导读:本文包含了牛精子论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:精子,胚胎,牛磺酸,蛋白质,磷酸化,藏红花,体细胞。
牛精子论文文献综述
任红贺,李晓霞,曹平华,禹学礼,张志阳[1](2019)在《不同抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响》一文中研究指出为探讨褪黑素、亚牛磺酸、左旋肉毒碱叁种抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响,将荷斯坦牛细管冻精解冻后,各取200μL精液分别添加在含10~(-4) M褪黑素(MLT)、20μM亚牛磺酸(HT)、10 mM左旋肉毒碱(LC)的获能液中,经上游处理45 min,采用目测法、金霉素(CTC)染色法评估叁种抗氧化剂对牛精子活力、精子获能状态的影响。结果表明:添加10~(-4) M MLT、20μM HT、10 mM LC经上游法获能处理后的牛精子活力(83.67%、80.65%、75.00%vs 66.67%)均显着高于对照组(P<0.05),而顶体反应率(9.87%、10.09%、14.30%vs 18.73%)均显着低于对照组(P<0.05)。另外,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT组获能处理后B型精子所占比率(37.26%、29.84%vs 16.26%)均显着高于对照组(P<0.05),且10 mM LC组精子获能率最高;而20μM HT组与对照组无明显差异(22.80%vs 16.26%,P>0.05)。因此,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT可改善精子体外获能效果,有助于提高体外受精的受精率及早期胚胎的质量。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年11期)
周凌博,李继仁,李强[2](2019)在《褪黑素对湘中黑牛精子特性及体外胚胎发育的保护作用》一文中研究指出本文旨在探讨褪黑素对湘中黑牛精子特性及体外胚胎发育的保护作用,通过不同浓度的褪黑素处理精子,测定冻融湘中黑牛精子运动指标参数,然后用褪黑素处理过的精子用于体外受精,随后分析胚胎发育和凋亡率以及抗氧化相关基因的表达。结果发现10~(-5)和10~(-3) mol/L褪黑素可显着提高质膜完整性、线粒体的活性和顶体完整性,降低了细胞内的活性氧水平(P<0.05),10~(-3) mol/L组褪黑素处理的精子体外培养囊胚数显着高于其他组,细胞凋亡率显着低于其他组(P<0.05)。10~(-5)和10~(-3) mol/L组Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因转录水平显着低于对照组,10~(-3)组B细胞淋巴瘤2(Bcl2)、过氧化氢酶(Cat)转录程度显着高于对照组(P<0.05)。表明褪黑素能够改善牛冻融精液的质量,提高体外胚胎发育保护作用。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年11期)
海超,张洁,刘春丽,李欣,张媛[3](2019)在《样品前处理对牛精子全蛋白质组鉴定的影响》一文中研究指出本文主要分析样品前处理对牛精子全蛋白质组鉴定的影响,文中对5种不同的蛋白质提取液和3种不同的酶解方法进行了系统地分析比较.5种蛋白质提取液:溶液BS(4%SDS,0.1mol/L Tris-HCl,0.1mol/L DTT);溶液BU(8mol/L Urea,0.1mol/L Tris-HCl);溶液BT(7mol/L Urea,2mol/L Thiourea,0.1mol/L Tris-HCl,0.4%Chaps);溶液BR(购自Thermo,货号89901);溶液BD(2%SDC,50mmol/L NH4HCO3,25mmol/L NaCl).3种酶解方法:溶液内酶解、胶内酶解以及膜上酶解(FASP).实验结果显示:牛精子蛋白质提取能力BS最强,BU最弱;BT、BR以及BD相当.BS-FASP不适用于牛精子蛋白质组学研究.胶内酶解鉴定到的蛋白质均多于FASP法,但是胶内酶解操作过程复杂繁琐,耗时长.基于BD的溶液内酶解法鉴定到的蛋白质数量最多,膜蛋白提取鉴定能力较强,且操作时间最短,是较为理想的方法.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期)
孟杨[4](2019)在《CLC对冻融牛精子质量参数及抗氧化、抗凋亡的影响》一文中研究指出冷冻保存可以延长精子的保存时间,但是冷冻过程中会使精子的细胞和生理学结构发生一系列的变化从而受到一定程度的损害,包括精子获能的特征、精子寿命以及卵母细胞的相互作用和受精能力等。精液的冷冻保存就是利用干冰(-79℃)、液氮(-196℃)或者其它制冷的设备作为冷源,将精液经过特殊的处理之后,保存在极低的温度下,完全的抑制了精子的代谢活动,使得精子处于休眠状态,待升温后复苏,并且不失去受精的能力,从而使得精子达到了长期保存的方法。本试验的目的是探究添加包埋胆固醇的甲基-β-环糊精(CLC)对牛冷冻精子质量参数、抗氧化及抗凋亡能力的影响。试验分对照组(0mg/ml)和不同剂量 CLC 处理组(0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml),分别测定冻融后牛精子的质量参数、蛋白的酪氨酸磷酸化、抗氧化基因以及细胞凋亡基因的表达。试验结果如下所示:1.在精液稀释液中添加不同浓度的CLC处理组(0mg/ml、0.5mg/ml、1.0 mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml)。放入液氮中进行保存,保存5h以上,检测出精子的活力与质膜完整性,顶体膜的完整性均有不同程度的减弱。不同处理组之间无明显差异。2.对照组(0mg/ml)冻融后获能及处理组(0mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5 mg/ml、2.0 mg/m1)冻融后牛精子进行顶体膜蛋白分离、蛋白含量测定,并用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果表明:顶体蛋白在32KDa处可以看出0.5 mg/ml最接近获能处理的精子。3.对于不同处理组(0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml)先进行总RNA的提取,随后进行反转录和RNA浓度的测定,根据引物设计和引物序列的参照表,随后进行PCR的目的基因扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳,最后对抗氧化基因表达量的检测结果进行分析。结果表明:在CAT、GPx、SOD基因的表达量条带上显示0.5mg/ml和1.0mg/ml均显着高于对照组(P<0.05)。而在1.0mg/ml处显示表达量最高。4.对于不同处理组(0mg/ml、0.5 mg/ml、1.0mg/ml、1.5 mg/ml、2.0mg/ml)先进行总RNA的提取,随后进行反转录和RNA浓度的测定,根据引物设计和引物序列的参照表,随后进行PCR的目的基因扩增,然后进行琼脂糖凝胶电泳,最测结果进行分析。后细胞调亡基因的检结果表明:在Caspase-3、Caspase-8和BAX基因的表达量条带上显示0.5 mg/ml和1.0 mg/ml均显着低于对照组(P<0.05)。在0.5mg/ml处理组处最低。(本文来源于《延边大学》期刊2019-05-18)
朱婉婉[5](2019)在《牛精子发生过程中甲基化分析及干细胞向精子诱导分化的研究》一文中研究指出研究牛精子发生过程中的DNA甲基化,寻找与精子发生相关的基因,结合干细胞的体外培养与诱导,建立体外诱导干细胞分化形成功能性生殖细胞的完整体系,从而推进畜禽遗传育种、品种改良以及转基因品种的培育。精子发生包括有丝分裂、减数分裂和精子形成叁个阶段,该过程中DNA甲基化起重要作用。DNA甲基化的正常表达调控精子的正确发生,而其异常表达则造成精子功能的异常。本研究通过激光显微切割技术获取牛精子发生过程中四种不同类型的细胞,研究精子发生过程中DNA甲基化的变化,筛选功能性基因;在体外成功分离培养和鉴定牛睾丸间充质干细胞,并使用维甲酸(Retinoic Acid,RA)诱导其向减数分裂前期分化,旨在鉴定体外诱导牛睾丸间充质干细胞向生殖细胞分化的可行性。通过激光显微切割系统,成功获取精原干细胞、初级精母细胞、圆形精子细胞和长形精子细胞,进行单细胞全基因组甲基化测序分析。研究结果表明,精子发生过程中DNA甲基化水平呈动态变化:精原干细胞到初级精母细胞呈高甲基化趋势;初级精母细胞到圆形精子细胞则是高甲基化与低甲基化交叉出现;圆形精子细胞到长形精子细胞则再次表现出高甲基化状态,揭示DNA甲基化对精子发生过程具有调控作用。差异甲基化区域(Differentially methylated regions,DMR)相关基因筛选发现,DNA水平差异最明显的初级精母细胞与精原干细胞组中存在16134个差异基因,圆形精子细胞与初级精母细胞对比组中存在91个DMR相关基因;长形精子细胞与圆形精子细胞对比组中存在97个DMR相关基因。其中,初级精母细胞与精原干细胞组存在多种泛素-蛋白连接酶相关基因(TRI11、SH3R1、ZNRF1、MARH8)和组蛋白-赖氨酸-甲基转移酶相关的基因(KMT2C、EHMT1、SMYD3、NSD3),表明在精子发生过程中泛素-蛋白连接酶可能发挥重要作用,且DNA甲基化与组蛋白修饰保持密切联系。DMR相关基因KEGG分析表明,初级精母细胞与精原干细胞对比组间,Rap1信号通路在调节生殖细胞-支持细胞粘附中具有重要作用,可能是精子发生过程中重要的信号通路。体外成功分离培养牛睾丸间充质干细胞,RT-PCR鉴定该细胞表达CD105、CD166,流式细胞分析鉴定该细胞表达CD44、CD90、CD166且阳性率均在98%以上;克隆形成能力鉴定表明该细胞在体外具备自我更新的潜能;成功诱导为脂肪细胞和成骨细胞,表明该细胞在体外具备多向分化潜能;并使用RA诱导该细胞进入减数分裂阶段。因此可以选取牛睾丸间充质干细胞为研究对象,结合筛选获取的差异基因,在体外研究其向生殖细胞的诱导分化,为建立完整的体外诱导干细胞分化形成生殖细胞奠定基础。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01)
高绘杰[6](2019)在《藏红花素对冻融牛精子的获能及质量参数的影响》一文中研究指出精子冷冻保存是人工授精技术的必要手段之一,在生产进程中,精子冷冻保护剂的成分是至关重要的。蛋白质酪氨酸磷酸化是判断精子是否获能的指标之一。在精子获能过程中产生的ROS,当ROS积累一定水平时会产生氧化应激反应。为了防止氧化应激,减少对精子的冷冻损伤或阻止过早精子成熟,在冷冻保护剂中添加抗氧化剂补充剂可以提供对潜在ROS聚集有着增强保护的作用。研究发现,藏红花素(crocin)是一种有效的抗氧化剂,具有降低脂质过氧化,线粒体和溶酶体膜损伤的能力,类似于保护剂。本试验的目的是研究藏红花素作为冷冻保护剂的成分对牛精子的获能及质量的影响以及相关抗氧化基因及凋亡基因表达量的影响。在精子冷冻保护剂中添加0、0.5、1、15、2mM的crocin,进行冷冻两周,在解冻后,进行检测精子CASA检查、低渗肿胀实验、考马斯染色试验来以及CASA辅助仪器测得的精子活力指标,浓度在0.5mM时精子形态质量及运动质量与对照组不明显差别,但在处理组中效果最好(P<0.05);评估冷冻-解冻后的精子获能后蛋白质酪氨酸磷酸化水平,其蛋白量为35kDa,crocin(0.5mM)是酪氨酸磷酸化水平最高的(P<0.05),但与对照组差异不明显;在相关抗氧化基因中,crocin(0.5mM)MAD、CAT和GPX的mRNA表达量最高,在相关凋亡基因中,crocin(0.5mM)Caspase-3,TNF-amRNA表达量最低(P<0.05),Caspase-8表达量与对照组差异不不显着但着低于其他处理组。综上所述,添加藏红花素能够提高精子的抗氧化性减少细胞凋,且对精子质量没有明显的损伤,同时有助于精子获能。(本文来源于《延边大学》期刊2019-03-29)
李晓霞,曹平华,禹学礼,栗颖华[7](2018)在《添加咖啡因、亚牛磺酸对牛精子功能的影响》一文中研究指出为研究获能液中添加咖啡因和亚牛磺酸对牛精子功能的影响,本研究将荷斯坦牛冻精解冻后分别添加在含不同浓度咖啡因(0、2.5、5.0、7.5mmol/L)或亚牛磺酸(0、5、10、20、40μmol/L)的获能处理液中,且每个处理组加入约200μL的精液,在CO_2培养箱里经上游处理45min,以评估咖啡因和亚牛磺酸对牛精子活力、顶体及质膜完整性的影响,进而探讨在获能液中亚牛磺酸替代咖啡因的效果。结果显示,添加2.5、5.0mmol/L咖啡因组经上游法获能处理后的牛精子活力和顶体完整率均显着高于对照组(P<0.05),且2.5mmol/L咖啡因组精子活力最高;添加10、20μmol/L亚牛磺酸组经上游法获能处理后的牛精子活力、顶体完整率和质膜完整率均显着高于对照组(P<0.05),且20μmol/L亚牛磺酸组的精子功能参数值最高;将筛选的最佳浓度2.5 mmol/L咖啡因和20μmol/L亚牛磺酸采用同样的方法处理,发现20μmol/L亚牛磺酸组的精子顶体完整率和质膜完整率均显着高于2.5mmol/L咖啡因组和对照组(P<0.05)。因此,20μmol/L亚牛磺酸可以替代2.5mmol/L咖啡因用于体外受精体系中的精子获能处理,有助于提高精子功能参数。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年08期)
张颖[8](2018)在《牛精子miRNAs对核移植胚胎发育的影响》一文中研究指出体细胞核移植技术(somatic cell nuclear transfer,SCNT)虽然展现出广泛的应用前景,但效率低下是制约该项技术在生产实践中应用的瓶颈。课题组前期基础研究中显示,体细胞核移植胚胎与体外受精胚胎的第一次卵裂时间存在差异,早期SCNT胚胎中α-tubulin乙酰化水平、组蛋白H3K9me3甲基化水平存在异常。因此,寻找影响克隆胚胎发育的调控因子一直是该研究领域的热点。最近,越来越多的研究发现精子来源的一些非遗传物质对早期胚胎发育至关重要,这些物质的缺失可能是导致SCNT胚胎发育异常的一个重要原因。本试验利用一站式mi RNAs分离试剂盒分离了牛精子中的miRNAs,并将提取的精子mi RNAs注入SCNT胚。结果显示实验组SCNT胚胎第一次卵裂发生时间较对照组晚,并且囊胚质量得到改善。为了进一步研究SCNT和体外受精胚胎(IVF)之间由精子mi RNAs引起的首次卵裂时间差异的机制,本试验采用免疫荧光染色的方法,从核和胞质两方面检测了补充精子miRNAs对克隆SCNT胚胎的胞质骨架蛋白和DNA组蛋白重塑的影响。结果表明,精子mi RNAs注射后,SCNT胚胎在原核期和2-细胞时期核的H3K9me3甲基化水平显着降低,第一次卵裂的后期和末期骨架蛋白α-tubulin乙酰化水平显着升高;与对照组相比,补充精子miRNAs组胚胎两个原核样结构形成率和48 h卵裂率显着提高,第一次卵裂时间延长,第7天囊胚率显着升高,且囊胚内细胞凋亡显着降低。这些结果暗示精子miRNAs可能同时通过影响胚胎胞质骨架蛋白和DNA组蛋白表观修饰来调控胚胎第一次卵裂和胚胎发育。本研究表明原核期中发生的一系列发育事件对早期SCNT胚胎后续发育非常关键,精子miRNAs对这一时期的胚胎发育事件可能起着重要的调控作用。本研究的开展为提高SCNT效率提供了新思路。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01)
大德(RAHIM,DAD,BROHI)[9](2017)在《SUMO-1在牛精子中定位与表达及潜在靶蛋白的初步筛选》一文中研究指出公牛繁殖能力及公牛选育对畜牧行业养牛生产非常重要。因此,对公牛精子发生、精子成熟及精液品质调控机制的研究可以为提高公牛繁殖性能提供重要的理论参考。成熟精子中DNA高度浓缩,导致转录和翻译过程沉默。因此翻译后修饰方式对精子功能包括卵母细胞受精过程中精子获能和顶体反应具有重要调节作用。SUMO化修饰是重要的蛋白质翻译后修饰方式之一,参与调节多种生物学功能。为了初步阐明SUMO化修饰在水牛和奶牛精子成熟过程、获能及顶体反应过程中的可能作用。本课题对水牛和奶牛精子中SUMO-1的亚细胞定位和表达情况进行了研究;并通过免疫蛋白印迹、免疫共沉淀化和质谱法对SUMO-1在精子中潜在的靶蛋白进行了初步鉴定;通过生物信息学方法初步分析了其功能和参与调控途径;通过SUMO化修饰预测靶蛋白软件初步预测了所筛选到蛋白的潜在SUMO-1修饰位点。研究结果如下。(1).免疫荧光方法检测了 SUMO-1在水牛和奶牛精子中的定位和表达。证实SUMO-1的免疫信号主要集中在顶体中。另外,免疫印记结果发现钙离子载体A23187诱导精子发生顶体反应后,SUMO-1表达模式发生变化。精子获能后,130, 37和27 kDa附近SUMO-1结合蛋白条带强度下降,在30, 85和50 kDa附近条带增强。此外,精子获能后诱导发生顶体反应后,37 kDa条带下降,25 kDa以下条带消失。这些结果暗示精子获能和顶体反应过程中精子中SUMO-1介导的SUMO化修饰方式可能发生了变化,这些改变可能与精子获能和顶体反应的调控有关。(2).质谱方法检测了水牛精子中与SUMO-1共价结合蛋白成份。初步鉴定出包括维持精子形态和运动能力的60个蛋白,如松弛素受体和细胞骨架蛋白包括微管、微丝和动力蛋白。其中46个蛋白被SUMO化靶蛋白预测软件预测为SUMO化修饰的靶蛋白。总之,本研究结果发现SUMO-1在水牛和奶牛精子中存在,且在精子获能和顶体反应过程中表达模式改变,为研究SUMO-1在牛精子成熟、获能和顶体反应过程中的SUMO化修饰及其调控作用提供了重要理论参考。质谱法所鉴定的潜在SUMO化修饰蛋白,对理解精子功能维持过程中的SUMO化调控作用和机制提供重要参考,但是未来还需要进一步对这些潜在靶蛋白的SUMO化修饰情况进行深入鉴定和功能分析。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01)
高阳[10](2016)在《牛精子miR-202对早期胚胎发育影响的初步研究》一文中研究指出精子是一类功能十分特化的细胞,传统认为精子的作用主要是作为父源性遗传物质的载体以及激活胚胎受精后发育。研究发现在受精过程中,精子进入卵母细胞时带入了mRNAs、microRNAs、tRNAs以及siRNAs等物质,它们对雌雄原核形成、卵母细胞激活、卵裂球分裂时空顺序、胚胎发育能力以及后代表型等都有着重要影响。而microRNA是在真核生物中发现的一类内源性且具有调控功能的单链非编码RNA,主要通过与靶基因3?-UTR区进行碱基配对来降解或者抑制靶基因的表达。已有报道精子带入卵母细胞内的microRNA对于胚胎发育有着重要的调控作用,然而精子microRNA在受精作用和胚胎发育中的功能仍然未知。因此,系统的研究受精过程中精子带入卵母细胞的microRNA将有助于完善我们对早期胚胎发育的认识。课题组利用新一代高通量测序技术分别构建了牛成熟精子、MⅡ期卵母细胞和牛成纤维细胞的small RNA文库,并且通过实时定量PCR的方法进行了验证。通过生物信息学方法,筛选出精子特异性且高表达的microRNA:Bta-miR-202,通过在线数据库预测并取交集,在NCBI上查找基因序列,发现有与Bta-miR-202结合的种子序列,从这些序列中我预测了13个候选靶基因。通过构建双荧光素酶报告载体和表达载体,进行双荧光素酶报告实验后发现SEPT7基因的野生型3?-UTR区域受到miR-202 mimic的抑制;在3?-UTR区域上进行点突变后,mi R-202 mimic对SEPT7突变的3?-UTR区域抑制程度减弱;通过定量PCR发现miR-202mimic可以降低SEPT7基因转录的mRNA水平,通过Western Blot确定miR-202能抑制SEPT7基因的翻译。综合双荧光素酶报告实验、实时定量PCR和Western Blot的实验结果可以得出:SEPT7基因是mi R-202的靶基因。将miR-202通过显微注射的方法注入卵母细胞内,发现卵裂率较对照组显着提高,SEPT7表达量下调。孤雌及体外受精胚胎各时期定量发现,受精后SEPT7的表达量较MⅡ期以及孤雌激活后的胚胎会有一个极显着的下调;在体外受精各时期中,SEPT7和mi R-202的表达量呈负相关,推测两者可能存在负反馈调节机制。总之,本研究梳理了精子特异性且高表达的microRNA,并通过一系列生物信息学手段以及分子手段预测并验证了miR-202的靶基因:SEPT7。通过显微注射发现miR-202对卵裂有重要影响,而定量结果也显示,SEPT7在受精后的胚胎中有显着变化,两者可能存在负反馈调节机制。本研究表明精子中特异性且高表达的miR-202对早期胚胎发育具有重要影响。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-05-01)
牛精子论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文旨在探讨褪黑素对湘中黑牛精子特性及体外胚胎发育的保护作用,通过不同浓度的褪黑素处理精子,测定冻融湘中黑牛精子运动指标参数,然后用褪黑素处理过的精子用于体外受精,随后分析胚胎发育和凋亡率以及抗氧化相关基因的表达。结果发现10~(-5)和10~(-3) mol/L褪黑素可显着提高质膜完整性、线粒体的活性和顶体完整性,降低了细胞内的活性氧水平(P<0.05),10~(-3) mol/L组褪黑素处理的精子体外培养囊胚数显着高于其他组,细胞凋亡率显着低于其他组(P<0.05)。10~(-5)和10~(-3) mol/L组Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因转录水平显着低于对照组,10~(-3)组B细胞淋巴瘤2(Bcl2)、过氧化氢酶(Cat)转录程度显着高于对照组(P<0.05)。表明褪黑素能够改善牛冻融精液的质量,提高体外胚胎发育保护作用。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛精子论文参考文献
[1].任红贺,李晓霞,曹平华,禹学礼,张志阳.不同抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响[J].家畜生态学报.2019
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[10].高阳.牛精子miR-202对早期胚胎发育影响的初步研究[D].西北农林科技大学.2016