小鼠基质重塑相关7(MXRA7)基因产物在肝内互作蛋白质的鉴定(英文)

小鼠基质重塑相关7(MXRA7)基因产物在肝内互作蛋白质的鉴定(英文)

论文摘要

基质重塑相关7(matrix remodeling associated 7,MXRA7)基因于2002年被命名,但无论在人类或其他动物体系,该基因或其蛋白质产物的功能均未知。直至我们最近的研究表明,该基因可能参与眼睛发育或肝损伤及修复。在本研究中,应用酵母双杂交策略,用小鼠MXRA7诱饵载体对小鼠肝cDNA文库进行筛选,发现23种蛋白质(MUP1, Cpt1a, Mat1a, aldh1l1, Cytb, H2-K1, Psmb1, marc2, Atp5j2, Sec24D, Trf, Rdh7, Apoe, Glud1, Gmfb, Alb, Hdlbp, Pzp, Etnk2, Nrn1, Serpina1a, Apoa2, GNMT)可能直接或间接地与MXRA7蛋白发生相互作用。其中,主要尿蛋白1(major urinary protein,MUP1)或其同家族蛋白质占所有候选克隆的1/6,提示其很可能是小鼠肝内与MXRA7蛋白有较强相互作用的蛋白质。通过基因重组在Hepa 1-6肝癌细胞系中同时过表达MXRA7和MUP1蛋白,荧光染色证明这两种蛋白质在细胞内共定位,应用抗MXRA7或MUP1的抗体进行Pull-down检测,则证明二者共同存在于细胞裂解液中。另外,重组MXRA7蛋白和MUP1蛋白在无任何其他蛋白质的缓冲液体系中直接形成复合体。因此,至少在小鼠肝组织体系中,MXRA7蛋白可能通过与MUP1等蛋白质的相互作用而发挥作用。

论文目录

  • 1 Materials and Methods
  •   1.1 Yeast-two-hybrid (Y2H) screening for MXRA7 partners
  •   1.2 Obtainment of recombinant murine MXRA7 proteins for interaction assay
  •   1.3 Overexpression of murine MXRA7 and MUP1 in murine hepatocarcinoma cell line
  •     1.3.1 Immunostaining of MXRA7 and MUP1 in co-transfected Hepa 1-6 cells
  •     1.3.2 Co-immunoprecipitation
  •   1.4 In vitro pull-down assay
  •   1.5 Animal experiments
  •   1.6 Statistical Analysis
  • 2 Results
  •   2.1 Partners of MXRA7 proteins in liver clustered in metabolisms and included major urinary proteins
  •   2.2 MXRA7 and MUP1 proteins co-localized and formed complex in murine hepatoma cells or livers
  •   2.3 MXRA7 and MUP1 proteins interacted directly in vitro
  •   2.4 Overexpression of MXRA7 in murine livers affected blood sugar levels
  • 3 Discussions
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王梦汝,沈莹,李园园,王宜强

    关键词: 基质重塑相关,主要尿蛋白,酵母双杂交

    来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学

    单位: 苏州大学医学部苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室

    基金: 国家自然科学基金项目(No.81271050)资助~~

    分类号: Q51

    DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.01.08

    页码: 51-60

    总页数: 10

    文件大小: 686K

    下载量: 85

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