导读:本文包含了转化细胞系论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞系,转染,细胞,肿瘤,食管,基因,蛋白。
转化细胞系论文文献综述
马闻,李星星,王胜,游莉,郭元元[1]（2010）在《外源性重组S100A6蛋白对5株转化细胞系的增殖、迁移能力及β-catenin水平的影响》一文中研究指出目的:探讨S100A6对5种转化细胞系株(HEK293、9HTE、CHO、MEF和C3H10T1/2)的增殖、迁移能力和β-catenin水平的影响。方法:通过转化质粒pMoluc-GST-hS100A6到大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组S100A6蛋白,为后续实验提供材料;MTT法检测细胞增殖,细胞划痕和Transwell法检测细胞迁移,免疫细胞化学法及Western-blotting检测β-catenin表达水平。结果:①通过IPTG诱导表达,从大肠杆菌中收获了高纯度重组S100A6(GST-S100A6);②外源性重组S100A6对作为阳性对照的肿瘤细胞系——人骨肉瘤细胞143B的增殖及迁移均有抑制作用(P<0.05),而对5株转化细胞系的增殖及迁移均无显着影响(P>0.05);③免疫细胞化学法和Western-blotting一致揭示重组S100A6可上调5株转化细胞系的β-catenin水平(P<0.05)。结论:S100A6对5株转化细胞系的增殖、迁移无明显影响,但可上调此5株转化细胞系Wnt/β-catenin水平。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2010年09期）
马闻[2]（2010）在《外源性rhS100A6对七株转化细胞系和肿瘤细胞系的体外作用及血清和肿瘤组织中S100A6水平随兔肝VX2移植瘤发展进程的动态变化》一文中研究指出研究背景和目的:钙结合蛋白S100超家族拥有超过24个成员,与大部分成员一样,S100A6编码基因定位于染色体1q21,该区域稳定性较差,易发生染色体重排和基因扩增。自从由Ehrlich腹水瘤中检出,对S100A6的研究已超过20年,目前认为该蛋白是一种活跃的信号蛋白分子,参与多种信号途径,调节细胞生理活动,并与肿瘤进程密切相关。目前的研究提示,S100A6在人黑色素瘤、直结肠癌、胰腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、多数骨肉瘤和肝内导管上皮癌等肿瘤中高表达,并与其转移活动及病程相关。在分子水平上,S100A6能通过与Sgt1和melusin相互作用介导对热休克反应的调节;与P53相互作用,实现对细胞增殖与凋亡的调节;通过与RAGE (receptor for advanced glycation end products)结合、激活JNK和caspases途径诱导凋1亡;与annexin家族成员结合,调节细胞骨架与细胞迁移;与CacyBP/SIP相互作用调节β-catenin水平,而后者的胞内积聚被认为是肿瘤发展和转移的重要事件。我们的前期研究发现外源性rhS100A6能抑制多种肿瘤细胞系的增殖、迁移,并上调胞内β-catenin水平;但是,它对正常细胞是否具有相同作用尚无报道。因此,本课题拟以五株转化细胞系和两株肿瘤细胞系为实验对象,探讨外源性rhS100A6对其增殖、迁移和β-catenin水平的影响。尽管S100A6被发现在一些肿瘤组织高表达,但是,关于其表达随肿瘤发生发展进程的变化尚未见报道。这对阐明其在肿瘤发生发展中的作用具有重要意义。本研究拟建立兔肝VX2移植瘤模型,检测在荷瘤过程中S100A6在血清中的含量及在转移瘤组织中表达的动态变化,为进一步明确S100A6在肿瘤发生发展中的作用积累实验依据。方法:1.重组人S100A6蛋白( rhS100A6 )的制备:将pGST-Moluc-hS100A6转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导rhS100A6表达,谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(Glutathione Sepharose 4B beads)分离纯化、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis ,SDS-PAGE)和Western-blotting鉴定,BCA法定量,分装后-80℃保存备用。2.细胞增殖及迁移的检测:分别以终浓度均为3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、1000μg/ml的rhS100A6作用于人胚肾细胞HEK293、人气道上皮细胞9HTE、小鼠胚胎成纤维细胞MEF、中国仓鼠卵巢细胞CHO、小鼠间充质干细胞C3H10T1/2、兔鳞状细胞癌细胞VX2和人骨肉瘤细胞143B。MTT法检测其增殖。根据该实验结果,筛选出30μg/ml作为后续实验的终浓度。在30μg/ml的rhS100A6作用上述细胞后,用MTT法连续测定5天内细胞增殖的变化,用细胞划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移能力的变化。3.细胞内β-catenin水平的检测:30μg/ml的rhS100A6处理5种转化细胞系,分别使用免疫细胞化学法和Western-blotting法检测细胞内β-catenin表达水平。4.兔肝VX2移植瘤模型的建立:取自种兔的VX2鳞癌组织去包膜后,切成1mm×1mm×1mm小块,接种至肿瘤兔左肝下叶。术后密切观测肿瘤兔一般情况及肿瘤生长情况。5.标本采集:分别于接种后第7、12、17、19、21、23、25、27及29天处死动物,采集血清,分装后-80℃保存备用;采集肝内、网膜、肺上的转移瘤组织行石蜡切片。6.血清及转移瘤组织中S100A6含量的检测:用包被S100A6抗体的酶标板行ELISA检测血清中S100A6的含量;石蜡包埋组织切片后,用S100A6单克隆抗体行免疫组织化学检测S100A6在转移瘤中的表达。结果:1.重组蛋白rhS100A6制备成功。纯化后的诱导表达产物经过SDS-PAGE后,考马斯亮蓝染色,可见36KD处的GST-S100A6条带,经Quanity one分析纯度达92%;以S100A6抗体(1:1000),通过SDS-PAGE/Western-blotting法检测纯化后的GST-S100A6,出现阳性杂交条带。即rhS100A6制备成功。以标准化的BSA为参照品,以BCA法测定其浓度并绘制蛋白浓度标准曲线,由此曲线推算洗脱的rhS100A6(GST-S100A6)浓度为12.3 mg/ml,则1L菌液中可得6.15mg的rhS100A6。2.外源性rhS100A6对这5株转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的增殖无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系(143B和VX2)的增殖具有抑制作用,并呈一定的浓度、时间依赖性。1)浓度依赖性:5株转化细胞系在各浓度(3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、1000μg/ml)的rhS100A6处理后,其OD值与实验对照组(GST组)相比,差异不具统计学意义(P>0.05);3μg/ml和10μg/ml的rhS100A6对2株肿瘤细胞系的增殖无明显影响;而随后的4个浓度的rhS100A6处理致VX2细胞的OD值分别较GST组下降19.3%、26.4%、37.8%和47.1%(P<0.05),143B细胞的OD值分别较GST组下降17.4%、23.8%、33.7%和35.2%(P<0.05)。2)时间依赖性:根据上述结果,选用30μg/ml浓度作时间依赖实验。在5天观察时间内,5株转化细胞系的rhS100A6组的OD值与GST组相比,差异不具统计学意义(P>0.05);而2株肿瘤细胞系的OD值从干预后第3天起开始降低,与GST组相比,VX2细胞第3-5天的OD值分别下降13.1%、16.3%和17.9%(P<0.05),143B细胞第3-5天的OD值分别下降11.7%、14.7%和16.6%(P<0.05)。提示:外源性rhS100A6对这5株转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的增殖无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系(143B和VX2)的增殖具有抑制作用,并呈浓度、时间依赖。3.外源性rhS100A6对这5株转化细胞系的迁移无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系的迁移具有抑制作用。1)5株转化细胞系:(1)细胞划痕实验:30μg/ml的rhS100A6作用于5种转化细胞系,各个观测点的细胞迁移率与GST组的差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Transwell实验也进一步验证了上述结果:30μg/ml的S100A6作用于这5种细胞后,实验组穿膜细胞数与GST组的差异无统计学意义(P>0.05);同时,用33%醋酸溶液洗脱被甲基紫染色后的细胞,在490nm处读取其OD值(该值与穿膜细胞数成正比),该结果也进一步证实实验组与GST组差异无统计学意义(P>0.05)。提示,外源性rhS100A6对这5种转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的迁移无明显影响。2) 2株肿瘤细胞系:(1)细胞划痕实验:30μg/ml的rhS100A6作用于VX2和143B,24小时后的细胞迁移率较GST组分别降低17.2%(P<0.05)和16.4%(P<0.05),差异具有统计学意义。(2)Transwell实验证实,30μg/ml的rhS100A6作用于VX2和143B后,其穿膜细胞数较GST组分别减少10.1%(P<0.05)和11.2%(P<0.05)。同时,用33%醋酸洗脱被甲基紫染色的细胞,VX2细胞实验组490nm处的OD值较GST组降低12.3%(P<0.05)。提示,外源性rhS100A6对VX2和143B细胞的迁移有抑制作用。综上:外源性rhS100A6对这5株转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的迁移无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系(VX2和143B)的迁移具有抑制作用。4.外源性rhS100A6上调5株转化细胞系的β-catenin水平。免疫细胞化学显示:实验组β-catenin阳性染色的平均光密度值均高于GST组,HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2分别增高25.4%、15%、22.1%、22.7%和28%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western-blotting法检测结果也与上述结果一致:实验组阳性条带与内参条带的灰度比值较GST组均有升高,HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2分别增高11.4%、21.9%、13%、14.8%和10.1%,差异具均有统计学意义(P<0.05)。提示:外源性rhS100A6能够上调这5株细胞的β-catenin水平。5.兔肝VX2移植瘤模型建立成功。实验共接种45只兔,成功建立兔肝VX2移植瘤模型45只,接种成功率100%。接种后肿瘤生长迅速,肿瘤兔存活期不超过30天;第15天前的兔体内未见明显转移灶,第17天时可见肝内转移及网膜转移,第25天可见肺转移,并开始表现恶病质。肿瘤组织病理切片证实为鳞状细胞癌。6.肿瘤兔血清S100A6含量随荷瘤进程呈进行性降低。从荷瘤第7天起到第29天,兔血清中S100A6的含量分别较对照组减少12.1% (P=0.237)、20.0%(P=0.105)、37.6%(P=0.01)、79.9%(P=0.01)、89.9%(P=0.01)、92.9%(P=0.01)、98.3%(P=0.01)、98.5%(P=0.01)和99.0%(P=0.01),即从第17天起(即发现肝内转移和网膜转移的时间),血清含量的差异有显着性。提示:肿瘤兔血清S100A6含量随荷瘤进程呈进行性降低。7. S100A6在肝内、网膜和肺的转移肿瘤组织中的表达随荷瘤进程进行性降低。免疫组织化学显示:在肝内、网膜和肺转移肿瘤组织中的S100A6阳性染色程度呈进行性降低,回归分析提示差异具有显着性(肝内肿瘤P=0.01,网膜肿瘤P=0.01,肺内肿瘤P=0.04)。提示:S100A6在肝内、网膜和肺的转移肿瘤组织中的表达随荷瘤进程呈进行性降低。结论:1.通过转化重组质粒到大肠杆菌,IPTG诱导表达和分离纯化,获得高纯度的rhS100A6蛋白。2.外源性rhS100A6对5株转化细胞系(人胚肾细胞HEK293、人气道上皮细胞9HTE、中国仓鼠卵巢细胞CHO、小鼠胚胎成纤维细胞MEF和小鼠间充质干细胞C3H10T1/2)的增殖及迁移无明显影响。3.外源性rhS100A6对兔鳞状细胞癌细胞VX2和人骨肉瘤细胞143B的增殖及迁移具有一定的抑制作用,并呈浓度、时间依赖。4.外源性rhS100A6能上调上述5株转化细胞系内β-catenin水平。5.随兔肝VX2移植瘤模型的进程,其血清S100A6水平进行性降低,并且在转移伊始(第17天)骤降。6.在转移肿瘤组织中,S100A6的表达也呈逐步降低趋势。7.外源性rhS100A6抑制VX2的增殖、迁移及兔肝VX2移植瘤模型兔血清和转移肿瘤组织中S100A6的进行性降低,提示:1)S100A6对肿瘤VX2具有抑制性作用;2)S100A6表达的下调可能是促进肿瘤发展的因素之一,因此,上调S100A6的表达可能延缓该发展进程;3)血清S100A6可望成为肿瘤VX2转移的标志物。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2010-05-01）
王宪耀[3]（2008）在《人类胚胎肌肉细胞体外自发恶性转化细胞系抑癌基因的改变》一文中研究指出间充质干细胞体外长期培养可以发生自发恶性转化,现机制未清,其可能与癌基因的激活、抑癌基因的失活有关。我们通过前期研究发现人类胚胎肌肉细胞长期培养可发生自发恶性转化,并获得6个永生化细胞系(来源于不同遗传背景)。实验目的研究人类胚胎肌肉源性自发恶性转化细胞系抑癌基因的改变。实验方法运用免疫组化、PCR、RT-PCR、DNA直接测序研究该类细胞系抑癌基因p16、p15、MTAP(甲硫氨酸磷酸化酶)和p53、p21基因的改变.实验结果对这6个恶性转化细胞系一些经典抑癌基因的研究发现:1.存在染色体9p21处的纯合性片段缺失,其中包括MTAP,p16和p15;2.p53存在广泛的DNA水平突变,对外显子7至8序列测序发现,其外显子7,8突变率分别为8%和14%,突变类型皆为点突变,内含子7突变程度更强,突变类型包括小片段缺失,插入及点突变,与现有公认的p53突变数据库比对发现其突变模式完全不同。且所有6个细胞系测序结果高度一致,提示这一突变模式具有强大的选择优势;3.p21存在DNA水平突变及逆转录水平的减少。结论通过以上研究可推论,抑癌基因的失活在人胚胎肌肉细胞体外自发恶性转化进程中具有重要作用。(本文来源于《汕头大学》期刊2008-06-01）
张松[4]（2008）在《人胚胎肌肉组织来源的随机恶性转化细胞系的生物学特性》一文中研究指出背景与目的非整倍体是癌细胞的最大遗传特征,非整倍体是指细胞核内染色体数目出现异常。100多年前就有人提出非整倍体是癌症的起因假说,近来越来越多的研究证实这种假说成立的可能性。但非整倍体作为独立因素能否导致肿瘤的发生,目前还没有确切的结论。本实验用人胚胎肌肉细胞进行培养,通过聚乙二醇融合肌肉细胞,以期获得非整倍体细胞,由于聚乙二醇是非致突变物质,在融合过程中不会有基因突变的产生,排除了基因突变的作用,通过此方法获得非整倍体细胞,进一步分析产生的非整倍体细胞能否形成肿瘤,从而对肿瘤产生的诱因-非整倍体学说进行深入研究。材料和方法用人胚胎肌肉细胞进行培养,50%聚乙二醇进行细胞融合,观察能否产生非整倍体细胞;利用3-甲基胆蒽(MCA)和秋水仙素(colcemid)联合处理人胚胎肌肉细胞,产生的非整倍体细胞作为阳性对照;未进行任何处理的肌肉细胞作为阴性对照,通过染色体分析和流式细胞仪分析检测非整倍体细胞。对非整倍体细胞进行长期培养,观察细胞能否恶性转化形成肿瘤。结果通过流式细胞仪分析发现,通过细胞融合及MCA和秋水仙素(colcemid)处理均产生非整倍体细胞,染色体分析发现这些细胞染色体数目是异常的,产生的非整倍体细胞以亚二倍体为主,少量细胞为超二倍体;而且部分非整倍体细胞短期培养可以增殖,其中一次融合永生化,但均未发生恶变。结论聚乙二醇对人胚胎肌肉正常二倍体细胞融合,能够产生非整倍体细胞。长期培养,未发现细胞的恶性转化。背景和目的本实验室通过人胚胎肌肉细胞的培养,获得自发恶性转化为肉瘤细胞系,分别命名MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5。本实验对这种自发恶性转化细胞系的染色体变化进行研究,揭示这种肉瘤细胞系的染色体变化特点。材料和方法染色体分析转化肉瘤细胞系MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5染色体数目和结构的变化特点。通过流式细胞仪分析进行染色体倍体研究。结果肉瘤细胞系几乎所有的细胞核型都存在染色体数目和结构的异常,染色体数目大多在46条以上,结构异常包括环形染色体、线形染色体、双着丝粒染色体和广泛的易位。流式细胞仪分析肉瘤细胞系全部是非整倍体。结论MS0812、MS0504、MS3、MS4和MS5肉瘤细胞系是非整倍体细胞,染色体的数目和结构存在大范围的异常。目的观察苦参碱(matrine)对体外培养的人肉瘤细胞系MS0812细胞的增殖和诱导调亡作用。方法苦参碱处理人肉瘤细胞系MS0812后,应用MTT比色法检测不同浓度苦参碱和不同作用时间对MS0812细胞的增殖作用的影响,DNA凝胶电泳、TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果苦参碱对MS0812细胞增殖具有抑制作用,其增殖抑制作用随作用时间延长及药物浓度升高更加明显,具有时间和剂量依赖性。DNA凝胶电泳观察到发生调亡时出现的阶梯状条带;通过TUNEL染色可以发现调亡阳性细胞;流式细胞仪检测可见经苦参碱处理后G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降及低G1期细胞出现,并形成亚二倍体峰(凋亡峰)。结论苦参碱在体外对肿瘤细胞系MS0812的生长具有抑制和诱导调亡作用。(本文来源于《汕头大学》期刊2008-05-01）
陈海滨,彭燕,石玉秀[5]（2006）在《EZH2蛋白在食管上皮永生化细胞系和恶性转化细胞系中的表达》一文中研究指出目的研究EZH2蛋白在食管上皮永生化细胞系(SHEE)和恶性转化细胞系(SHEEC)中的表达。方法采用免疫细胞化学染色、免疫印迹分析和流式细胞术检测两种细胞系EZH2蛋白的表达。结果两种细胞EZH2蛋白染色均呈阳性,阳性反应定位于细胞核,部分细胞胞浆也有阳性着色。免疫印迹分析表明SHEEC细胞和SHEE细胞的总蛋白、核蛋白在分子质量约90ku的位置均出现特异性印迹条带。SHEE细胞中EZH2蛋白的表达强于SHEEC细胞(P<0.05)。流式细胞术显示EZH2蛋白在两种细胞中均有表达,两者的平均荧光强度无明显差别;阳性细胞率均较高,其中SHEE细胞阳性率高于SHEEC细胞。结论EZH2蛋白在SHEE细胞和SHEEC细胞中高表达可能参与了它们的恶性改变;而EZH2蛋白在两种细胞系中的差异表达可能与细胞的分化程度及来源于胚胎食管上皮细胞相关。(本文来源于《中国组织化学与细胞化学杂志》期刊2006年02期）
彭燕,陈海滨,苏中静,张锦堃,沈忠英[6]（2005）在《细胞角蛋白在食管永生化上皮细胞和恶性转化细胞系的表达》一文中研究指出目的:研究细胞角蛋白(cytokeratin,CK)在食管永生化上皮细胞株SHEE和由SHEE恶性转化而来的细胞株SHEEmt之间的差异表达。方法:采用免疫细胞化学染色和免疫印迹的方法,观察SHEE细胞和SHEEmt细胞中CK的表达。结果:免疫细胞化学染色显示两种细胞均呈CK染色阳性,阳性反应位于胞浆;SHEE细胞染色弱阳性,SHEEmt细胞染色中等强度阳性。免疫印迹分析在两种细胞中抗角蛋白抗体均与分子量52.5ku、46ku和45ku的抗原同时发生反应;但SHEEmt细胞中的3条阳性反应带均强于SHEE细胞。结论:CK阳性表达支持两种细胞来源于非角化型或胎儿型鳞状上皮;随着永生化细胞转化为恶性细胞,某些角蛋白表达上调,可能与细胞恶性转化后的分化程度相关。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2005年14期）
谢经良,唐学玺[7]（2003）在《苜蓿转化细胞系核酸和蛋白质合成的研究》一文中研究指出以苜蓿转化细胞系和对照细胞系为材料 ,利用同位素标志方法研究了 3种大分子物质——DNA、RNA和蛋白质的合成动态。结果表明 ,与对照细胞系相比 ,转化细胞系的生长速度明显加快 ,DNA、RNA和蛋白质的合成旺盛 ,合成速度显着提高。同时 ,转化细胞系 DNA、RNA和蛋白质出现最大合成速度的时间均相应地延迟。(本文来源于《青岛海洋大学学报(自然科学版)》期刊2003年02期）
邱薇,夏咸柱,范泉水,扈荣良,王雷[8]（2003）在《犬2型腺病毒E1转化细胞系的特性研究》一文中研究指出对筛选到的一株CAV-2 E1转化细胞(DK/E1)进行了初步的特性研究。以DK细胞为对照,观察到转化细胞的形态与DK细胞有明显区别,细胞变长,易聚集生长。通过测定DK及DK/E1细胞分别在2％、5％和10％牛血清培养基中的生长曲线,结果发现DK/E1细胞的生长速度比DK细胞快。用蚀斑和TCID50测定了病毒在DK和DK/E1细胞上的病毒滴度,结果表明DK/E1细胞产生的病毒蚀斑比DK细胞的大,TCID50测得的病毒滴度比DK细胞产生的病毒滴度高。CAV-2全基因组DNA对DK/E1细胞和DK细胞的转染试验结果表明,5μg和10μg的CAV-2DNA转染的DK/E1细胞,分别在转染后第14天和第11天均出现了典型的腺病毒细胞病变,而相同量CAV-2 DNA转染的DK细胞未出现病变,说明DK/E1细胞有助于CAV-2 DNA的复制和病毒粒子的包装。在DK/E1细胞内的重组试验表明,DK/E1细胞也有利于重组病毒的产生。以上转化特性在DK/E1细胞传至80代时仍保持不变,说明本试验获得了一株CAV-2 E1基因的转化细胞系。(本文来源于《细胞生物学杂志》期刊2003年02期）
张开泰,应万涛,鞑冀平,李刚,彭少华[9]（2001）在《ANXⅠ在原发性肺癌及BEP2D转化细胞系中的表达(英文)》一文中研究指出[目的]体内、外的许多感染模型证实 ,ANXⅠ介导糖皮质激素的抗炎症效应 ,被认为是糖皮质激素抗炎症效应中的第二信使。然而 ,ANXⅠ与原发性肺癌之间的相关性尚未知晓。本文对此进行研究。[方法]采用免疫组化方法检测60例原发性肺癌标本中ANXⅠ的表达分布 ;蛋白组学方法描绘ANXⅠ在永生化、转化与恶性转化中的表达状况。[结果]ANXⅠ的表达分布与原发性肺癌的组织学分型相关 (P<0.05) ;在永生化细胞中表达丰度低 ,转化细胞较高 ,恶性转化细胞中最高。[结论]ANXⅠ可能参与原发性肺鳞癌形成的启动或促进阶段 ,对人支气管上皮细胞恶性转化具有较为重要的作用。(本文来源于《中国肿瘤》期刊2001年03期）
杨其伟,史国利,陈雅文,刘丛,陈德风[10]（1998）在《反义PARP基因真核表达重组体的构建及其HeLa转化细胞系的建立》一文中研究指出利用DNA体外重组技术将PARP基因cDNA部分序列反向克隆到真核表达载体pMAMneo上，构建成重组质粒pMAMneo－C1．4和pMAMneo－C0．3．将重组质粒pMAM－neo－C1．4转染HeLa细胞，经G418筛选，建成细胞系HeLa－C1．4－neo，Southern杂交结果表明，外源PARP基因cDNA部分序列已稳定整合到受体细胞基因组中，该细胞系的建立为研究聚ADP核糖基化作用在细胞内的功能打下了基础．(本文来源于《南开大学学报(自然科学版)》期刊1998年01期）
转化细胞系论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景和目的:钙结合蛋白S100超家族拥有超过24个成员,与大部分成员一样,S100A6编码基因定位于染色体1q21,该区域稳定性较差,易发生染色体重排和基因扩增。自从由Ehrlich腹水瘤中检出,对S100A6的研究已超过20年,目前认为该蛋白是一种活跃的信号蛋白分子,参与多种信号途径,调节细胞生理活动,并与肿瘤进程密切相关。目前的研究提示,S100A6在人黑色素瘤、直结肠癌、胰腺癌、胃癌、非小细胞肺癌、多数骨肉瘤和肝内导管上皮癌等肿瘤中高表达,并与其转移活动及病程相关。在分子水平上,S100A6能通过与Sgt1和melusin相互作用介导对热休克反应的调节;与P53相互作用,实现对细胞增殖与凋亡的调节;通过与RAGE (receptor for advanced glycation end products)结合、激活JNK和caspases途径诱导凋1亡;与annexin家族成员结合,调节细胞骨架与细胞迁移;与CacyBP/SIP相互作用调节β-catenin水平,而后者的胞内积聚被认为是肿瘤发展和转移的重要事件。我们的前期研究发现外源性rhS100A6能抑制多种肿瘤细胞系的增殖、迁移,并上调胞内β-catenin水平;但是,它对正常细胞是否具有相同作用尚无报道。因此,本课题拟以五株转化细胞系和两株肿瘤细胞系为实验对象,探讨外源性rhS100A6对其增殖、迁移和β-catenin水平的影响。尽管S100A6被发现在一些肿瘤组织高表达,但是,关于其表达随肿瘤发生发展进程的变化尚未见报道。这对阐明其在肿瘤发生发展中的作用具有重要意义。本研究拟建立兔肝VX2移植瘤模型,检测在荷瘤过程中S100A6在血清中的含量及在转移瘤组织中表达的动态变化,为进一步明确S100A6在肿瘤发生发展中的作用积累实验依据。方法:1.重组人S100A6蛋白( rhS100A6 )的制备:将pGST-Moluc-hS100A6转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导rhS100A6表达,谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(Glutathione Sepharose 4B beads)分离纯化、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳( sodium dodecyl sulfate- polyacrylamide gel electrophoresis ,SDS-PAGE)和Western-blotting鉴定,BCA法定量,分装后-80℃保存备用。2.细胞增殖及迁移的检测:分别以终浓度均为3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、1000μg/ml的rhS100A6作用于人胚肾细胞HEK293、人气道上皮细胞9HTE、小鼠胚胎成纤维细胞MEF、中国仓鼠卵巢细胞CHO、小鼠间充质干细胞C3H10T1/2、兔鳞状细胞癌细胞VX2和人骨肉瘤细胞143B。MTT法检测其增殖。根据该实验结果,筛选出30μg/ml作为后续实验的终浓度。在30μg/ml的rhS100A6作用上述细胞后,用MTT法连续测定5天内细胞增殖的变化,用细胞划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移能力的变化。3.细胞内β-catenin水平的检测:30μg/ml的rhS100A6处理5种转化细胞系,分别使用免疫细胞化学法和Western-blotting法检测细胞内β-catenin表达水平。4.兔肝VX2移植瘤模型的建立:取自种兔的VX2鳞癌组织去包膜后,切成1mm×1mm×1mm小块,接种至肿瘤兔左肝下叶。术后密切观测肿瘤兔一般情况及肿瘤生长情况。5.标本采集:分别于接种后第7、12、17、19、21、23、25、27及29天处死动物,采集血清,分装后-80℃保存备用;采集肝内、网膜、肺上的转移瘤组织行石蜡切片。6.血清及转移瘤组织中S100A6含量的检测:用包被S100A6抗体的酶标板行ELISA检测血清中S100A6的含量;石蜡包埋组织切片后,用S100A6单克隆抗体行免疫组织化学检测S100A6在转移瘤中的表达。结果:1.重组蛋白rhS100A6制备成功。纯化后的诱导表达产物经过SDS-PAGE后,考马斯亮蓝染色,可见36KD处的GST-S100A6条带,经Quanity one分析纯度达92%;以S100A6抗体(1:1000),通过SDS-PAGE/Western-blotting法检测纯化后的GST-S100A6,出现阳性杂交条带。即rhS100A6制备成功。以标准化的BSA为参照品,以BCA法测定其浓度并绘制蛋白浓度标准曲线,由此曲线推算洗脱的rhS100A6(GST-S100A6)浓度为12.3 mg/ml,则1L菌液中可得6.15mg的rhS100A6。2.外源性rhS100A6对这5株转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的增殖无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系(143B和VX2)的增殖具有抑制作用,并呈一定的浓度、时间依赖性。1)浓度依赖性:5株转化细胞系在各浓度(3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、1000μg/ml)的rhS100A6处理后,其OD值与实验对照组(GST组)相比,差异不具统计学意义(P>0.05);3μg/ml和10μg/ml的rhS100A6对2株肿瘤细胞系的增殖无明显影响;而随后的4个浓度的rhS100A6处理致VX2细胞的OD值分别较GST组下降19.3%、26.4%、37.8%和47.1%(P<0.05),143B细胞的OD值分别较GST组下降17.4%、23.8%、33.7%和35.2%(P<0.05)。2)时间依赖性:根据上述结果,选用30μg/ml浓度作时间依赖实验。在5天观察时间内,5株转化细胞系的rhS100A6组的OD值与GST组相比,差异不具统计学意义(P>0.05);而2株肿瘤细胞系的OD值从干预后第3天起开始降低,与GST组相比,VX2细胞第3-5天的OD值分别下降13.1%、16.3%和17.9%(P<0.05),143B细胞第3-5天的OD值分别下降11.7%、14.7%和16.6%(P<0.05)。提示:外源性rhS100A6对这5株转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的增殖无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系(143B和VX2)的增殖具有抑制作用,并呈浓度、时间依赖。3.外源性rhS100A6对这5株转化细胞系的迁移无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系的迁移具有抑制作用。1)5株转化细胞系:(1)细胞划痕实验:30μg/ml的rhS100A6作用于5种转化细胞系,各个观测点的细胞迁移率与GST组的差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Transwell实验也进一步验证了上述结果:30μg/ml的S100A6作用于这5种细胞后,实验组穿膜细胞数与GST组的差异无统计学意义(P>0.05);同时,用33%醋酸溶液洗脱被甲基紫染色后的细胞,在490nm处读取其OD值(该值与穿膜细胞数成正比),该结果也进一步证实实验组与GST组差异无统计学意义(P>0.05)。提示,外源性rhS100A6对这5种转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的迁移无明显影响。2) 2株肿瘤细胞系:(1)细胞划痕实验:30μg/ml的rhS100A6作用于VX2和143B,24小时后的细胞迁移率较GST组分别降低17.2%(P<0.05)和16.4%(P<0.05),差异具有统计学意义。(2)Transwell实验证实,30μg/ml的rhS100A6作用于VX2和143B后,其穿膜细胞数较GST组分别减少10.1%(P<0.05)和11.2%(P<0.05)。同时,用33%醋酸洗脱被甲基紫染色的细胞,VX2细胞实验组490nm处的OD值较GST组降低12.3%(P<0.05)。提示,外源性rhS100A6对VX2和143B细胞的迁移有抑制作用。综上:外源性rhS100A6对这5株转化细胞系(HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2)的迁移无明显影响,但是对2株肿瘤细胞系(VX2和143B)的迁移具有抑制作用。4.外源性rhS100A6上调5株转化细胞系的β-catenin水平。免疫细胞化学显示:实验组β-catenin阳性染色的平均光密度值均高于GST组,HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2分别增高25.4%、15%、22.1%、22.7%和28%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western-blotting法检测结果也与上述结果一致:实验组阳性条带与内参条带的灰度比值较GST组均有升高,HEK293、9HTE、MEF、CHO和C3H10T1/2分别增高11.4%、21.9%、13%、14.8%和10.1%,差异具均有统计学意义(P<0.05)。提示:外源性rhS100A6能够上调这5株细胞的β-catenin水平。5.兔肝VX2移植瘤模型建立成功。实验共接种45只兔,成功建立兔肝VX2移植瘤模型45只,接种成功率100%。接种后肿瘤生长迅速,肿瘤兔存活期不超过30天;第15天前的兔体内未见明显转移灶,第17天时可见肝内转移及网膜转移,第25天可见肺转移,并开始表现恶病质。肿瘤组织病理切片证实为鳞状细胞癌。6.肿瘤兔血清S100A6含量随荷瘤进程呈进行性降低。从荷瘤第7天起到第29天,兔血清中S100A6的含量分别较对照组减少12.1% (P=0.237)、20.0%(P=0.105)、37.6%(P=0.01)、79.9%(P=0.01)、89.9%(P=0.01)、92.9%(P=0.01)、98.3%(P=0.01)、98.5%(P=0.01)和99.0%(P=0.01),即从第17天起(即发现肝内转移和网膜转移的时间),血清含量的差异有显着性。提示:肿瘤兔血清S100A6含量随荷瘤进程呈进行性降低。7. S100A6在肝内、网膜和肺的转移肿瘤组织中的表达随荷瘤进程进行性降低。免疫组织化学显示:在肝内、网膜和肺转移肿瘤组织中的S100A6阳性染色程度呈进行性降低,回归分析提示差异具有显着性(肝内肿瘤P=0.01,网膜肿瘤P=0.01,肺内肿瘤P=0.04)。提示:S100A6在肝内、网膜和肺的转移肿瘤组织中的表达随荷瘤进程呈进行性降低。结论:1.通过转化重组质粒到大肠杆菌,IPTG诱导表达和分离纯化,获得高纯度的rhS100A6蛋白。2.外源性rhS100A6对5株转化细胞系(人胚肾细胞HEK293、人气道上皮细胞9HTE、中国仓鼠卵巢细胞CHO、小鼠胚胎成纤维细胞MEF和小鼠间充质干细胞C3H10T1/2)的增殖及迁移无明显影响。3.外源性rhS100A6对兔鳞状细胞癌细胞VX2和人骨肉瘤细胞143B的增殖及迁移具有一定的抑制作用,并呈浓度、时间依赖。4.外源性rhS100A6能上调上述5株转化细胞系内β-catenin水平。5.随兔肝VX2移植瘤模型的进程,其血清S100A6水平进行性降低,并且在转移伊始(第17天)骤降。6.在转移肿瘤组织中,S100A6的表达也呈逐步降低趋势。7.外源性rhS100A6抑制VX2的增殖、迁移及兔肝VX2移植瘤模型兔血清和转移肿瘤组织中S100A6的进行性降低,提示:1)S100A6对肿瘤VX2具有抑制性作用;2)S100A6表达的下调可能是促进肿瘤发展的因素之一,因此,上调S100A6的表达可能延缓该发展进程;3)血清S100A6可望成为肿瘤VX2转移的标志物。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转化细胞系论文参考文献
[1].马闻,李星星,王胜,游莉,郭元元.外源性重组S100A6蛋白对5株转化细胞系的增殖、迁移能力及β-catenin水平的影响[J].重庆医科大学学报.2010
[2].马闻.外源性rhS100A6对七株转化细胞系和肿瘤细胞系的体外作用及血清和肿瘤组织中S100A6水平随兔肝VX2移植瘤发展进程的动态变化[D].重庆医科大学.2010
[3].王宪耀.人类胚胎肌肉细胞体外自发恶性转化细胞系抑癌基因的改变[D].汕头大学.2008
[4].张松.人胚胎肌肉组织来源的随机恶性转化细胞系的生物学特性[D].汕头大学.2008
[5].陈海滨,彭燕,石玉秀.EZH2蛋白在食管上皮永生化细胞系和恶性转化细胞系中的表达[J].中国组织化学与细胞化学杂志.2006
[6].彭燕,陈海滨,苏中静,张锦堃,沈忠英.细胞角蛋白在食管永生化上皮细胞和恶性转化细胞系的表达[J].实用医学杂志.2005
[7].谢经良,唐学玺.苜蓿转化细胞系核酸和蛋白质合成的研究[J].青岛海洋大学学报(自然科学版).2003
[8].邱薇,夏咸柱,范泉水,扈荣良,王雷.犬2型腺病毒E1转化细胞系的特性研究[J].细胞生物学杂志.2003
[9].张开泰,应万涛,鞑冀平,李刚,彭少华.ANXⅠ在原发性肺癌及BEP2D转化细胞系中的表达(英文)[J].中国肿瘤.2001
[10].杨其伟,史国利,陈雅文,刘丛,陈德风.反义PARP基因真核表达重组体的构建及其HeLa转化细胞系的建立[J].南开大学学报(自然科学版).1998
论文知识图
