CYP2A13/MRP2双表达Flp-InTMCHO细胞系的建立

论文摘要

目的构建稳定表达细胞色素P450家族2亚家族A成员13（CYP2A13）和多药耐药相关蛋白2（MRP2）的双转染Flp-InTMCHO细胞系。方法分别构建pCMV6-NEO-CYP2A13和pcDNA5-MRP2重组质粒。先将pCMV6-NEO-CYP2A13重组质粒转染至Flp-InTMCHO细胞中,通过有限稀释法和4-甲基亚硝胺-1-3-吡啶基-1-丁酮（NNK）细胞毒性实验筛选CYP2A13活性较高的CYP2A13-Flp-InTMCHO细胞。再将pcDNA5-MRP2转染至CYP2A13-Flp-InTM CHO细胞中。用实时定量PCR、 Western blot法和NNK细胞毒性实验,检测双转染细胞及正常细胞中CYP2A13和MRP2的表达量及其活性,筛选稳定表达CYP2A13和MRP2的Flp-InTM CHO细胞。结果相较于未转染细胞, CYP2A13-Flp-InTM CHO细胞的CYP2A13表达增加, NNK毒性敏感度增加; CYP2A13/MRP2-Flp-InTMCHO细胞的CYP2A13和MRP2表达也明显增加。和CYP2A13-Flp-InTM CHO细胞相比, CYP2A13/MRP2-Flp-InTM CHO细胞的CYP2A13表达量无明显差异, MRP2表达增加, NNK毒性敏感度明显降低。结论成功建立了CYP2A13和MRP2的双转染细胞模型,为呼吸道致癌物质原位激活研究奠定了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘香香,何俊奇,杨畅,王永林,薛维娜,何彬,李勇军,兰燕宇,刘亭

关键词: 细胞色素家族亚家族成员,多药耐药相关蛋白,甲基亚硝胺吡啶基丁酮,稳定转染,双表达,细胞

来源: 细胞与分子免疫学杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 贵州医科大学贵州省药物制剂重点实验室/省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵州医科大学药学院,贵州医科大学医药卫生管理学院,贵州医科大学民族药与中药开发应用教育部工程研究中心

基金: 国家自然科学基金(81603189),贵州省科技计划项目(黔科合基础[2019]1280号),贵州省科学技术厅人才团队项目(黔科合平台人才[2016]56135677),中央引导地方科技专项项目(黔科中引地[2018]4006)

分类号: Q78

DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.008916

页码: 865-871

总页数: 7

文件大小: 560K

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