导读:本文包含了致细胞病变模型论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,蛋白尿,基因组,雷公藤,中药,补体,猪瘟。
致细胞病变模型论文文献综述
杨帆[1]（2013）在《补体C5a及其受体拮抗剂在阿尔茨海默病小胶质细胞病变模型中的作用》一文中研究指出阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)以进行性认知功能障碍和神经元病理性丢失为特征,是当今世界老龄化趋势下出现的主要神经变性疾病之一。与AD病因机制相关的假说较多,如Aβ毒性学说、Tau蛋白假说、炎症机制、自由基损伤学说、胆碱能学说等等,尽管众说纷纭,但Aβ毒性学说仍是目前的主流学说。AD主要是由于Aβ(β-amyloid protein)沉积形成的老年斑与高度磷酸化Tau蛋白聚集形成造成神经纤维缠绕和神经元丢失。在神经变性疾病的相关研究中发现,Aβ以寡聚体或纤维体两种状态存在,这两种状态的Aβ对神经细胞功能损伤的强度不同,一般认为,Aβ寡聚体的毒性较纤维体更强,但由于寡聚体的稳定性较差,易向纤维体转化,体外研究操作时间窗相对较短,所以使用寡聚体进行实验之前,对其进行鉴定就显得尤为重要,否则容易导致试验药物有效的假阳性结果,但目前关于Aβ聚集状态的鉴定方法报道较少。为此,本实验先制备不同聚集状态的Aβ1-42,然后通过原子力显微镜直观比较、鉴定两种Aβ1-42形态。在AD病理过程中,由于Aβ产生和清除的动态失衡,过多的Aβ聚集沉积形成老年斑,在AD老年斑周围聚集了大量活化的小胶质细胞,Aβ可促进小胶质细胞产生如TNF-α、IL-1β等炎症因子,从而对神经元在内的各种细胞造成损失甚至凋亡,本实验通过体外建立AD小胶质细胞模型,为AD的炎性机制研究提供体外实验依据。已有研究发现,补体系统在阿尔茨海默病的炎性发病机制中发挥重要作用。Aβ、小胶质细胞、星形细胞及异常上调表达的补体和细胞因子共同形成了复杂的炎性损伤网络,引起一系列炎症反应,最终导致神经细胞凋亡,补体系统介导的损害是Aβ细胞毒性作用机制中的重要环节之一,Aβ与经典补体激活通路的Clq发生特异性结合,C1q经Aβ的激活而活化,活化的Clq随之活化C3、C4、C5因子,并使补体裂解生成多种生物活性片段,包括C3a、C4a、C5a,最终形成膜攻击复合物(MAC,C5b-9复合体),具有神经毒性的MAC可直接溶解神经元,在AD脑内造成神经元凋亡。其中,补体系统的C5a在AD致病过程中的作用不详,最近研究发现,在C3基因敲除(C3-/-)小鼠中,IgG免疫复合物依然能够对小鼠产生C5a依赖的急性肺损伤,且损伤强度与野生型小鼠(C3+/+)的作用相当,这说明C5a的产生可以是非C3依赖性的,这是一条崭新的补体激活途径,同时提示,C5a的产生同样会产生类似补体系统经传统途径激活后所导致的炎症损伤作用。C5a可吸引表达C5a受体的小胶质细胞和星形胶质细胞向活化部位聚集,然后与Aβ发挥协同作用,刺激胶质细胞产生细胞因子、趋化因子、黏附分子等,也可直接与小胶质细胞结合诱发氧化应激反应,导致邻近的神经细胞损伤或死亡。因此,本研究将验证补体C5a对AD小胶质细胞激活、炎性介质释放的可能作用及其机制,并进一步明确C5a受体拮抗剂PMX205对上述病变过程的干预作用。[目的]建立A β1-42寡聚体和纤维体的制备及其鉴定方法,利用Aβ1-42寡聚体刺激小胶质细胞建立阿尔茨海默病(AD)小胶质细胞病变模型；在此基础上,探讨补体C5a对AD小胶质细胞模型释放炎性因子的作用及其机制,明确C5a受体拮抗剂对上述病变过程的干预作用。[材料和方法]1材料：小鼠BV2小胶质细胞株购自武汉大学的中国典型培养物保藏中心,澳洲胎牛血清(GIBCO),DMEM/F12高糖培养基(GIBCO),胰酶(含EDTA,0.25%,吉泰生化公司),人工合成的生物晶体Aβ1-42(ENZO公司),六氟异丙醇(HFIP,Sigma),二甲基亚砜(DMSO,MP Biomedicats),补体C5a(HBT公司),C5a受体拮抗剂(PMX205) hydrocinnamate-[OP(D-Cha)WR](上海吉尔生化有限公司合成),PE标记的抗小鼠CD88流式抗体(Bio legend公司),小鼠TNF-a ELLSA试剂盒(Bio legend公司),CCK-8试剂盒(日本同仁公司)。仪器：超净工作台(中国,AIRTECH),细胞培养箱(美国,Thermo Foma)、倒置显微镜(日本,OLYMAPUS)、流式细胞分析仪(德国,Becton Dickinson),低温高速离心机(德国,Beckman), SynerTM HT多通道酶标仪(美国,BIOTEK),原子力显微镜(本原纳米仪器公司,型号CSPM5500)。2方法：2.1BV-2细胞培养将BV-2细胞株接种到含10%胎牛血清、高糖DMEM培养基中培养,置于37。℃、5%C02培养箱中孵育,每3天传代一次,用0.25%胰酶+0.02%EDTA消化。2.2设定不同的环境条件将A β1-42单体分别聚集成寡聚体和纤维体两种状态将lmg Aβ1-42粉末溶于冷却的六氟异丙醇(HFIP)220μL中,室温孵育60分钟使Aβ1-42充分溶解,将Aβ肽-HFIP放置在冰上5～10分钟后移至通风橱内,打开瓶盖以便HFIP挥发。风干后形成透明的Aβ肽膜,溶解于44μL新鲜无水100%DMSO制成5mmol/LA β1-42合成肽,用无含酚红的F12培养液稀释成终浓度50nmol/L,4℃孵育24小时后,以4℃,14000r/min离心10分钟,取上清液即为Aβ1-42寡聚体,放置在-80℃保存。将5mmol/L Aβ1-42-DMSO合成肽用10mmo/L盐酸溶解稀释成终浓度50nmol/L,置于37℃温箱孵育24小时即为Aβ1-42纤维体,放置在-80℃保存。2.3利用原子力显微镜鉴定Aβ1-42的不同聚集状态。原子力显微镜鉴定方法：将A β1-42制成品滴于新鲜解离的云母片上,室温下静置5分钟后用去离子水轻柔冲洗,干燥皿中干燥10分钟后放置在原子力显微镜下观察,先用接触模式扫描到云母片上的生物制品,再改用轻敲模式进行扫描。轻敲模式参数：力常数40N/m,共振频率300kHz,扫描频率1Hz。图像处理软件为Imager4.60。2.4利用CCK-8法比较A β1-42寡聚体与纤维体对BV-2细胞存活率的影响。以细胞密度为105/ml的BV-2小胶质细胞接种于96孔板,加入无血清DMEM/F12高糖培养基培养24小时,然后分别加入不同浓度(0.01um/L,0.1um/L, lum/L,10um/L) Aβ42寡聚体和纤维体,共同作用24小时后吸除上清液,每孔加入180ul培养基L+20ul CCK-8试剂避光共同孵育,待2小时后通过酶标仪测定450nm波长处OD值。重复3次。2.5用Aβl-42寡聚体刺激BV-2小胶质细胞建立AD小胶质细胞病变模型。实验组分为Aβ1-42干预组、Aβ1-42+C5a组、Aβ1-42+C5aRA组、Aβ1-42+C5a+C5aRA组,分别加入不同浓度的C5a、C5aRA、 C5a+C5aRA进行干预,以BV-2小胶质细胞无干预组为空白对照。2.6ELISA法检测细胞上清中TNF-a水平经不同干预处理24小时后,取细胞上清液,按照试剂盒说明书进行ELISA检测上清液中TNF-a含量,波长设定为450nm,以96孔酶标仪检测吸光度值,通过标准品对数曲线计算出TNF-a含量。2.7流式细胞术检测细胞表面CD88表达经处理24小时后,将不同处理组细胞消化、重悬成单细胞悬液,每组细胞加入PE标记的抗小鼠CD88抗体进行染色,4℃孵育30分钟,用PBS清洗细胞3次,流式细胞仪检测CD88表达。3统计学处理应用SPSS13.0统计分析软件进行统计学处理,实验结果以x±sd表示,BV-2细胞经同一浓度水平、不同状态的Aβ1-42干预后的存活率比较方法采用独立样本t检验,补体C5a干预实验中两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较先采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),如有统计学意义差别时,再采用LSD法进行两两比较,以P<0.05为有效统计学差异水平。[结果]1在原子力显微镜下,Aβ1-42寡聚体呈球状或椭圆球状颗粒,高度为5nm左右,而Aβ1-42纤维体在镜下则呈现长条纤维状聚集,高度约为3nm左右,长度>1000nm。2CCK8法显示无论Aβ1-42寡聚体和纤维体均对BV-2细胞具有损伤作用,并且成剂量-效应关系,同时,在同样浓度水平的条件下,自0.1um/L浓度起,寡聚体的毒性作用均比纤维体更显着(所有P值均小于0.05)3Aβl-42寡聚体能刺激BV-2小胶质细胞分泌TNF-a,Aβ1-42组TNF-a浓度与空白对照组相比明显增加(t=16.60,P<0.05),该组CD88表达高于空白对照组(t=4.81,P<0.01)；Aβ1-42+C5a组的TNF-a浓度高于单纯Aβl-42组(F=24.50,P<0.05),Aβ1-42+C5aRA组TNF-α浓度低于单纯Aβ1-42组(F=280.12,P<0.01),发现50nmol/L C5aRA可显着抑制5nmol/L C5a对AD小胶质细胞TNF-α的释放作用(t=28.06,P<0.01),100nmol/L C5aRA可显着抑制10nmol/L C5a对AD小胶质细胞TNF-a的释放作用(t=5.73,P<0.01)。而Aβ1-42+C5a组及Aβ1-42+C5aRA组的CD88表达与单纯Aβ1-42组相比无显着差异(P>0.05)。[结论]原子力显微镜可直观地观察到Aβ1-42的不同聚集状态,是鉴别A B1-42寡聚体与纤维体的简便、直观的方法,Aβ2-42寡聚体比纤维体更具细胞毒性；C5a能刺激小胶质细胞分泌炎症因子TNF-a,且与Aβ1-42有协同作用,而C5aRA则能有效抑制该致病通路。(本文来源于《南方医科大学》期刊2013-03-18）
孙伟,吴汉利,万毅刚,周栋,刘丽[2]（2010）在《雷至胶囊对阿霉素肾病模型足细胞病变的影响》一文中研究指出目的:研究雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠肾脏nephrin、podocin、podocalyxin表达的影响,探讨其抗蛋白尿的作用机制及其足细胞的保护作用,评价其疗效及安全性。方法:采用分次尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型,将实验动物分为模型组、雷公藤多甙组、雷至胶囊组及正常对照组,第5周末处死大鼠,光镜、电镜观察肾组织病理形态学变化;半定量RT-PCR和West-Blot的方法检测肾皮质中nephrin、podocin、podocalyxin mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组相比,治疗组24小时尿蛋白、血脂明显降低,同时nephrin、podocin、podocalyxin蛋白及nephrinmRNA表达明显提高,podocin、podocalyxin mRNA表达明显降低,透射电镜显示足细胞足突病变不同程度改善;雷至胶囊组以上指标改善明显优于雷公藤多甙组,且无肝脏副作用。结论:①nephrin、podocin、与尿蛋白密切相关,雷至胶囊通过稳定足细胞分子nephrin、podocin发挥抗尿蛋白的;②podocalyxin、nephrin和podocin与足突融合及足细胞形态密切相关,雷至胶囊通过稳定足细胞分子podocalyxin、nephrin和podocin表达,来维持足细胞结构;③从多方面证实雷至胶囊疗效及安全性优于雷公藤多甙。(本文来源于《第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编》期刊2010-10-28）
秦卫松,刘志红,曾彩虹,郑春霞,贾忠辉[3]（2007）在《雷公藤甲素对Heymann肾炎模型足细胞病变的影响》一文中研究指出目的:利用被动型Heymann肾炎模型(passive Heymann nephritis,PHN)研究雷公藤甲素(triptolide)对膜性肾病的疗效及其对足细胞病变的影响。方法:实验动物分为正常对照组、PHN组和雷公藤甲素治疗组。雷公藤甲素(200μg/kg·d)灌胃治疗,分别在观察7天、14天、21天和28天时宰杀大鼠,留取血清和尿标本,观察尿蛋白、血清白蛋白、肝酶、肌酐和外周血白细胞等指标的变化;留取肾组织标本,行光镜、免疫病理、电镜和免疫电镜检查,并对肾组织IgG、C5b-9沉积以及Nephrin和Podocin的分布进行观察。结果:(1)尿蛋白:雷公藤甲素治疗7天即可显着降低PHN大鼠的蛋白尿,至14天、21天和28天时,治疗组大鼠的尿蛋白进一步降低,与Heymann肾炎大鼠之间差异有统计学意义(P<0·01)。在尿蛋白显着降低的同时,血浆白蛋白显着增加。(2)肾小球上皮侧免疫沉积物:电镜观察结果显示,雷公藤甲素治疗组上皮侧免疫复合物、钉突以及基膜反应性增殖均较Heymann肾炎组似有所改善,治疗后上皮侧电子致密物减少,基膜反应减轻,但在尿蛋白明显减少的同时,上皮侧电子致密物始终存在。(3)肾小球IgG和C5b-9的沉积:经雷公藤甲素治疗后肾小球IgG和C5b-9的沉积与Heymann肾炎大鼠相比,荧光强度有所减少,尤其在治疗后的第7天,减少较为明显。(4)足细胞病变:经雷公藤甲素治疗7天、14天、21天和28天后,均可见足细胞的足突损伤比对照组明显减轻,足突融合显着改善,足突宽度显着降低,观察至第28天时,治疗组可见大部分足细胞的足突形态基本恢复正常。(5)足细胞裂孔膜蛋白的变化:经雷公藤甲素治疗7天后,足细胞表面Nephrin和Podocin的表达比Heymann肾炎大鼠有明显增加,分布上的异常开始得到纠正,至第21天基本恢复成连续的线样分布。免疫电镜的结果再次显示了治疗后Nephrin的上述修复过程。结论:雷公藤甲素对被动型Heymann肾炎具有显着的治疗作用,能有效地减少蛋白尿,减轻肾组织免疫损伤,促进足细胞病变和裂孔膜蛋白结构的修复。雷公藤甲素疗效机制除了其免疫抑制和抗炎作用外,还与它能显着地改善和修复足细胞病变有关。(本文来源于《肾脏病与透析肾移植杂志》期刊2007年02期）
郑春霞,刘志红,孙吉平,曾彩虹,王生余[4]（2007）在《雷公藤甲素对嘌呤霉素模型足细胞病变的影响》一文中研究指出目的:研究雷公藤甲素对非免疫因素介导的、单纯足细胞病变模型——嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型的疗效及其对足细胞病变的影响。方法:采用PAN单次颈静脉注射法建立PAN肾病模型。大鼠分为正常对照组,模型组,雷公藤甲素预防组和治疗组。分别在1天、3天、5天、10天、14天和21天收集血尿标本,并处死大鼠留取肾组织标本。检测24h尿蛋白排泄量、血生化指标,行肾组织光镜和电镜观察肾小球病变和足突超微结构。采用定量学方法测定足突宽度。免疫荧光染色观察足细胞裂孔膜分子Nephrin和Podocin表达和分布变化。结果:雷公藤甲素无论是预防还是治疗性用药均能明显改善PAN肾病大鼠的肾病综合征状况,明显减少尿蛋白,加快血清白蛋白回升和血脂水平恢复。与此同时,雷公藤甲素预防组和治疗组大鼠在各观察点足突融合程度和范围均比PAN肾病大鼠明显减轻,至第14天仅见少数足突融合,第21天足突形态已基本恢复正常。雷公藤甲素预防性和治疗性用药均能够增加足细胞裂孔膜分子Nephrin和Podocin表达,促进其分布异常的修复。在第10天,Nephrin和Podocin不仅表达较PAN肾病大鼠明显增多,而且大部分血管袢已开始呈现连续的线状分布,以Podocin更为明显;两者的表达和分布在第14天已基本恢复,至第21天已完全恢复正常。结论:雷公藤甲素对PAN导致的足细胞损伤模型具有明显的预防和治疗作用,表现为减少蛋白尿,改善足突融合,恢复足细胞相关蛋白的表达及其分布,逆转足细胞病变。(本文来源于《肾脏病与透析肾移植杂志》期刊2007年02期）
黄艳,张磊[5]（2005）在《利用细胞病变抑制模型研究传统中药中抗病毒单体成分初探》一文中研究指出我国传统中药中具有清热解毒作用的成份与现代医学中病毒感染疾病治疗有着密切联系,利用细胞病变抑制技术(CPE)可对中药单体成分进行抗病毒研究,从而将传统中药与现代生物技术有机结合,为研究中药抗病毒机理、新制型开发及临床研究提供依据。研究中采用人骨髓瘤细胞／小鼠脑炎病毒(L41／EMCV)作为细胞病变抑制法体外抗病毒评价模型,经过验证,该模型对广谱抗病毒药物干扰素和利巴韦林适用。(本文来源于《中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集》期刊2005-07-01）
吴海祥,张楚瑜,郑从义,王家富,潘兹书[6]（2003）在《构建猪瘟病毒致细胞病变的PK-15细胞模型》一文中研究指出猪瘟病毒在离体细胞培养条件下不引起宿主细胞病变,病毒与宿主细胞之间相互作用的研究一直没有合适的模型.以猪瘟病毒中国标准强毒石门株为材料,通过基因工程的手段,在构建全基因组感染性克隆的基础上,对全基因组进行部分缺失,获得了7.5 kb的亚基因组,以携带野生型猪瘟病毒的PK-15细胞为宿主,用亚基因组进行转染,得到了能够诱导PK-15细胞产生CPE的亚基因组病毒,检测显示产生CPE的细胞培养物中野生型基因组和亚基因组共同存在.猪瘟病毒致细胞病变模型的构建,为进一步研究其致病的分子机制开辟了新的方向.(本文来源于《科学通报》期刊2003年08期）
蒋丽敏,王雪峰,魏克伦,杜凤兰,李微[7]（2000）在《小柴胡汤对体外新生大鼠柯萨奇病毒B_3心肌炎模型的酶学与细胞病变的影响》一文中研究指出目的 探讨中药小柴胡汤对病毒性心肌炎的心肌酶学和细胞病变的影响及对病毒性心肌炎的治疗作用。 方法 体外培养新生大鼠心肌细胞 ,并感染柯萨奇病毒 B3(Coxsackievirus B3,CVB3) ,以此作为体外病毒性心肌炎模型 ,观测心肌细胞感染 CVB32 4、48、72、96 h后乳酸脱氢酶(L DH )、β-羟丁酸脱氢酶 (HBDH )和细胞病变 ,并与小柴胡汤治疗组相比较。 结果 小柴胡汤对CVB3感染心肌细胞 2 4、48、72、96 h的心肌酶升高和细胞病变有显着的抑制作用。 结论 小柴胡汤具有抗柯萨奇病毒感染和保护心肌细胞作用。(本文来源于《中华围产医学杂志》期刊2000年01期）
致细胞病变模型论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究雷至胶囊对阿霉素肾病大鼠肾脏nephrin、podocin、podocalyxin表达的影响,探讨其抗蛋白尿的作用机制及其足细胞的保护作用,评价其疗效及安全性。方法:采用分次尾静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病模型,将实验动物分为模型组、雷公藤多甙组、雷至胶囊组及正常对照组,第5周末处死大鼠,光镜、电镜观察肾组织病理形态学变化;半定量RT-PCR和West-Blot的方法检测肾皮质中nephrin、podocin、podocalyxin mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组相比,治疗组24小时尿蛋白、血脂明显降低,同时nephrin、podocin、podocalyxin蛋白及nephrinmRNA表达明显提高,podocin、podocalyxin mRNA表达明显降低,透射电镜显示足细胞足突病变不同程度改善;雷至胶囊组以上指标改善明显优于雷公藤多甙组,且无肝脏副作用。结论:①nephrin、podocin、与尿蛋白密切相关,雷至胶囊通过稳定足细胞分子nephrin、podocin发挥抗尿蛋白的;②podocalyxin、nephrin和podocin与足突融合及足细胞形态密切相关,雷至胶囊通过稳定足细胞分子podocalyxin、nephrin和podocin表达,来维持足细胞结构;③从多方面证实雷至胶囊疗效及安全性优于雷公藤多甙。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
致细胞病变模型论文参考文献
[1].杨帆.补体C5a及其受体拮抗剂在阿尔茨海默病小胶质细胞病变模型中的作用[D].南方医科大学.2013
[2].孙伟,吴汉利,万毅刚,周栋,刘丽.雷至胶囊对阿霉素肾病模型足细胞病变的影响[C].第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编.2010
[3].秦卫松,刘志红,曾彩虹,郑春霞,贾忠辉.雷公藤甲素对Heymann肾炎模型足细胞病变的影响[J].肾脏病与透析肾移植杂志.2007
[4].郑春霞,刘志红,孙吉平,曾彩虹,王生余.雷公藤甲素对嘌呤霉素模型足细胞病变的影响[J].肾脏病与透析肾移植杂志.2007
[5].黄艳,张磊.利用细胞病变抑制模型研究传统中药中抗病毒单体成分初探[C].中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集.2005
[6].吴海祥,张楚瑜,郑从义,王家富,潘兹书.构建猪瘟病毒致细胞病变的PK-15细胞模型[J].科学通报.2003
[7].蒋丽敏,王雪峰,魏克伦,杜凤兰,李微.小柴胡汤对体外新生大鼠柯萨奇病毒B_3心肌炎模型的酶学与细胞病变的影响[J].中华围产医学杂志.2000
论文知识图
