(本文来源于《中国生物防治学报》期刊2017年06期）
任禛,尹敏,夏体渊,陈泽斌,尹利方[9]（2017）在《玫瑰根系AMF 18S rRNA基因克隆文库构建及分析》一文中研究指出【目的】本文研究了玫瑰根系的AMF多样性和组成结构。【方法】从昆明学院种质资源圃随机采集玫瑰‘卡罗拉’3株,采用CTAB法提取根系DNA,运用巢式PCR扩增AM真菌部分18S rRNA基因区域,扩增产物混合后构建克隆文库,最终确定30个阳性克隆子测序,并对文库进行评价和分析。【结果】文库Coverage C值为80%,但Rarefaction曲线不够饱和,应加大文库克隆子数目;文库多样性参数香农指数和辛普森指数分别为1.432和0.25,物种丰富度为4.0;以98%为界,30条序列被划分为15个OTU,均为Glomus的种类;其中OTU1是文库中的主要类型,OTU2~OTU9代表了常见类型,而OTU10~OTU15为稀有类型;有10个OTU在系统进化树上单独聚类,代表着Glomus较为新颖的种类。【结论】在玫瑰根系发现的15个OTU全为Glomus的种类,其中主要类型1种,常见类型8种,稀有类型6种,具体分类地位均不清楚。(本文来源于《西南农业学报》期刊2017年09期）
唐乐丽,王晓萌,吴秀玲,黄庆,李荷[10]（2018）在《宏基因组文库新型β-葡萄糖苷酶的筛选、克隆及酶学性质分析》一文中研究指出利用宏基因组文库方法,通过功能筛选法从文库中筛选到一个新型β-葡萄糖苷酶基因bgl2238(Gen Bank:KU320675.1),对新基因进行生物信息学分析和原核表达,并研究其酶学性质。结果表明,该基因全长2 238 bp,可编码745个氨基酸,通过氨基酸序列分析,预测bgl2238蛋白分子质量为80.67 k Da,p I值为4.95,是一种结构较稳定、疏水性高且无信号肽序列的酸性蛋白质;经同源性分析,发现其与来源于Bacteroides thetaiotaomicron的β-葡萄糖苷酶具有58%的相似性,属于GH3超家族和GH3C超家族酶。将重组质粒p ET-32a(+)-bgl2238转化入Escherichia coli BL2l(DE3)细胞进行异源表达,酶学性质测定结果显示,以对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenyl-β-D-glucopyranoside,p NPG)为底物,β-葡萄糖苷酶bgl2238最适反应p H值和温度分别为6.10、44℃,此时该酶最大比活力达到29.1 U/mg;且在4~50℃范围内,热处理β-葡萄糖苷酶bgl2238 4 h后仍保留70%以上的酶活力,热稳定性较好;其动力学参数Vmax为576?μmo L/(L·min),Km为0.296 mmol/L;不同浓度的K+、Na~+、Fe~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)、Co~(2+)和Ni~(2+)对酶活力均有较大促进作用,其中Fe~(2+)对bgl2238酶活力的促进作用最大,10 mmol/L Fe~(2+)使相对酶活力高达260%,而重金属离子Ag~+、Hg~(2+)及Cu~(2+)对酶活力有抑制作用。bgl2238具有良好的酶学性质,可以尝试应用于工业上纤维素降解的生产。(本文来源于《食品科学》期刊2018年04期）
克隆文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】通过宏基因组技术获取土壤微生物总DNA,运用基因克隆、功能筛选、基因表达等手段挖掘新型β-葡萄糖苷酶,为新型微生物资源的开发利用提供科学依据。【方法】提取高糖土壤宏基因组DNA,构建宏基因组文库;筛选文库并对阳性克隆子亚克隆,获得β-葡萄糖苷酶基因;PCR扩增目的基因,以pSE380为表达载体构建重组质粒,转化至大肠杆菌进行表达;采用镍亲和层析对重组酶纯化,研究其酶学性质。【结果】成功构建约含9.2万个克隆的高糖土壤宏基因组文库,获得一个新型β-葡萄糖苷酶基因unbgl3A。该基因大小为2241 bp,在氨基酸水平上,与Gen Bank数据库中已知β-葡萄糖苷酶的一致性为73%;该酶最适pH为6.0,最适温度为50℃,对对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)的K_m值为6.45 m M,V_(max)为50μmol/(mg·min)。在15～50℃热处理1 h后仍保留90%以上的酶活力,热稳定性较好,且被多种糖激活。【结论】宏基因组技术是获取新酶有效手段,获得的Unbgl3A具有良好酶学性质,可为进一步挖掘其应用潜力及研究耐热机理奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆文库论文参考文献
[1].胡蝶,皮之云,张志荣,陈燕祥,邢豫明.运用18SrDNA克隆文库检测滇池硅藻种群多样性[J].法医学杂志.2019
[2].陆坚,路卫卫,李伟亮,郭晓敏,杜丽琴.高糖土壤宏基因组文库β-葡萄糖苷酶基因克隆表达及酶学性质分析[J].西南农业学报.2018
[3].万真真.16SrDNA克隆文库法分析油藏细菌群落结构多样性[J].安庆师范大学学报(自然科学版).2018
[4].胡蝶.18SrDNA克隆文库联用扫描电镜检测滇池水域硅藻种群多样性研究[D].昆明医科大学.2018
[5].马艺飞.毒害艾美耳球虫子孢子cDNA文库筛选及SNF2基因克隆表达与功能研究[D].扬州大学.2018
[6].陈琳,余海翔,张忠明.运用Gibson克隆技术构建蒺藜苜蓿成熟根瘤的酵母AD-cDNA文库[J].华中农业大学学报.2018
[7].姚健,陈庆隆,钟国祥,马吉平,桂伦.牛瘤胃宏基因组文库来源的新型木聚糖酶基因的克隆、表达及酶学性质[J].微生物学杂志.2018
[8].赵辉,张帅,雒珺瑜,张利娟,王爱英.16SrDNA克隆文库方法分析中华通草蛉共生细菌组成[J].中国生物防治学报.2017
[9].任禛,尹敏,夏体渊,陈泽斌,尹利方.玫瑰根系AMF18SrRNA基因克隆文库构建及分析[J].西南农业学报.2017
[10].唐乐丽,王晓萌,吴秀玲,黄庆,李荷.宏基因组文库新型β-葡萄糖苷酶的筛选、克隆及酶学性质分析[J].食品科学.2018
论文知识图
