导读:本文包含了精子载体法论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转基因,精子,载体,基因,激光,内化,睾丸。
精子载体法论文文献综述
吴斌,戴建军,张廷宇,张树山,吴彩凤[1]（2013）在《精子载体法获得植酸酶转基因猪》一文中研究指出将带有植酸酶基因的重构质粒酶切纯化后,与去除精浆的猪新鲜精液按比例混合,17℃孵育处理使重构质粒结合到精子头部,通过人工授精对6头受体母猪进行配种,4头受孕,产仔38头。经PcR对特异性片段扩增,结果表明:有6头PcR结果为阳性,阳性率为15.8%。扩增片段经克隆、测序、比对,与阳性对照组序列相似率均在99%以上,说明目的基因已转入阳性个体体内。(本文来源于《上海农业学报》期刊2013年05期）
刘荣立[2]（2013）在《精子载体法介导生产牛转基因胚胎的初步研究》一文中研究指出本研究主要探讨精子载体法介导生产牛转基因胚胎的相关影响因素,以便为建立精子载体法介导生产转基因牛的技术平台奠定基础。首先探讨了不同个体精液的洗涤次数、精子与IFN-EGFP质粒孵育的时间和浓度、线性/环状质粒比例等相关因素对IVF介导的牛转基因效果的影响。试验选择广娟3、6、10号叁头牛的精液,分别洗涤1-4次后检测精子活力和精子携带外源质粒的阳性率,结果发现,广娟3号、6号牛精子活力随洗涤次数的增加呈显着性下降(P<0.05),而广娟10号牛精子洗涤两次后的精子活力与洗涤一次和叁次的精子活力相比差异不显着(0.69vs0.77、0.65,P>0.05),且洗涤叁次时精子活力显着高于广娟3号和广娟6号(0.65vs0.57、0.56,P<0.05)；精子孵育质粒后其阳性率随着洗涤次数增加而增加,广娟10号牛精液洗涤二次或叁次的精子阳性率均显着高于广娟6号和广娟3号(P<0.05)。当广娟10号牛精子与质粒分别孵育不同时间(10min、30min、60min、90min和120min)时,孵育时间为l0min、30min组的精子活力与对照组无显着差异(P>0.05),且显着高于60min、90min、120min组(P<0.05),但30min组的精子阳性率显着高于1Omin组(20.98%vs10.62%),而与60min、90min、120min各组间差异不显着(P>0.05)；精子与质粒孵育不同时间后进行IVF,发现30min组的分裂率和囊胚率均显着高于60min组(63.84%vs50.52%；23.52%vs15.77%,P<0.05),而30min组和60min组间的分裂阳性率和囊胚阳性率差异不显着(P>0.05)。当孵育时间一定、精子与不同的质粒浓度孵育时,75nG/μl组的精子阳性率显着高于其他试验组(P<0.05),IVF后试验组的分裂率和囊胚率间差异不显着(P>0.05),但50ng/μl组的分裂阳性率和囊胚阳性率分别显着高于25ng/μl、100ng/μl组(38.66%vs26.94%、23.60%；19.05%vs7.14%、5.56%,P<0.05),而与75ng/μl组差异不显着(P>0.05)。将线性/环状比例分别为0：1、1：0、1：1的质粒与精子进行孵育,各比例组的精子阳性率无显着性差异(30.47%vs28.86%vs30.21%；P>0.05),进行IVF后,各组间的分裂率、分裂阳性率、囊胚率、囊胚阳性率无显着性差异(P>0.05)。其次比较了精子处理方式、精子与IFN-EGFP质粒孵育的浓度对ICSI介导的牛转基因效果的影响。结果显示,采用简单共孵育、NaOH.冻融叁种方式处理精子,精子阳性率分别为31.09%、37.19%、48.47%,各组间精子阳性率差异显着(P<0.05)；分别采用这叁种方式处理后的精子进行ICSI操作,冻融组的囊胚率显着低于简单孵育组(36.15%vs44.93%,P<0.05),但显着高于NaOH组(36.15%vs32.11%,P<0.05),且冻融组的囊胚阳性率显着高于简单孵育组(28.29%vs10.28%,P<0.05),而分裂率和分裂阳性率各组间差异不显着(P>0.05)。当冻融精子分别与5、25、50、75、l00ng/μl不同质粒浓度孵育时,发现75ng/μl组与100ng/μl组的精子阳性率显着高于5ng/μl组、25ng/μl组和50ng/μl组(51.07%、51.19%vs17.87%、31.51%、46.14,P<0.05)。将经不同浓度质粒孵育后的冻融精子进行ICSI操作,除75ng/μl组的分裂率显着低于各试验组外(P<0.05),其他各试验组间差异不显着(P>0.05)；除5ng/μl组的分裂阳性率显着低于各试验组外(P<0.05),其他各试验组间差异不显着(P>0.05)；50ng/μl组的囊胚率显着高于75ng/μl组,且其囊胚阳性率显着高于其他各试验组(P<0.05)。以上结果表明：(1)公牛个体差异以及精子洗涤次数对牛的精子活力、精子结合外源IFN-EGFP质粒的效率有影响；(2)精子与外源IFN-EGFP质粒孵育的浓度和时间对牛精子活力、精子结合外源质粒的效率和IVF介导的牛转基因效果均产生一定的影响,以质粒孵育浓度为50ng/μl、孵育时间30min为宜；(3)线性/环状IFN-EGFP质粒的不同比例对IVF介导的牛转基因效果无影响；(4)精子处理方式以及精子孵育的IFN-EGFP质粒浓度对ICSI介导的牛转基因效果有影响,经冻融方式处理的精子与浓度为50ng/μl的质粒浓度孵育可提高ICSI介导的牛转基因效率。(本文来源于《广西大学》期刊2013-06-01）
王加强,牟彦双,尹智,刘忠华[3]（2012）在《附加型载体结合精子载体法生产转基因鸡》一文中研究指出转基因动物是生物工程及生物医学的重要工具之一。目前,整合型载体广泛应用于转基因技术,但整合型载体可能导致插入突变,以及转入基因的随机表达甚至沉默。核骨架/核基质附着区(scaffold/matrix attachment region,S/MAR)依赖型载体是一种附加型载体,可在哺乳动物细胞内自主复制,因此能使高等真核细胞或机体产生更安全更稳定的基因修饰。本实验中,我们采用S/MAR依赖型载体pEGFP-S/MAR转染鸡精子,然后采用精子介导基因转移(sperm-mediated genetransfer,SMGT)技术获得了增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转基因鸡。人工输精后,我们在10天内共收集了32枚鸡蛋,置于人工孵化箱内孵化。我们分别对2枚孵化3天(E3)及2枚孵化15天(E15)的鸡胚、4只孵化后第1天死亡的雏鸡、3只孵化后第3天死亡的雏鸡以及4只孵化后存活至10天的雏鸡进行了检测,通过反转录PCR技术及荧光显微镜镜检技术,分别从RNA水平和蛋白水平检测了标记基因EGFP的表达情况,阳性率分别是2/2、1/2、2/4、1/3、3/4,总的阳性率为60%(9/15)。然后我们通过质粒拯救实验在核内染色体外Hirt-DNA提取物中检测到了pEGFP-SMAR载体,证明了载体的附加型状态。但由于对精液进行了体外长时间处理,受精率仅约为45%(15/33)。表达EGFP的非整合型转基因鸡的基因组不受外源基因干扰,外源基因也可躲避基因组的表观沉默调控,因此其不仅可以作为研究鸡发育的良好模型,又可作为高效的生物反应器,在生物工程及生物医学方面有广阔的应用前景。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）》期刊2012-07-10）
黄荣,闫益波,王子玉,张艳丽,宋洋[4]（2010）在《精子载体法在转基因家畜中的应用与前景》一文中研究指出论文综述了精子载体法在家畜(猪、牛、羊)遗传育种、乳腺生物反应器和异种器官移植中的应用,并对其今后发展方向进行了展望。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2010年06期）
路立里,郝耿,于建国,马帧,杨会国[5]（2010）在《精子载体法转基因技术研究进展》一文中研究指出精子载体法是以精子作为外源基因的载体,在受精过程中将外源基因导入动物胚胎,从而使外源基因进入子代的基因组中。作者就精子结合外源基因的机制,精子与外源基因结合的方法、影响精子转染外源基因和生产转基因动物的精子因素进行简要介绍,并对发展起来的输精管内注射转染法、曲细精管微注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2010年09期）
刘红波,吕培茹,杨小淦,朱姿英,胡林林[6]（2010）在《服务于精子载体法转基因相关研究的猪精子人工智能识别与预测平台的建立》一文中研究指出ICSI介导的载体法是进行转基因动物的研究的重要方法之一,多种处理策略都会对精子造成一定程度的损伤,建立合适的精子损伤检测平台非常重要。本研究旨在建立精子破膜智能优化策略,为精子载体法转基因研究相关奠定基础。方法:首先,采集来自于健康猪的精子,冻融和热处理后,检测其顶体的完整性,再利用激光光镊拉曼光谱对之无损化光谱测定;其次,对拉曼光谱处理数据进行主成分分析(principal component analysis,PCA)分析;最后,利用BP人工神经网络对处理精子进行识别和预测。顶体检测结果显示:冻融处理会显着对顶体造成破坏,热处理则破坏较小。拉曼光谱检测显示,特征峰1657(非饱和脂肪酸C=C伸缩振动或蛋白质酰胺Ⅰ)、1615(酪氨酸/色氨酸C=C伸缩振动)、1441(脂类和蛋白CH2变形振动)、1259(蛋白质酰胺Ⅲ)和1003(苯丙氨酸)峰值在冻融精子处理组和热处理组均明显降低。这说明随着顶体破坏率升高,造成了蛋白质和脂类的丢失,拉曼光谱检测结果与实际情况是一致的。核酸各特征峰在各组的变化,说明DNA发生了不同程度的解链。特征峰493(糖原),926(葡萄糖)的波动可以反映精子的基本能量代谢状况。BP网络对新鲜、热处理和冷冻处理精子预测的准确率分别为100%(10/10),90%(9/10)和100%(10/10)。总之,本研究初步了建立基于近红外激光光镊拉曼光谱检测的猪精子人工智能识别和预测平台,为优化精子破膜策略为精子载体法转基因相关研究相关奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）》期刊2010-08-01）
杨光[7]（2009）在《脂质体介导精子载体法建立转HBx、突变Kras基因树鼩和小鼠动物模型的研究》一文中研究指出目的在构建重组质粒pcDNA3.1-HBx和pEGFP-N1-Kras的基础上,采用直接注射的方法,将脂质体包裹的重组质粒注入动物睾丸中,探讨利用睾丸内生精小管微注射精子载体法建立转HBx、突变Kras基因树鼩的可行性,为建立转HBx、突变Kras基因树鼩肝癌动物模型并进一步研究两种基因在肝细胞癌发生发展过程中的作用打下基础。方法首先用多聚酶链式反应(PCR)扩增含NheⅠ和KpnⅠ酶切位点的Kras基因序列,对pEGFP-N1载体及Kras基因PCR产物双酶切,用连接酶将两者连接并转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定,构建Kras基因真核表达载体pEGFP-N1–Kras;成年雄雌树鼩按1:1或1:2配对,根据动物间的适应和受孕情况调整成相对固定的繁殖对。给所有动物建立档案,记录树鼩的生产情况,计算母树鼩的总产仔数、平均年产仔数及平均每次妊娠的合笼天数。记录仔动物的每日体重、进食量和健康情况。对仔树鼩用叁种方法进行喂养,即配方乳喂养、被动和主动母乳喂养。16只雄性成年树鼩随机分为pcDNA3.1-HBx组、pEGFP-N1-Kras组、pcDNA3.1-HBx + pEGFP-N1-Kras组和生理盐水对照组,利用脂质体2000包裹已构建的pcDNA3.1-HBx和pEGFP-N1-Kras重组质粒,按3:1比例混合(V/W),DMEM稀释后按分组用微量注射器多位点注射入16只雄性树鼩睾丸,每周一次,连续注射四次后再隔叁周与成年雌性树鼩合笼自然交配。对合笼交配后4个月内生产的仔树鼩进行肝活检,提取活检肝组织总DNA,PCR技术对基因整合进行鉴定,免疫组化检测其蛋白表达情况。C57BL/6小鼠转基因试验方法同树鼩,剪取一周龄仔鼠尾巴提取总DNA,PCR检测目的基因。结果双酶切pEGFP-N1-Kras后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为567bp的片段和几kb的大片断,说明Kras亚克隆入pEGFP-N1,经序列测定其含有完整的Kras基因片段; 20个月的实验期内共进行叁次转基因后的雄性树鼩,均具有正常的繁殖能力,叁轮实验观察期内共生产仔树鼩128只,其中成活58只。仔树鼩存活率为45.3%;PCR检测128只仔树鼩肝、肾等组织中的HBx基因,其中4只为阳性(单独注射组3只,联合注射组1只)。PCR产物经DNA测序证实为HBx基因。阳性率为3.57%。EGFP基因均为阴性。经转基因后的小鼠12个月的观察期内共获得HBx基因阳性动物3只(单独注射组2只,联合注射组1只),EGFP基因阳性动物1只(联合注射组)。对活检肝组织进行常规HE染色和免疫组化检测,显示3只树鼩(E9478、E9242、E9256)部分肝细胞有HBxAg阳性颗粒分布。两只树鼩(E9260、E9252)活检肝组织出现EGFP蛋白表达。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-N1-Kras;睾丸内注射精原细胞介导法构建转HBx基因树鼩动物模型是可行的,用此方法建立转突变Kras基因树鼩是否可行还需进一步研究。(本文来源于《广西医科大学》期刊2009-05-01）
甘炼,刘长军,马旭州,张文博[8]（2007）在《精子载体法在转基因水产动物中的应用研究进展》一文中研究指出精子载体法是以精子作为外源基因的载体,通过人工授精将外源基因导入动物胚胎,从而将外源基因带入子代的基因组中以实现基因转移。近年来,由于该法操作简单,并简化了基因导入过程等优点而逐步受到各国学者青睐。目前,精子载体法已应用在鱼类、甲壳类、贝类等水产动物的转基因研究上,并取得了一些成果。对精子载体法在转基因水产动物中的应用研究进展、存在问题、前景展望等作一综述。(本文来源于《渔业现代化》期刊2007年03期）
董焕声,沈伟,李兰,房勇卫,李晓林[9]（2007）在《精子载体法转基因动物的分子机制与制备策略》一文中研究指出精子载体法转基因由于具有简便易行、对胚胎发育影响小的特点而成为最具诱惑力的转基因方法之一,因此研究者们在不同的水平上对该方法进行了研究。从分子水平上简要分析了探讨精子结合外源DNA及其内化转运的机制、外源DNA在精细胞内的存在和降解;基于各种理论研究的进展总结了精子载体法制备转基因动物的策略。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2007年02期）
任红艳,张兴举,杨述林,李新云,单同领[10]（2007）在《精子载体法获得转人her2基因猪》一文中研究指出将带有外源基因的载体酶切纯化后与去精清的猪新鲜精液按比例混合,17℃静置处理使外源DNA进入精子头部,通过人工授精使受体母猪怀孕后产下20头仔猪,经PCR特异性片段扩增,特异片段序列测定和比对,共4头PCR结果为阳性。初步证明人her2基因已在猪染色体上整合,其整合率约为20%。本研究利用精子载体法成功获得了转基因阳性猪,为大动物的转基因研究提供了理论与实践的参考。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2007年03期）
精子载体法论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究主要探讨精子载体法介导生产牛转基因胚胎的相关影响因素,以便为建立精子载体法介导生产转基因牛的技术平台奠定基础。首先探讨了不同个体精液的洗涤次数、精子与IFN-EGFP质粒孵育的时间和浓度、线性/环状质粒比例等相关因素对IVF介导的牛转基因效果的影响。试验选择广娟3、6、10号叁头牛的精液,分别洗涤1-4次后检测精子活力和精子携带外源质粒的阳性率,结果发现,广娟3号、6号牛精子活力随洗涤次数的增加呈显着性下降(P<0.05),而广娟10号牛精子洗涤两次后的精子活力与洗涤一次和叁次的精子活力相比差异不显着(0.69vs0.77、0.65,P>0.05),且洗涤叁次时精子活力显着高于广娟3号和广娟6号(0.65vs0.57、0.56,P<0.05)；精子孵育质粒后其阳性率随着洗涤次数增加而增加,广娟10号牛精液洗涤二次或叁次的精子阳性率均显着高于广娟6号和广娟3号(P<0.05)。当广娟10号牛精子与质粒分别孵育不同时间(10min、30min、60min、90min和120min)时,孵育时间为l0min、30min组的精子活力与对照组无显着差异(P>0.05),且显着高于60min、90min、120min组(P<0.05),但30min组的精子阳性率显着高于1Omin组(20.98%vs10.62%),而与60min、90min、120min各组间差异不显着(P>0.05)；精子与质粒孵育不同时间后进行IVF,发现30min组的分裂率和囊胚率均显着高于60min组(63.84%vs50.52%；23.52%vs15.77%,P<0.05),而30min组和60min组间的分裂阳性率和囊胚阳性率差异不显着(P>0.05)。当孵育时间一定、精子与不同的质粒浓度孵育时,75nG/μl组的精子阳性率显着高于其他试验组(P<0.05),IVF后试验组的分裂率和囊胚率间差异不显着(P>0.05),但50ng/μl组的分裂阳性率和囊胚阳性率分别显着高于25ng/μl、100ng/μl组(38.66%vs26.94%、23.60%；19.05%vs7.14%、5.56%,P<0.05),而与75ng/μl组差异不显着(P>0.05)。将线性/环状比例分别为0：1、1：0、1：1的质粒与精子进行孵育,各比例组的精子阳性率无显着性差异(30.47%vs28.86%vs30.21%；P>0.05),进行IVF后,各组间的分裂率、分裂阳性率、囊胚率、囊胚阳性率无显着性差异(P>0.05)。其次比较了精子处理方式、精子与IFN-EGFP质粒孵育的浓度对ICSI介导的牛转基因效果的影响。结果显示,采用简单共孵育、NaOH.冻融叁种方式处理精子,精子阳性率分别为31.09%、37.19%、48.47%,各组间精子阳性率差异显着(P<0.05)；分别采用这叁种方式处理后的精子进行ICSI操作,冻融组的囊胚率显着低于简单孵育组(36.15%vs44.93%,P<0.05),但显着高于NaOH组(36.15%vs32.11%,P<0.05),且冻融组的囊胚阳性率显着高于简单孵育组(28.29%vs10.28%,P<0.05),而分裂率和分裂阳性率各组间差异不显着(P>0.05)。当冻融精子分别与5、25、50、75、l00ng/μl不同质粒浓度孵育时,发现75ng/μl组与100ng/μl组的精子阳性率显着高于5ng/μl组、25ng/μl组和50ng/μl组(51.07%、51.19%vs17.87%、31.51%、46.14,P<0.05)。将经不同浓度质粒孵育后的冻融精子进行ICSI操作,除75ng/μl组的分裂率显着低于各试验组外(P<0.05),其他各试验组间差异不显着(P>0.05)；除5ng/μl组的分裂阳性率显着低于各试验组外(P<0.05),其他各试验组间差异不显着(P>0.05)；50ng/μl组的囊胚率显着高于75ng/μl组,且其囊胚阳性率显着高于其他各试验组(P<0.05)。以上结果表明：(1)公牛个体差异以及精子洗涤次数对牛的精子活力、精子结合外源IFN-EGFP质粒的效率有影响；(2)精子与外源IFN-EGFP质粒孵育的浓度和时间对牛精子活力、精子结合外源质粒的效率和IVF介导的牛转基因效果均产生一定的影响,以质粒孵育浓度为50ng/μl、孵育时间30min为宜；(3)线性/环状IFN-EGFP质粒的不同比例对IVF介导的牛转基因效果无影响；(4)精子处理方式以及精子孵育的IFN-EGFP质粒浓度对ICSI介导的牛转基因效果有影响,经冻融方式处理的精子与浓度为50ng/μl的质粒浓度孵育可提高ICSI介导的牛转基因效率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
精子载体法论文参考文献
[1].吴斌,戴建军,张廷宇,张树山,吴彩凤.精子载体法获得植酸酶转基因猪[J].上海农业学报.2013
[2].刘荣立.精子载体法介导生产牛转基因胚胎的初步研究[D].广西大学.2013
[3].王加强,牟彦双,尹智,刘忠华.附加型载体结合精子载体法生产转基因鸡[C].中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）.2012
[4].黄荣,闫益波,王子玉,张艳丽,宋洋.精子载体法在转基因家畜中的应用与前景[J].家畜生态学报.2010
[5].路立里,郝耿,于建国,马帧,杨会国.精子载体法转基因技术研究进展[J].中国畜牧兽医.2010
[6].刘红波,吕培茹,杨小淦,朱姿英,胡林林.服务于精子载体法转基因相关研究的猪精子人工智能识别与预测平台的建立[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）.2010
[7].杨光.脂质体介导精子载体法建立转HBx、突变Kras基因树鼩和小鼠动物模型的研究[D].广西医科大学.2009
[8].甘炼,刘长军,马旭州,张文博.精子载体法在转基因水产动物中的应用研究进展[J].渔业现代化.2007
[9].董焕声,沈伟,李兰,房勇卫,李晓林.精子载体法转基因动物的分子机制与制备策略[J].生物技术通讯.2007
[10].任红艳,张兴举,杨述林,李新云,单同领.精子载体法获得转人her2基因猪[J].中国畜牧兽医.2007
论文知识图
