汉滩病毒核衣壳蛋白与宿主相互作用蛋白的分离与纯化

论文摘要

目的构建带有亲和素标签的汉滩病毒（HTNV）核衣壳蛋白（NP）表达质粒,转染HEK293T细胞并表达后,鉴定与其相互作用的宿主蛋白。方法合成亲和素标签基因（SF）与HTNV NP基因,先后克隆入哺乳动物真核表达载体pCAGGS,构建带有亲和标签SF的HTNV NP表达质粒,酶切鉴定重组质粒,获得的重组质粒命名为pCAGGS-SF-NP。将重组表达质粒瞬时转染到HEK293T细胞中, Western blot法检测重组质粒的表达;瞬时转染并收获蛋白样品,与StrepTrapTM HP琼脂珠混匀后, 4℃过夜孵育;转移到层析柱中,经缓冲液洗涤、脱硫生物素洗脱完成亲和层析,获得洗脱样本;洗脱样品进行SDS-PAGE,分离得到与NP相互作用的宿主蛋白。结果酶切鉴定结果表明成功构建pCAGGS-SF和pCAGGS-SF-NP,重组质粒成功表达串联SF与NP的融合蛋白;在亲和层析过程中,成功特异富集融合蛋白SF-NP;洗脱样品成功分离出与NP相互作用的宿主蛋白。结论构建的重组表达质粒可以在真核细胞中成功表达融合蛋白SF-NP并获得了与NP相互作用的宿主蛋白。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘赫,叶伟,张亮,程林峰,马宏炜,董阳超,雷迎峰,张芳琳

关键词: 汉滩病毒,核衣壳蛋白,亲和纯化

来源: 细胞与分子免疫学杂志 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 空军军医大学微生物与病原生物学教研室

基金: 国家重点研发计划(2016YFC1200400),国家自然科学基金(31600131)

分类号: R373

DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.008767

页码: 97-102

总页数: 6

文件大小: 1279K

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标签：汉滩病毒论文;  核衣壳蛋白论文;  亲和纯化论文;