锌指核酸酶介导的陆川猪Fat1基因打靶载体构建及体外转基因研究

论文摘要

秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans） Fat1基因翻译产物是ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,哺乳动物因为缺少这个基因,不能将ω-6多不饱和脂肪酸转化为ω-3多不饱和脂肪酸,因此只能通过饮食获得ω-3多不饱和脂肪酸,以保证ω-6/ω-3的平衡,满足机体的健康所需。为获得整合了Fat1基因且能稳定表达的转基因猪（Sus scrofa）,本实验采用锌指核酸酶（zinc finger nuclease, ZFN）介导的多位点打靶技术从细胞水平上开展了转基因技术的研究。首先构建了陆川猪Fat1基因打靶载体pCAGGS-DS2-eGFP-Fat1-DS1,并设计和构建了两个靶向陆川猪r DNA基因中内转录间隔区1 （internal transcribed spacer-1, ITS-1）序列的锌指核酸酶真核表达载体pcDNA3.1-NLS-ZFN-R和pcDNA3.1-NLS-ZFN-L。然后从猪的肾脏中成功分离出原代成纤维细胞（primary kidney fibroblast, PKF）,通过脂质体共转染将Fat1基因打靶载体和锌指核酸酶载体导入细胞,转染细胞7 d后,提取细胞基因组DNA,PCR检测外源基因整合情况,结果表明Fat1基因成功整合到陆川猪PKF细胞基因组中,本研究为进一步获得转基因猪提供了一定的理论依据。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄幸,严爱芬,邓廷贤,欧阳宏佳,刘连,冯娟,朱向星,聂庆华,唐冬生,张细权

关键词: 基因打靶,锌指核酸酶,转基因

来源: 农业生物技术学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 华南农业大学动物科学学院,佛山科学技术学院广东省基因编辑工程技术研究中心

基金: 国家科技重大专项(No.2009ZX08010-023B),广东省重点领域研发计划(No.2018B020203003),佛山市科技创新项目计划(No.2017AG100111)

分类号: Q78;S828

页码: 1369-1381

总页数: 13

文件大小: 5200K

下载量: 205

相关论文文献

• [1].小鼠性激素结合球蛋白条件基因打靶载体的构建[J]. 中国医科大学学报 2015(03)
• [2].通用型基因打靶载体的构建及其功能鉴定[J]. 生物工程学报 2008(10)
• [3].小鼠肌肉抑制素基因打靶载体的构建(英文)[J]. Agricultural Science & Technology 2012(06)
• [4].小鼠肌肉抑制素基因打靶载体的构建[J]. 安徽农业科学 2012(19)
• [5].绵羊FecB基因打靶载体构建[J]. 畜牧与兽医 2011(07)
• [6].水牛Fat1基因打靶载体的构建[J]. 畜牧与兽医 2012(09)
• [7].小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定[J]. 实验动物科学 2010(04)
• [8].山羊β-乳球蛋白基因打靶载体的构建[J]. 中国农业科学 2011(11)
• [9].基于博来霉素抗性筛选的核糖体DNA通用基因打靶载体平台的构建[J]. 暨南大学学报(自然科学与医学版) 2017(03)
• [10].牛β-酪蛋白座位无启动子基因打靶载体的构建[J]. 华北农学报 2010(04)
• [11].基础型无启动子基因打靶载体pMCS-IEN的构建及初步检测[J]. 农业生物技术学报 2015(07)
• [12].人白介素-2基因打靶载体的构建、转染及鉴定[J]. 中国农业大学学报 2011(05)
• [13].小鼠ADAM10条件性基因打靶载体的构建与鉴定[J]. 中国优生与遗传杂志 2009(12)
• [14].Myostatin基因打靶载体的构建及猪胎儿成纤维细胞Myostatin基因的敲除[J]. 生物技术通讯 2010(05)
• [15].利用Red重组系统快速构建基因打靶载体[J]. 中国生物工程杂志 2011(10)
• [16].高效率基因打靶载体的构建及受体成肌细胞的制备[J]. 吉林大学学报(理学版) 2009(06)
• [17].Neuritin条件性基因打靶载体的构建和同源重组胚胎干细胞克隆鉴定[J]. 动物医学进展 2019(04)
• [18].大肠杆菌Targetron基因打靶载体构建及应用[J]. 贵州医科大学学报 2019(07)
• [19].利用CRISPR/Cas9系统构建猪MUC4和SLC12A8基因打靶载体[J]. 农业生物技术学报 2020(07)
• [20].利用新型DNDF7和携带LoxP位点的LPL4质粒快速构建S-Sox5基因打靶载体[J]. 中国男科学杂志 2015(09)
• [21].人CCL20基因打靶载体的构建与鉴定[J]. 现代生物医学进展 2009(01)
• [22].利用Red同源重组系统构建兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因打靶载体[J]. 中国生物工程杂志 2008(09)
• [23].绒山羊FGF5基因打靶载体的构建[J]. 生物技术 2015(01)
• [24].炭样小单孢菌JXNU-1基因打靶载体的构建[J]. 基因组学与应用生物学 2019(06)
• [25].基于同源重组的产绿色荧光蚕丝转基因家蚕的制备[J]. 蚕业科学 2013(04)
• [26].通用型基因打靶载体的构建及其功能鉴定[J]. 农业生物技术学报 2014(04)
• [27].腺相关病毒介导的小鼠prnp基因打靶载体构建[J]. 江西农业学报 2008(05)
• [28].山羊MSTN基因打靶载体的构建与鉴定[J]. 畜牧与兽医 2012(04)
• [29].MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用[J]. 中国医科大学学报 2012(12)
• [30].AAV载体的最新研究进展[J]. 现代生物医学进展 2008(11)

标签：基因打靶论文;  锌指核酸酶论文;  转基因论文;