一、心包积水综合征的灭活疫苗（论文文献综述）
曾辉[1]（2021）在《鸡心包积水综合征的流行病学、临床症状及防控措施》文中提出鸡心包积水综合征是由于感染腺病毒科、禽腺病毒属、C种禽腺病毒的血清4型而发生的一种新型传染病,通常是肉鸡以及育雏、育成期的蛋鸡易发,尤其是3～7周龄的鸡较易发病。急性发病死亡的病鸡不会表现出典型临床症状,少数病鸡会发生腹泻,排出黄绿色稀粪,且发病鸡群很快出现死亡高峰,经过1～2周死亡率逐渐降低。该病往往急性发病,快速传播,病死率往往在30%左右,严重损害养鸡业的经济效益。
张婷[2]（2021）在《不同血清型禽腺病毒Fiber2蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性分析》文中指出禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAdV）包括5个种（A-E种）、12个血清型（1-8a,8b-11）。FAdV有多种血清型在我国鸡群中流行。近年来,血清2型禽腺病毒（FAdV-2）、血清4型禽腺病毒（FAdV-4）、血清8b型禽腺病毒（FAdV-8b）在鸡群内流行趋势愈加严重,给疫病防控带来困难。纤突蛋白2（Fiber2）位于禽腺病毒表面,是禽腺病毒的重要结构蛋白,Fiber2含有与病毒的感染性有关的中和抗原表位,能够识别宿主的特异性受体。利用昆虫杆状病毒表达系统对FAdV-2-Fiber2、FAdV-4-Fiber2、FAdV-8b-Fiber2蛋白进行表达并进一步研究了重组蛋白的免疫原性。本研究根据Gen Bank上收录的FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8b的基因序列,设计含有XholⅠ和K pnl酶切位点的上下游引物,扩增得到FAdV-2-Fiber2、FAdV-4-Fiber2、FAdV-8b-Fiber2编码序列。将其克隆到真核表达载体p Fast Bacdaul中,构建含有FAdV-2-Fiber2、FAdV-4-Fiber2、FAdV-8b-Fiber2的杆状病毒表达供体质粒。将其转化入DH10bac感受态细胞,筛选得到重组杆状病毒质粒。将重组质粒转染到昆虫细胞中获得重组杆状病毒。通过间接免疫荧光验证FAdV-2-Fiber2、FAdV-4-Fiber2、FAdV-8b-Fiber2重组蛋白在杆状病毒感染的昆虫细胞中表达,结果表明成功构建了能够稳定表达Fiber2蛋白的重组杆状病毒。利用超声破碎提取FAdV-2-Fiber2、FAdV-4-Fiber2、FAdV-8b-Fiber2重组蛋白,免疫SPF鸡,制备得到Fiber2重组蛋白的鸡单因子血清。用ELISA检测方法对SPF鸡抗血清检测,结果表明,免疫重组蛋白的鸡血清抗体效价分别为1:4096、1:16384、1:4096,说明获得的重组Fiber2蛋白有很好的免疫原性。病毒中和试验检测重组蛋白抗血清在LMH细胞上中和FAdV的活性,结果表明,三种重组蛋白抗血清的中和效价分别为:1:158、1:133、1:223,说明抗血清能中和FAdV对LMH细胞的感染。利用超声破碎提取FAdV-2-Fiber2、FAdV-4-Fiber2、FAdV-8b-Fiber2重组蛋白,免疫昆明白小鼠,制备得到Fiber2重组蛋白的鼠单因子血清。间接免疫荧光试验测得鼠抗血清在1:200倍稀释时,仍具有较好的活性且特异性良好。综上:本研究成功构建了能够稳定表达Fiber2蛋白的重组杆状病毒,进一步证实了表达的Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。研究结果为FAdV的Fiber2蛋白生物学功能的研究奠定了物质基础,也为FAdV的免疫防控提供科学参考。
宋玲玲,于可响,刘涛,鞠艳,吕俊峰,房立春,吴家强,艾武,袁小远,亓丽红,贺鹏,岳耀辉[3]（2020）在《血清4型禽腺病毒山东株基因组序列的克隆及遗传演化分析》文中认为从山东某地区发生心包积液综合征的发病鸡中收集病料,按常规方法处理后接种SPF鸡胚,分离到1株病毒,经PCR和测序分析鉴定该分离株为Ⅰ群禽腺病毒、血清4型禽腺病毒,命名为FAV-SD。合成引物成功扩增病毒全基因组序列,并进行序列的测定与分析,结果表明FAVSD株全基因组大小为43752 bp,通过hexon基因同源性比对,FAV-SD与我国今年报道的禽腺病毒血清4型同源性最高;遗传进化分析结果表明,FAV-SD分离株与我国禽腺病毒血清4型流行毒株处于同一分支,而与国外禽腺病毒血清4型毒株不在同一分支,存在遗传差异,说明中国流行的血清4型禽腺病毒具有自身地域特点。该病毒株的分离鉴定为禽腺病毒疫苗的研制奠定了基础。
庞洪泽,吴同垒,李蕴玉,闫艳娟,李佩国[4]（2019）在《禽安卡拉病的研究现状》文中研究指明从禽安卡拉病的病原特征、流行病学、诊断方法和疫苗研制等方面对禽安卡拉病的研究现状进行了全面总结,就诊断与免疫预防存在的问题对将来主要的研究方向进行了展望。
徐丹[5]（2019）在《FAdV-4 pcDNA3.1-Penton重组质粒的构建及免疫原性的初步探究》文中认为禽心包积液-肝炎综合征（Hydropericardium-Hepatitis Syndrome,简称为HHS）,主要由Ⅰ群血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus serotype 4,FADV-4）感染所引起,以心包积液、肝组织损伤等为主要特征。该病1987年首次在巴基斯坦安卡拉地区爆发,因此又称之为禽“安卡拉病”。目前该病在世界多个国家均有流行,造成严重影响。2015年,该病在中国许多地区流行,造成雏鸡免疫功能降低,死淘率升高,给中国养禽业带来严重的经济损失。目前为止,对于安卡拉病我国还未有商品化疫苗在临床上使用,因此急需研发有效疫苗来预防此病。五邻体（Penton）蛋白是FADV的主要结构蛋白,具有良好的抗原性和免疫原性,而且高度保守。本试验以Penton基因为研究对象,构建pcDNA3.1-Penton重组质粒,将重组质粒以不同剂量免疫雏鸡,探究其免疫原性,为研制有效安卡拉病疫苗提供相应的理论依据。试验内容及结果如下:1.根据GenBank上FAdV-4 Penton基因序列设计引物,以本实验室保存的FAdV-4阳性病料肝组织DNA为模板,进行Penton基因扩增、纯化,然后将纯化的Penton基因与pMD19-T克隆载体连接,构建pMD19-T-Penton重组质粒,进行HindⅢ和EcoRⅠ双酶切鉴定,然后将Penton基因与pcDNA3.1载体连接,最终成功构建pcDNA3.1-Penton重组质粒。2.本试验共选取90只3日龄健康雏鸡,30只为SPF雏鸡,60只为商品化海兰褐雏鸡,共分6组,每组15只。分组为:SPF雏鸡免疫组和对照组;商品化雏鸡低、高剂量及低剂量佐剂免疫组和对照组,免疫方式为肌肉注射,初次免疫7d后加强免疫一次。初次免疫后每周进行采血,通过ELISA方法检测免疫后血清中FAdV-4抗体水平、白细胞介素6（IL-6）和干扰素γ（IFN-γ）含量,进而评价免疫效果。试验结果显示,pcDNA3.1-Penton重组质粒免疫雏鸡后,免疫组均产生FAdV-4抗体,其中SPF雏鸡免疫组与商品化雏鸡低剂量组比较,血清中FAdV-4抗体差异不显着（P>0.05）,与空白对照组比较差异极显着（P<0.01）;商品化雏鸡低剂量与高剂量组比较,高剂量与低剂量佐剂组比较,差异不显着（P>0.05）;高剂量、低剂量佐剂组与低剂量免疫组比较,差异显着（P<0.05）,免疫组与空白对照组比较,差异极显着（P<0.01）。血清中IFN-γ和IL-6的含量:在7、14和21 d,SPF雏鸡免疫组与商品化雏鸡低剂量组之间差异不显着（P>0.05）,与空白对照组差异极显着（P<0.01）;商品化雏鸡低、高剂量及低剂量佐剂组与对照组比较,差异极显着（P<0.01）;低剂量佐剂组与低、高剂量组之间差异显着（P<0.05）,低剂量、高剂量组之间比较差异不显着（P>0.05）,21 d后,所有免疫组与空白对照组之间差异不显着（P>0.05）。本试验结果表明,构建的pcDNA3.1-Penton重组质粒免疫雏鸡后,机体均能产生FAdV-4特异性抗体,说明构建的pcDNA3.1-Penton重组质粒具有很好的免疫原性,并且弗氏佐剂免疫组与高剂量免疫组产生的FAdV-4特异性抗体均高于低剂量组;与空白对照组比较,各免疫组血清中IFN-γ和IL-6含量均升高,说明pcDNA3.1-Penton重组质粒免疫后,能诱导细胞免疫和体液免疫等相关细胞因子的产生。
范维[6]（2019）在《禽腺病毒Ⅰ群4型纤突蛋白亚单位疫苗效力评价及胶体金试纸条的初步研究》文中指出目的:自2012年以来,鸡包涵体肝炎的暴发呈上升趋势,主要表现为血清4型引起的心包积水和鸡包涵体肝炎。目前,对于4型禽腺病毒抗体快速检测方法比较少,大多数传统检测方法不仅检测复杂,而且不能大规模的应用到生产实践中。对于4型禽腺病毒疫苗的防控,国内尚没有获得许可的商品化禽腺病毒疫苗。因此本实验利用禽腺病毒截短的纤突蛋白作为抗原,由实验室自制亚单位疫苗免疫动物后进行效力评价,为有效防控禽4型腺病毒病提供的新途径,同时利用该蛋白制备禽腺病毒病抗体检测试纸条,为后续禽4型腺病毒病诊断研究提供新方法。方法:通过前期筛选选择对纤突蛋白-2从氨基酸283位到氨基酸479位,获得包含纤突-2抗原蛋白决定簇氨基酸序列,然后利用大肠杆菌原核表达系统进行表达、纯化后得到抗原蛋白,将获得抗原蛋白与佐剂乳化后得到亚单位疫苗,然后免疫3周龄SPF鸡只,采用免疫攻毒法和血清中和法对该亚单位疫苗的效力进行评价,免疫和攻毒后不同时期采血备用。将纤突蛋白-2抗原蛋白应用免疫层析技术制备胶体金试纸条,作为4型禽腺病毒抗体检测方法。结果:4型FAd V原核表达后,纤突-2蛋白浓度3269 μg/mL,纯度可达90%以上。免疫攻毒实验结果表明纤突-2蛋白亚单位疫苗最低免疫剂量能达到2.5/羽,保护率达95%以上;血清中和试验结果表明免疫后分离的鸡只血清中和抗体效价可达1:1000;胶体金试纸条试验结果表明纤突-2抗原蛋白制备的胶体金试纸条能够检测出纤突-2亚单位疫苗免后鸡只的抗体水平,其阳性信号均值在维持在300以上,阴性鸡只信号均值在10～50之间。结论:本实验制备FAd V纤突-2蛋白亚单位疫苗免疫鸡只后具有良好的保护效果,能够保护鸡只免受强毒的攻击。由本实验初步制成了 FAd V纤突-2蛋白免疫胶体金试纸条。
董振杰[7]（2019）在《胶东地区鸡Ⅰ群禽腺病毒的致病性及防控研究》文中研究说明禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAdV）是一种全世界范围内流行的家禽和野禽常见的传染病病原。Ⅰ亚群禽腺病毒分为A、B、C、D、E 5个种,12个血清型,其中FAdV-8b主要引起包涵体肝炎（IBH）,FAdV-4主要引起心包积水-肝炎综合征（HHS）。自2010年以来,鸡Ⅰ群禽腺病毒引起的IBH病例在我国白羽肉鸡中呈增长态势,2014年我国鸡只感染HHS的病例仅有零星发生,2015年已在全国全面爆发,给养鸡业造成了严重的经济损失。为深入揭示FAdV的致病机理及其病理学特点,进而制定出切实有效的防控IBH和HHS的方案及措施,开展了本项研究。1、为了调查鲁豫京等10省市FAdVI的流行情况,对2015～2017年在山东、河南和北京等10省市收集的455份疑似FAdVI阳性样品进行了检测。检测结果表明:2015～2016年感染率逐步上升,2017年感染率有所下降;发病率比较高的省市是山东、江苏、河南和北京;商品蛋鸡感染率比较高,其次是黄羽肉鸡和白羽肉鸡;检测结果还表明鸡Ⅰ群禽腺病毒病的发生具有明显的季节性,在每年6～8月份是该病的高发期,10～11月份是另一个感染高发期。测序结果表明:流行的主要血清型为FAdV-8b 和 FAdV-4。2、为了进一步研究胶东地区流行毒株的病毒生物学特点及血清学特性,2013年从本地区某肉鸡养殖场疑似包涵体肝炎的肝组织病料中分离鉴定出FXWH-8b毒株,2015年从本地区某肉种鸡养殖场疑似心包积水-肝炎综合征的肝组织病料中分离鉴定出FXWH-4毒株。然后对两个分离株采用理化特性检验试验和琼脂糖凝胶扩散试验（AGP）进行了检测,理化特性检测结果表明:分离毒株分别经BUDR、氢氧化钠（pH=10）和60℃ 1h处理后,接种鸡胚,孵育24h,鸡胚表现正常,经PCR检测阴性;而经乙醚、氯仿和盐酸（pH=3）处理后的分离毒株,接种鸡胚,孵育24h,不影响病毒在鸡胚中的增殖,鸡胚出现明显的病变,经PCR检测阳性。AGP试验结果表明:FXWH-8b株与FAdV-8b标准株AV215（FAV-8）的阳性血清呈阳性反应;FXWH-4株与FAdV-4标准株AV211（FAV-4）的阳性血清呈阳性反应。FXWH-8b株与FXWH-4株没有血清学交叉反应。3、为了深入揭示FAdV的致病机理及其病理学特点,采用上述本研究中分离的2个毒株,通过腿部肌肉注射方式接种15d的SPF鸡,结果表明:FXWH-8b株和FXWH-4株均能在24h内引起试验鸡发病,表现明显的临床症状和剖检变化;H.E染色可见两个分离株均可引起脑、胸腺、气管、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、胰脏、十二指肠、空肠、盲肠和法氏囊等器官出现明显的病理变化,均未发现核内包涵体。PCR结果表明FXWH-8b株攻毒后72h,FXWH-4株攻毒后48h,在病鸡肝脏、肺脏、肾脏、腺胃、空肠和盲肠组织中均检测出了该病毒的核酸,而且两个毒株在攻毒后均可较快地在多个组织器官中定植。免疫组化结果显示:FXWH-8b株在肝脏组织存在强阳性信号,FXWH-4株在肝脏、肾脏、十二指肠和空肠组织存在阳性信号。4、为了解决目前我国没有预防FAdV感染的商品化疫苗的问题,本研究首先对2个分离的毒株各自制成的细胞培养灭活疫苗进行了同源性抗体检测和交叉攻毒保护试验,结果表明:两个分离病毒株的疫苗均能较好地产生抗体,并对自身毒的攻毒感染均有较好的保护效果,但没有交叉保护作用。而后,用FAdV-4毒株对3个公司FAdVI的细胞培养二价灭活疫苗进行了攻毒保护试验,结果显示:3家公司的疫苗均能对FAdV-4病毒的感染有较好的保护作用。然后又对4种疫苗（FAdV-8b发病鸡肝组织灭活疫苗、FAdV-8b鸡胚组织灭活疫苗、FAdV-8b和FAdV-4发病鸡肝组织二价灭活疫苗和FAdV-8b和FAdV-4细胞培养二价灭活疫苗）进行了 5组32批次小型田间试验,结果表明:FAdV-8b发病鸡肝组织灭活疫苗对FAdV-8b毒株的感染有较好的保护作用,但对FAdV-4毒株的感染没有保护作用;FAdV-8b鸡胚组织疫苗对FAdV-8b和FAdV-4两个毒株的感染均无保护作用;FAdV-8b和FAdV-4发病鸡肝组织二价灭活疫苗和FAdV-8b和FAdV-4细胞培养的二价灭活疫苗均对目前胶东地区的流行毒株的感染有较好的保护作用。根据鸡Ⅰ群禽腺病毒的发病日龄结合疫苗的保护效果制定了用FAdV-8b和FAdV-4发病鸡肝组织二价灭活疫苗或FAdV-8b和FAdV-4细胞培养二价灭活疫苗,按照3次（6W颈部皮下、18W和22W胸肌）注射,每次0.5mL/羽的免疫程序,以防控此病。通过比较黄芪多糖+VC+氟苯尼考与单独使用干扰素对该病的治疗效果,发现黄芪多糖+VC+氟苯尼考组合能缓解Ⅰ群禽腺病毒病的感染症状,而单独使用干扰素没有治疗效果。最后在通过优化生物安全体系建设的基础上,将动物福利体系应用于种肉鸡生产管理之中,能够有效降低鸡Ⅰ群禽腺病毒病的发生。上述研究结果表明,2015～2017年在鲁豫京等10个省市发生的鸡Ⅰ群禽腺病毒病的主要流行血清型是FAdV-8b和FAdV-4;从胶东地区养鸡场分离的FXWH-8b毒株和FXWH-4毒株,也属于这两种血清型;2个分离毒株对SPF鸡均有较强的致病力,可侵害鸡的多个组织器官;本研究构建的细胞培养二价灭活疫苗和发病鸡肝组织二价灭活疫苗对胶东地区鸡群流行的Ⅰ群禽腺病毒病具有良好的保护效果;黄芪多糖配伍维生素C和氟苯尼考对Ⅰ群禽腺病毒病有一定的治疗效果;关于鸡Ⅰ群禽腺病毒病的防控问题,作者建议并经实践证明在养鸡生产管理中切实落实生物安全防控措施,并适当贯彻应用动物福利的理论可以有效地防控此病的发生。
刘吉山[8]（2018）在《Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制》文中进行了进一步梳理采集山东省、江苏省发病肉鸡、蛋鸡、麻鸭的病料,用SPF鸡胚分离了14株FAdV毒株,病毒均不能凝集鸡红细胞,56℃、65℃处理30 min后病毒失活,pH3与pH9条件下处理60 min不完全失活,能够抵抗4.4%体积的氯仿4℃处理10 min;对Hexon蛋白部分基因进行测序分析与PCR-RELP定位病毒血清型,其中11株为FAdV-4血清型,其它3株分别为FAdV-8a、8b、11血清型;选择FAd V A-E 5个种12个血清型病毒DNA聚合酶基因高度同源序列设计引物,建立了一种理论上可通用检测FAdV的PCR方法,具有敏感、特异、快速等特点,可检测2.8×102拷贝及以上的病毒DNA,对鸡易感的DNA病毒EDSV、MDV、FPV检测均为阴性,检测阳性的新鲜病料均能分离到病毒,SPF鸡感染病毒后心、肝、脾、肺、肾、腺胃与肌肉样品检测均为阳性;克隆了FAdV-4分离株Hexon蛋白基因,其ORF均为2814 bp,编码937个氨基酸,与已发布的4型病毒核苷酸、氨基酸序列高度同源,核苷酸序列同源性在97.1%99.7%之间,氨基酸序列与PK-01株同源性高达99.8%,遗传进化树分析表明,我国流行的FAdV-4毒株分属独立的基因群体。选择分离的4个血清型病毒回归感染SPF鸡,发病症状、剖检病变与临床病例一致,即表现为羽毛蓬乱、呆滞、鸡冠苍白,有的在24天后耐过恢复,剖检病死鸡可见典型心包积水、包涵体肝炎、肾脏肿胀,部分呈现腺胃出血、肌胃溃疡糜烂。将分离的FAdV-4病毒肌肉注射攻击SPF鸡,并测定病毒ELD50,结果表明,毒株致死率差异大,自40%到100%不等,ELD50同样差异较大,高的达10-7.84ELD50/0.2 mL,低的仅为10-5.0ELD50/0.2 mL,根据SPF鸡攻毒与ELD50测定结果,选择FAdV-4-sdbc-1作为制备灭活疫苗的候选毒株。为进一步保持种子的纯净性与稳定性,制备FAdV-4-sdbc-1毒株疫苗基础与生产种子批,基础种子病毒ELD50≥107.84/0.2 mL,攻毒30日龄SPF测得其LD50为10-4.84/1.0 mL;生产种子病毒ELD50≥10-8.0/0.2 mL,传代均不超过3代;按照生物品检验规程进行外源病毒、细菌、支原体等进行检测,外源ALV、REV、H5/H9 AIV、NDV、EDSV、IBV、ILT、IBDV、FPV、ARV、MDV检测均为阴性,无细菌、支原体污染;病毒在鸡胚传5至13代之间不影响病毒增殖特性和免疫原性。应用检验合格的生产种子生产抗原制备油包水型（W/O）油乳剂灭活疫苗,开展其制备工艺研究。首先将病毒含量≥108.0ELD50/0.2 mL生产种子稀释10-2接种6日龄鸡胚卵黄囊,收获96144h后死亡胚卵黄液,病毒含量测定应≥108.0ELD50/0.2 mL,加入等体积生理盐水制备抗原液,1‰甲醛溶液37℃灭活32 h制备半成品,根据《中国兽药典》进行灭活检验与无菌检验,合格后采用油相:水相3:2（V:V）的比例制备疫苗,经过外观、剂型、稳定性、粘度与无菌检验,甲醛含量测定等各项检验,制备的疫苗各项指标均达到设计要求。对制备的3批疫苗开展了油乳剂灭活疫苗（W/O）的安全性与效力评价及保存期研究。选择18日龄SPF鸡进行安全性检验,肌肉注射疫苗2 mL/只或间隔3天注射0.5 mL/只共3次,观察14天,安全性达100%。0.5 mL/羽为临床免疫使用剂量,经检测每羽份含有10.24 PD50。效力检测采用攻毒和AGP检测抗体2种方法,3批疫苗分别免疫18日龄SPF鸡,21d后,攻毒1.0 mL FAdV-4-sdbc-1(含100 LD50),观察14d,保护率100%,对照组全部死亡,同时检测免疫后14d、21d、42d的鸡血清,效价分别为1:2、1:8、1:16;疫苗4℃保存12个月、20℃保存6个月,其效力不变。该疫苗研制成功为防控该病提供了可靠的产品。
温素彦[9]（2018）在《禽腺病毒（Ⅰ群，4型）的纯化及抗体间接ELISA检测方法的建立》文中指出自2015年起,由禽腺病毒（Ⅰ群,4型）引起的鸡心包积液-肝炎综合征在我国多个省份暴发,且发病率呈上升趋势。该病主要发生于35周龄雏鸡,以心包积液和包涵体肝炎为特征,病鸡表现为突然发病,迅速死亡,死亡率高达30%80%,给养禽业造成巨大的经济损失。目前对该病的防控主要采用禽腺病毒灭活疫苗等,而评价疫苗免疫效果的手段一般是监测其抗体水平。建立能够反映疫苗免疫后鸡群抗体水平变化趋势的检测手段对该病的防控具有重要意义。为此本论文采用全病毒作为抗原,建立了一种禽腺病毒（Ⅰ群,4型）抗体ELISA检测方法,并在临床中推广应用。本研究中,采用G200分子筛、Macro-prep High Q阴离子交换层析联合超滤浓缩纯化禽腺病毒（I群,4型）,病毒回收率为31.62%,在相同病毒含量的情况下病毒液中蛋白去除率为97.56%。然后采用纯化的禽腺病毒作为ELISA包被抗原,优化包被抗原浓度和包被条件,实验结果表明,抗原浓度2μg/mL、4℃过夜包被的条件较好;优化ELISA板封闭条件,最终选择5%FBS、4℃过夜封闭的条件较好。然后对血清稀释浓度与反应条件、酶标二抗使用浓度与反应条件以及TMB底物反应条件进行了优化,发现血清稀释2000倍37℃反应1 h、酶标二抗稀释10000倍37℃反应1 h、TMB底物室温避光反应10 min时,阳性血清OD450值大于1.5,阴性血清OD450值小于0.2,P/N值较大。对实验室试制产品的特异性、敏感性进行了研究,结果表明本研究建立的ELISA方法与AIV、NDV、IBV、IBDV、REV、EDSV标准阳性血清（1:2000）和30份SPF鸡阴性血清（1:2000）不发生反应,OD450值均小于0.2,而与FAdV阳性对照血清（1:2000）反应,OD450值均大于1.5;阳性质控血清稀释至1:12800,其OD450值仍大于0.2。按照优化的ELISA条件和步骤检测疫苗免疫后鸡体FAdV抗体水平变化趋势,确定本研究FAdV抗体间接ELISA检测方法的判定标准为阳性对照血清OD450值大于1.0,阴性对照血清OD450值小于0.2时,试验成立;检测血清样品S/P值大于或等于0.2判定为阳性,S/P值为0.10.2判定为弱阳性,S/P值小于0.1时判定为阴性。同时对ELISA包被板的稳定性进行了研究,结果表明,ELISA包被板的批间差异小于10%,批内差异小于5%;保存12个月后其特异性、敏感性没有发生明显改变。使用本研究建立的ELISA方法检测来自广东、广西、云南鸡场的临床血清样本共计363份,结果表明FAdV抗体检测结果与疫苗免疫情况一致。所有试验结果表明,本研究建立的ELISA方法对禽腺病毒血清抗体检测具有良好的敏感性、特异性、稳定性,该ELISA检测方法能够弥补目前市场上商品化试剂盒的不足,具有很好的市场应用前景。
陈卫国[10]（2018）在《血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒的分离鉴定及其卵黄抗体的研制与应用》文中进行了进一步梳理禽类心包积水综合征（Hydropericardium syndrome,HPS）又称安卡拉病（Angara disease,AD）,是由血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒（Fowl Adenovirus serotype 4,FadV-4）引起禽类以心包积液为主要特征的一种高度接触性、致病性传染病。2014年以来,该病从我国山东、江苏、广东等沿海地区逐步向河北、河南、山西、安徽、湖北等内陆省份陆续扩散,给我国养禽业造成了巨大的经济损失。本研究对山东某鸡场临床诊断为疑似FadV-4感染的病死鸡进行了病毒分离与鉴定试验,获得了FadV-4分离毒株,并利用该分离毒株制备了油乳剂灭活疫苗及高免卵黄抗体,并进行临床实验效果评估。获得了以下结果:（1）针对送检临床疑似病料,采用FadV-Ⅰ特异性引物进行PCR检测,结果为阳性,确诊为安卡拉病病毒。（2）将临床病料接种SPF鸡胚进行动物回归试验,可引起鸡胚规律性死亡以及心包积液等典型病变,ELD50为10-6.78/0.1 mL。取上清,经血凝性检测分离株病毒对鸡红细胞无凝集性。采用Hexon基因的特异性引物进行分离株病毒基因测序,结果与GenBank中登录的23株血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒的Hexon基因序列同源性在98.7%99.8%之间。分离株病毒接种SPF鸡后可使鸡表现出FadV-4感染的典型临床症状和病理变化。（3）以该FadV-4分离株（SD株）制备了油乳剂灭活疫苗。抗体消长规律试验显示0.2 mL和0.5 mL剂量免疫SPF鸡后,抗体水平均呈现一个迅速上升,随后开始缓慢下降并维持一定水平的过程。免疫攻毒保护试验显示0.2 mL剂量组在免疫后21 d产生抗体效价可达4.40 log2,且能完全保护FadV-4强毒株的攻击,保护率达100%。（4）以FadV-4（SD株）油乳剂灭活疫苗多次免疫蛋鸡制备了FadV-4（SD株）卵黄抗体。琼脂扩散试验表明该抗体效价（log2）为6 log2,对SPF鸡具有良好的安全性以及预防保护效果;临床应用试验表明该卵黄抗体对肉仔鸡感染FadV-4的预防保护率高达98.67%,对肉仔鸡感染FadV-4的治愈率高达97.33%。综上所述,本研究获得了一株FadV-4分离株,并完成了其Hexon基因序列分析,为丰富FadV-4的分子流行病学提供了资料;为研究FadV-4致病机理和发病机制等基础性研究奠定了基础。以分离毒株制备的FadV-4（SD株）油乳剂灭活疫苗具有良好的安全性和免疫原性。以FadV-4（SD株）油乳剂灭活疫苗制备的卵黄抗体对临床中FadV-4的感染具有良好的预防和治疗效果,可用于鸡安卡拉病的预防和治疗,为我国鸡安卡拉病的综合防控提供了技术手段。
二、心包积水综合征的灭活疫苗（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、心包积水综合征的灭活疫苗（论文提纲范文）
（1）鸡心包积水综合征的流行病学、临床症状及防控措施（论文提纲范文）
| 1 流行病学 |
| 1.1 病原 |
| 1.1.1 形态特征 |
| 1.1.2 理化特性 |
| 1.2 易感动物 |
| 1.3 传播途径 |
| 1.4 发病特点 |
| 2 临床症状 |
| 3 病理变化 |
| 4 防控措施 |
| 4.1 疫情处理 |
| 4.1.1 药物治疗 |
| 4.1.2 加强护理 |
| 4.2 免疫预防 |
| 4.2.1 灭活疫苗 |
| 4.2.2 活疫苗 |
| 4.2.3 亚单位疫苗 |
| 4.3 加强饲养管理 |
（2）不同血清型禽腺病毒Fiber2蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性分析（论文提纲范文）
| 符号及缩略词说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 病原学 |
| 1.1.1 禽腺病毒的分类 |
| 1.1.2 禽腺病毒的形态结构 |
| 1.1.3 禽腺病毒的基因组结构 |
| 1.1.4 禽腺病毒的理化特征 |
| 1.1.5 禽腺病毒的主要编码蛋白及其功能 |
| 1.2 禽腺病毒的流行病学与致病性 |
| 1.2.1 易感动物 |
| 1.2.2 传播途径 |
| 1.2.3 流行现状 |
| 1.2.4 致病性 |
| 1.3 感染禽腺病毒的临床症状 |
| 1.4 禽腺病毒疫苗研究进展及防控 |
| 1.4.1 禽腺病毒疫苗研究进展 |
| 1.4.1.1 病毒灭活疫苗 |
| 1.4.1.2 弱毒活疫苗 |
| 1.4.1.3 基因工程亚单位疫苗 |
| 1.4.2 禽腺病毒防控 |
| 1.5 杆状病毒表达系统 |
| 1.5.1 杆状病毒 |
| 1.5.2 杆状病毒表达系统 |
| 1.6 研究意义和目的 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 病毒和细胞 |
| 2.1.2 感受态和质粒 |
| 2.1.3 主要实验试剂 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 |
| 2.1.5 主要仪器设备 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 重组杆状病毒供体质粒的构建与鉴定 |
| 2.2.1.1 Fiber2的PCR扩增 |
| 2.2.1.2 目的条带的回收 |
| 2.2.1.3 载体双酶切 |
| 2.2.1.4 目的基因与p Fast Bac Daul载体的连接 |
| 2.2.1.5 连接产物的转化 |
| 2.2.1.6 重组杆状病毒供体质粒的筛选与鉴定 |
| 2.2.1.7 阳性菌质粒提取 |
| 2.2.2 表达Fiber2 蛋白的重组杆状病毒质粒的构建与鉴定 |
| 2.2.2.1 转座及蓝白斑筛选 |
| 2.2.2.2 重组杆状病毒质粒的提取 |
| 2.2.2.3 重组杆状病毒质粒的鉴定 |
| 2.2.3 重组杆状病毒的拯救与鉴定 |
| 2.2.3.1 复苏Sf9 细胞 |
| 2.2.3.2 Sf9 细胞传代 |
| 2.2.3.3 转染细胞 |
| 2.2.3.4 间接免疫荧光法检测Fiber2 蛋白表达 |
| 2.2.4 重组杆状病毒表达Fiber2 蛋白的提取与纯化 |
| 2.2.4.1 蛋白提取 |
| 2.2.4.2 SDS-PAGE分析 |
| 2.2.4.3 重组蛋白纯化 |
| 2.2.4.4 BAC蛋白浓度测定 |
| 2.2.5 重组杆状病毒表达的Fiber2 蛋白免疫鸡诱导的抗体水平检测 |
| 2.2.5.1 SPF鸡的免疫和抗血清的获取 |
| 2.2.5.2 ELISA检测二免后各组鸡血清抗体水平 |
| 2.2.5.3 鸡抗血清在LMH细胞上中和FAd V活性检测 |
| 2.2.5.3.1 腺病毒TCID_(50)测定 |
| 2.2.5.3.2 鸡抗血清在LMH细胞上中和FAd V活性的检测 |
| 2.2.6 重组杆状病毒表达的Fiber2 蛋白免疫小鼠诱导产生抗体的反应原性 |
| 2.2.6.1 昆明白小鼠的免疫与抗血清的获取 |
| 2.2.6.2 间接免疫荧光(IFA)测定鼠多抗与病毒的反应原性 |
| 2.2.6.2.1 LMH细胞传代 |
| 2.2.6.2.2 LMH细胞接毒 |
| 2.2.6.2.3 间接免疫荧光检测小鼠多抗与病毒的反应原性 |
| 3 结果 |
| 3.1 重组杆状病毒供体质粒的鉴定 |
| 3.1.1 目的基因的PCR扩增 |
| 3.1.2 重组供体质粒的鉴定 |
| 3.1.3 重组供体质粒的测序鉴定 |
| 3.2 表达Fiber2 蛋白的重组杆状病毒质粒的鉴定 |
| 3.3 重组杆状病毒的拯救与鉴定 |
| 3.3.1 重组杆状病毒的拯救 |
| 3.3.2 重组杆状病毒的IFA鉴定 |
| 3.4 Fiber2 蛋白的提取与纯化 |
| 3.4.1 重组蛋白的SDS-PAGE检测 |
| 3.4.2 重组蛋白的纯化 |
| 3.5 重组杆状病毒表达的Fiber2 蛋白免疫鸡诱导的抗体水平检测 |
| 3.5.1 ELISA检测二免后各组鸡血清抗体水平 |
| 3.5.2 腺病毒在LMH细胞上产生病变 |
| 3.5.3 禽腺病毒TCID_(50)测定 |
| 3.5.4 抗血清在LMH细胞上中和FAd V活性检测 |
| 3.6 重组杆状病毒表达的Fiber2 蛋白免疫小鼠诱导产生抗体的反应原性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（3）血清4型禽腺病毒山东株基因组序列的克隆及遗传演化分析（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 病毒、载体及鸡胚 |
| 1.2 工具酶和主要试剂 |
| 1.3 引物合成 |
| 1.4 病毒基因组DNA的提取与PCR扩增 |
| 1.5 PCR产物的克隆与鉴定 |
| 1.6 序列测定与分析 |
| 1.7 序列比对及遗传进化分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 序列的测定、处理与基因组分析 |
| 2.2 分离株Hexon蛋白基因序列测定及同源性分析 |
| 2.3 分离株hexon蛋白基因遗传进化分析 |
| 3 讨论 |
（4）禽安卡拉病的研究现状（论文提纲范文）
| 1 病原学 |
| 2 流行病学 |
| 3 诊断方法 |
| 3.1 临床诊断 |
| 3.2 血清学诊断 |
| 3.2.1 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 3.2.2 琼脂凝胶扩散试验(AGPT) |
| 3.3 分子生物学技术诊断 |
| 4 禽安卡拉病的防控 |
| 4.1 灭活疫苗 |
| 4.2 弱毒活疫苗 |
| 4.3 亚单位疫苗 |
| 5 展 望 |
（5）FAdV-4 pcDNA3.1-Penton重组质粒的构建及免疫原性的初步探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 I群禽腺病毒的概述 |
| 1.1.1 腺病毒的分类 |
| 1.1.2 禽腺病毒的形态结构和理化特性 |
| 1.1.3 禽腺病毒的主要蛋白及其功能 |
| 1.2 安卡拉病流行病学 |
| 1.3 禽腺病毒疫苗研究 |
| 1.3.1 全病毒灭活疫苗 |
| 1.3.2 弱毒疫苗 |
| 1.3.3 亚单位疫苗 |
| 1.3.4 基因疫苗 |
| 1.4 本试验研究目的与意义 |
| 2 试验一 FAdV-4中Penton基因重组质粒的构建 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 病料来源 |
| 2.1.2 主要试剂及厂家 |
| 2.1.3 试验仪器及厂家 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 主要溶液的配制 |
| 2.2.2 FAdV-4 Penton基因PCR扩增 |
| 2.2.3 Penton基因克隆及鉴定 |
| 2.2.4 菌液中质粒提取及 PCR 扩增 |
| 2.2.5 Penton基因重组质粒的构建及鉴定 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 Penton基因PCR扩增结果 |
| 2.3.2 Penton基因克隆鉴定 |
| 2 3.3 Penton 重组质粒鉴定 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 3 试验二 Penton基因重组质粒免疫雏鸡后免疫原性的初探 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 主要仪器及厂家 |
| 3.1.2 主要试剂及厂家 |
| 3.1.3 试验动物 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 主要溶液配制 |
| 3.2.2 质粒大量制备 |
| 3.2.3 雏鸡免疫试验 |
| 3.3 试验结果与分析 |
| 3.3.1 血清中FAdV-4 抗体水平结果与分析 |
| 3.3.2 血清中IFN-γ含量结果与分析 |
| 3.3.3 血清中IL-6 含量结果与分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）禽腺病毒Ⅰ群4型纤突蛋白亚单位疫苗效力评价及胶体金试纸条的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 禽腺病毒的概述 |
| 1.2 病原学 |
| 1.2.1 禽腺病毒分类 |
| 1.2.2 病毒结构 |
| 1.2.3 致病特性 |
| 1.3 禽腺病毒病的流行病学研究 |
| 1.3.1 4型禽腺病毒病在国外的流行情况 |
| 1.3.2 4型禽腺病毒病在国内的流行情况 |
| 1.4 禽4型腺病毒病的诊断 |
| 1.4.1 临床诊断 |
| 1.4.2 病原学诊断 |
| 1.4.3 病理学诊断 |
| 1.4.4 血清学诊断 |
| 1.4.5 其他检测方法 |
| 1.5 防制措施 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 2 禽腺病毒Ⅰ群4型亚单位疫苗制备和效力评价 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要试剂和蛋白 |
| 2.1.2 主要细胞、血清和毒株 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 |
| 2.1.4 试验动物和地点 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 禽腺病毒Ⅰ群4型亚单位疫苗(F-iber-2)制备 |
| 2.2.2 最低剂量免疫试验和效力试验评价 |
| 2.2.3 禽腺病毒Ⅰ群4型亚单位疫苗(Fiber-2)免疫血清中和试验 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 最低剂量免疫试验结果 |
| 2.3.2 攻毒保护试验结果 |
| 2.3.3 临床症状 |
| 2.3.4 病理变化 |
| 2.3.5 血清中和试验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 胶体金试纸条快速检测4型禽腺病毒抗体方法的初步研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 蛋白 |
| 3.1.2 血清 |
| 3.1.3 胶体金相关试剂及耗材 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 胶体金试纸条T线、C线划线 |
| 3.2.2 胶体金标记蛋白 |
| 3.2.3 上机喷金 |
| 3.2.4 组装试纸条 |
| 3.2.5 血清样本检测 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 胶体金试纸条特异性检测结果 |
| 3.3.2 胶体金试纸条稳定性试验检测结果 |
| 3.3.3 胶体金试纸条检测Fiber-2蛋白亚单位疫苗免疫血清结果 |
| 3.4 讨论 |
| 4 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（7）胶东地区鸡Ⅰ群禽腺病毒的致病性及防控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 国内外研究现状 |
| 1.2 研究内容和方法 |
| 1.3 研究目的和意义 |
| 第二章 2015～2017年鸡Ⅰ群禽腺病毒病的流行调查 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 试验结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 胶东地区鸡Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及血清学研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 鸡Ⅰ群禽腺病毒分离株的致病性研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 试验结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 鸡Ⅰ群禽腺病毒病的防控研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 试验结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 结论 |
| 第七章 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 图版与说明 |
| 作者简介 |
| 论文发表情况 |
（8）Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 禽腺病毒(FAdV)引发疾病全球研究现状 |
| 1.1 包涵体肝炎 |
| 1.1.1 发病与病因 |
| 1.1.2 实验室研究 |
| 1.1.3 病理学变化 |
| 1.2 肝炎-心包积水综合征 |
| 1.2.1 发病与病因 |
| 1.2.2 实验室研究 |
| 1.2.3 临床病理学方面 |
| 1.3 肌胃糜烂(GE) |
| 1.3.1 发病与病因 |
| 1.3.2 实验室研究 |
| 1.4 机体对FAdV感染的免疫保护应答 |
| 1.5 发展与展望 |
| 第2章 禽腺病毒检测方法研究进展 |
| 2.1 病毒的分离 |
| 2.2 血清学方法 |
| 2.2.1 血清中和试验 |
| 2.2.2 琼脂凝胶扩散试验 |
| 2.2.3 ELISA检测方法 |
| 2.2.4 间接免疫荧光试验 |
| 2.3 分子生物学方法 |
| 2.3.1 PCR法检测 |
| 2.3.2 Real-timePCR检测法 |
| 2.3.3 探针检测法 |
| 2.3.4 环介导等温核酸扩增技术 |
| 第3章 禽腺病毒疫苗研究现状 |
| 3.1 疫苗研发现状 |
| 3.2 全病毒灭活疫苗 |
| 3.3 弱毒活疫苗 |
| 3.4 亚单位疫苗 |
| 3.5 小结 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 FAdV分离鉴定、通用PCR检测与血清型定位研究 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 主要仪器与试剂 |
| 1.1.2 引物设计与合成 |
| 1.1.3 病毒株的分离鉴定 |
| 1.1.4 病毒理化特性分析 |
| 1.1.4.1 热敏感性试验 |
| 1.1.4.2 酸碱度敏感性试验 |
| 1.1.4.3 有机溶剂敏感性试验 |
| 1.1.5 动物回归感染试验 |
| 1.1.6 通用PCR检测方法的建立 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.2.1 病毒分离及鸡胚病变观察 |
| 1.2.2 病毒的血凝性检测 |
| 1.2.3 分离毒株动物回归试验 |
| 1.2.4 病毒理化特性分析 |
| 1.2.5 FAdV通用PCR检测方法建立 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 第2章 FAdV-4变异分析及其疫苗制备毒株筛选 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 载体、细菌与鸡胚 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 引物设计 |
| 2.1.5 病毒基因组DNA的提取 |
| 2.1.6 FAdV-4Hexon蛋白ORF克隆 |
| 2.1.7 Hexon基因克隆与鉴定 |
| 2.1.8 FAdV-4Hexon蛋白基因序列分析 |
| 2.1.9 FAdV-4分离株动物回归攻毒试验 |
| 2.1.10 FAdV-4疫苗株筛选 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 Hexon基因PCR结果 |
| 2.2.2 Hexon蛋白基因重组质粒的鉴定 |
| 2.2.3 Hexon基因序列与进化树分析 |
| 2.2.4 分离株回归攻毒试验 |
| 2.2.5 FAdV-4疫苗候选毒株筛选 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 FAdV-4毒种种子批的检定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 毒种传代培养结果 |
| 3.2.2 基础种子批病毒含量测定结果 |
| 3.2.3 种子批30日龄SPF鸡半数致死量(LD50)含量测定结果 |
| 3.2.4 免疫原性检测结果 |
| 3.2.5 基础种子批无菌检验结果 |
| 3.2.6 基础种子批支原体检验 |
| 3.2.7 基础种子批的纯净性检测 |
| 3.2.8 基础种子批外源病毒常规检测结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 FAdV-4油乳剂疫苗生产工艺研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 生产毒种的毒价(力)检验 |
| 4.2.2 灭活及灭活后检验结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 FAdV-4油乳剂疫苗的保存期、安全性与效力评价 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 安全性检验结果 |
| 5.2.2 半数保护量PD50及免疫剂量试验结果 |
| 5.2.3 免疫攻毒后排毒试验 |
| 5.2.4 效力检验 |
| 5.2.5 免疫抗体监测结果 |
| 5.2.6 疫苗的保存期试验 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 疫苗的安全性 |
| 5.3.2 免疫剂量的确定 |
| 5.3.3 效力评价 |
| 5.3.4 保存期研究 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及博士期间科研成果 |
| 致谢 |
（9）禽腺病毒（Ⅰ群，4型）的纯化及抗体间接ELISA检测方法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 禽腺病毒概述 |
| 1.2 禽腺病毒分类 |
| 1.3 禽腺病毒分子结构和理化特性 |
| 1.4 禽腺病毒流行病学概况 |
| 1.4.1 易感动物 |
| 1.4.2 传播途径 |
| 1.4.3 流行情况 |
| 1.5 禽腺病毒疫苗及其应用 |
| 1.5.1 灭活疫苗 |
| 1.5.2 活疫苗 |
| 1.5.3 亚单位疫苗 |
| 1.6 禽腺病毒诊断方法 |
| 1.6.1 临床诊断 |
| 1.6.2 病理学检查 |
| 1.6.3 病原学诊断 |
| 1.6.4 血清学诊断 |
| 1.7 本研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 鸡胚和实验动物 |
| 2.1.3 毒株 |
| 2.1.4 主要试剂和材料 |
| 2.1.5 生物信息学软件 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 病毒繁殖与病毒含量测定 |
| 2.2.2 FAdV的纯化与检测 |
| 2.2.3 FAdV的灭活与检验 |
| 2.2.4 阴、阳性对照血清的制备与检验 |
| 2.2.5 包被板的制备 |
| 2.2.6 ELISA反应条件的优化 |
| 2.2.7 间接ELISA方法阴阳临界值的确定 |
| 2.2.8 特异性检验 |
| 2.2.9 敏感性检验 |
| 2.2.10 实验室试制5批产品的特性分析 |
| 2.2.11 FAdV抗体间接ELISA检测方法的应用 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 病毒PCR检测结果 |
| 3.2 病毒EID50测定结果 |
| 3.3 病毒纯化结果 |
| 3.4 包被板的制备 |
| 3.4.1 最佳抗原包被浓度和包被条件 |
| 3.4.2 最佳封闭液和封闭条件 |
| 3.5 ELISA反应条件的优化 |
| 3.5.1 血清最佳稀释度和最佳反应条件 |
| 3.5.2 酶标二抗最佳稀释度和最佳反应条件 |
| 3.5.3 最佳显色条件 |
| 3.6 间接ELISA方法的阴阳性判定阈值 |
| 3.7 特异性检验 |
| 3.8 敏感性检验 |
| 3.9 实验室试制5批产品的特性分析 |
| 3.9.1 实验室试制5批产品的特异性和敏感性分析 |
| 3.9.2 实验室试制5批产品的批内差异 |
| 3.9.3 实验室试制5批产品的批间差异 |
| 3.9.4 实验室试制5批产品的保存期试验 |
| 3.10 FAdV抗体间接ELISA检测方法的应用 |
| 3.10.1 与商品化试剂盒的对比 |
| 3.10.2 临床样品的检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 病毒的纯化 |
| 4.2 包被抗原的选择 |
| 4.3 间接ELISA方法的建立 |
| 4.4 间接ELISA方法应用情况 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（10）血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒的分离鉴定及其卵黄抗体的研制与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒研究进展 |
| 1.1 禽腺病毒概述 |
| 1.2 Ⅰ亚群禽腺病毒概述 |
| 1.2.1 Ⅰ亚群禽腺病毒病原学特征 |
| 1.2.2 Ⅰ亚群禽腺病毒发病机理 |
| 1.2.3 Ⅰ亚群禽腺病毒流行病学 |
| 1.3 血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒概述 |
| 1.3.1 病原学 |
| 1.3.2 流行病学 |
| 1.3.3 诊断 |
| 1.3.4 疫苗 |
| 1.3.5 治疗 |
| 1.4 卵黄抗体及其在家禽生产中应用 |
| 1.4.1 卵黄抗体概述 |
| 1.4.2 卵黄抗体在禽饲料添加剂中应用 |
| 1.4.3 卵黄抗体在禽病防治中的应用 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒的分离鉴定与Hexon基因序列分析 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 临床病料样品的采集与处理 |
| 2.2.2 临床病料样品的PCR检测 |
| 2.2.3 鸡胚接种与病变特征观察 |
| 2.2.4 分离毒株血凝性的测定 |
| 2.2.5 分离毒株病毒含量的测定 |
| 2.2.6 Hexon基因序列分析 |
| 2.2.7 动物回归试验 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 临床病料样品的PCR检测结果 |
| 2.3.2 鸡胚接种与病变观察结果 |
| 2.3.3 分离毒株血凝性的测定结果 |
| 2.3.4 分离毒株病毒含量的测定结果 |
| 2.3.5 Hexon基因序列分析结果 |
| 2.3.6 动物回归试验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 FadV-4分离鉴定 |
| 2.4.2 FadV-4的致病性 |
| 2.4.3 PCR技术在疫病诊断中的作用 |
| 2.4.4 FadV-Ⅰ培养方法的选择 |
| 2.4.5 FadV-Ⅰ序列分析 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 血清4型I亚群禽腺病毒灭活疫苗的制备与检验 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 毒株 |
| 3.1.2 试验动物 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 半成品的制备与检验 |
| 3.2.2 灭活疫苗的配置 |
| 3.2.3 灭活疫苗的检验 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 半成品病毒含量测定结果 |
| 3.3.2 半成品灭活检验结果 |
| 3.3.3 疫苗无菌检验结果 |
| 3.3.4 疫苗物理性状检验结果 |
| 3.3.5 疫苗甲醛残留量测定结果 |
| 3.3.6 疫苗汞类防腐剂残留量测定结果 |
| 3.3.7 疫苗安全性检验结果 |
| 3.3.8 疫苗效力检验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 疫苗的安全性与免疫效果 |
| 3.4.2 疫苗佐剂的选择 |
| 3.4.3 疫苗检验项目的选择 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 血清4型I亚群禽腺病毒高免卵黄抗体的制备与应用 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 毒株与疫苗 |
| 4.1.2 试验动物 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 产蛋鸡的免疫 |
| 4.2.2 鸡血清FadV-4抗体效价监测 |
| 4.2.3 鸡蛋FadV-4抗体效价监测 |
| 4.2.4 卵黄抗体的制备 |
| 4.2.5 卵黄抗体的检验 |
| 4.2.6 临床应用-肉鸡场保健和治疗效果研究 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 免疫鸡血清抗体效价测定结果 |
| 4.3.2 免疫鸡卵黄抗体效价测定结果 |
| 4.3.3 无菌检验结果 |
| 4.3.4 物理性状检验结果 |
| 4.3.5 甲醛残留量测定结果 |
| 4.3.6 辛酸残留量测定结果 |
| 4.3.7 支原体检验结果 |
| 4.3.8 外源病毒检验结果 |
| 4.3.9 安全性检验结果 |
| 4.3.10 效力检验结果 |
| 4.3.11 临床应用结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 卵黄抗体的优越性 |
| 4.4.2 琼脂扩散试验检测方法的建立 |
| 4.4.3 卵黄抗体提取方法的选择 |
| 4.4.4 卵黄抗体检验项目的选择 |
| 4.4.5 卵黄抗体的应用效果 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、心包积水综合征的灭活疫苗（论文参考文献）
- [1]鸡心包积水综合征的流行病学、临床症状及防控措施[J]. 曾辉. 现代畜牧科技, 2021(08)
- [2]不同血清型禽腺病毒Fiber2蛋白的杆状病毒表达及其免疫原性分析[D]. 张婷. 山东农业大学, 2021
- [3]血清4型禽腺病毒山东株基因组序列的克隆及遗传演化分析[J]. 宋玲玲,于可响,刘涛,鞠艳,吕俊峰,房立春,吴家强,艾武,袁小远,亓丽红,贺鹏,岳耀辉. 家禽科学, 2020(11)
- [4]禽安卡拉病的研究现状[J]. 庞洪泽,吴同垒,李蕴玉,闫艳娟,李佩国. 河北科技师范学院学报, 2019(03)
- [5]FAdV-4 pcDNA3.1-Penton重组质粒的构建及免疫原性的初步探究[D]. 徐丹. 沈阳农业大学, 2019(02)
- [6]禽腺病毒Ⅰ群4型纤突蛋白亚单位疫苗效力评价及胶体金试纸条的初步研究[D]. 范维. 内蒙古农业大学, 2019(01)
- [7]胶东地区鸡Ⅰ群禽腺病毒的致病性及防控研究[D]. 董振杰. 中国农业大学, 2019(02)
- [8]Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定与通用PCR检测及FAdV-4油乳剂灭活疫苗的研制[D]. 刘吉山. 吉林大学, 2018(12)
- [9]禽腺病毒（Ⅰ群，4型）的纯化及抗体间接ELISA检测方法的建立[D]. 温素彦. 华南农业大学, 2018(08)
- [10]血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒的分离鉴定及其卵黄抗体的研制与应用[D]. 陈卫国. 西北农林科技大学, 2018(01)