导读:本文包含了多克隆抗血清论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:血清,基因,蛋白,密码子,免疫,紫茉莉,丙酮酸。
多克隆抗血清论文文献综述
于秋荣,席俊,张红,李爽,陈珍妮[1](2019)在《β-伴大豆球蛋白鼠源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定》一文中研究指出用抗原免疫动物获取血清是常规的抗体制备方法。β-伴大豆球蛋白作为大豆蛋白中最主要的致敏蛋白之一,制备相关抗体是建立其免疫学快速检测方法的基础。将提取的天然β-伴大豆球蛋白与弗氏佐剂混合,乳化后皮下多点注射Balb/c小鼠,每3周加强免疫1次,免疫后第10天对所制备多抗血清的免疫学特性进行鉴定。结果表明,5次免疫后6只小鼠多抗血清效价均达1∶6 400以上,其中6号小鼠的多抗血清敏感性最强,其半数抑制浓度IC50为718 ng·mL-1。此多抗血清与芝麻蛋白、麦胚球蛋白无交叉反应,与花生蛋白、大豆球蛋白交叉反应率低于10%。本试验成功制得了效价高、敏感性强、特异性好的鼠源多抗血清。(本文来源于《河南工业大学学报(自然科学版)》期刊2019年02期)
陈芳,王兰,张左兵[2](2019)在《基于密码子优化策略的斑马鱼FOXP3A分子的原核表达及多克隆抗血清制备》一文中研究指出目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894 bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5 mmol/LIPTG诱导10 h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×10~5以上。结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年01期)
王咏枝,屈会化,邢洪霞,张越,成金俊[3](2018)在《大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定》一文中研究指出目的合成大黄酸人工抗原,制备敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗血清。方法采用碳二亚胺法制备大黄酸人工抗原,将大黄酸分别与牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联。用紫外扫描法鉴定大黄酸人工抗原是否偶联成功,免疫新西兰兔,制备多抗血清,通过间接竞争ELISA测定抗血清效价,通过间接竞争ELISA鉴定抗血清的敏感性和特异性,并分别用间接竞争ELISA和HPLC检测大黄中大黄酸的含量。结果 2只新西兰兔产生的多抗血清效价在1∶64 000以上,其中,2号兔多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度为0.09 ng/mL,且具有良好的特异性。兔抗血清测得大黄中大黄酸含量为(0.026±0.001)%,HPLC测得大黄中大黄酸含量为(0.027±0.000)%。结论本研究制备了敏感性高、特异性强的大黄酸兔源多克隆抗体血清,为建立大黄酸免疫亲和色谱分析技术和快速检测方法奠定了基础。(本文来源于《中国中医药信息杂志》期刊2018年05期)
李小琴,张鹏远,任龙辉,代瑾然,王建光[4](2017)在《落葵皱缩花叶病毒CP基因的原核表达及多克隆抗血清的制备》一文中研究指出以感病紫茉莉叶片为材料,采用RT-PCR方法克隆落葵皱缩花叶病毒(Basella rugose mosaic virus,Ba RMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并构建p ET30a-Ba RMV-cp原核表达载体。将原核表达载体转化大肠杆菌[Rosetta(DE3)Plys S],成功诱导表达得到大小约为40.0 k D的与预期大小相符的融合蛋白(His-CP)。SDS-PAGE电泳完毕后用0.25 mol·L~(-1)的KCl溶液染色,将目的蛋白切胶纯化后免疫新西兰大白兔,制备抗血清。间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)检测该抗体的效价为1︰16 000,Western-blotting分析表明该抗体具有很强的特异性。对野外感病紫茉莉和实验室内接种发病本氏烟检测结果也表明,所制备的抗体具有良好的特异性,可用于大规模样品检测。(本文来源于《园艺学报》期刊2017年10期)
钟亮尹,刘思敏,曾智华,徐晓松,卢汉威[5](2016)在《弓形虫CDPK5基因多克隆抗血清的制备及功能鉴定》一文中研究指出目的筛选弓形虫(Tg)CDPK5基因序列的免疫多肽,将合成多肽免疫新西兰白兔制备多抗血清,并对其功能进行鉴定。方法利用生物信息学的方法分析确定Tg CDPK5序列免疫多肽,再用合成的多肽免疫新西兰白兔制备多抗。收集多抗血清,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定多抗滴度,蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定免疫活性,免疫荧光实验分析Tg CDPK5的亚细胞定位。结果通过生物信息学分析,选择Tg CDPK5序列N端一段长17bp的多肽序列作为免疫多肽;用合成的多肽免疫兔子,成功获得多抗血清。ELISA测定多抗血清效价为1∶640 000;Western blot证明该多抗血清能特异性识别Tg CDPK5(75.4×103)条带;免疫荧光实验结果表明,该多抗能特异性识别弓形虫内源Tg CDPK5蛋白。结论研究根据Tg CDPK5序列信息的分析,获得Tg CDPK5序列免疫多肽,并制备兔源多克隆抗体。(本文来源于《重庆医学》期刊2016年16期)
程尧[6](2016)在《猪链球菌的分离鉴定及1910RR蛋白多克隆抗血清的制备》一文中研究指出猪链球菌是一种重要的病原菌,对人和兽都具有致病性,猪感染链球菌会出现脑膜炎,败血症,心内膜炎,关节炎等,人感染链球菌会出现胸膜炎,败血症,甚至会死亡,不但导致了养殖业巨大的经济损失,并引起了很大的公共健康问题。猪链球菌的血清型按照荚膜多糖抗原的差别可以分为35个。致病性血清型有1型,1/2型,2型,7型,9型和14型,其中2型菌株的致病性最强,流行最为广泛,所以被认为是研究链球菌的代表。为了鉴定导致湖北省地区某养猪场猪只急性死亡的致病菌,并控制该猪场病情,试验采用PCR方法对菌株进行鉴定与分型,再对分离菌进行药敏试验和致病性试验。由于鉴定出来的菌株并非2型,不适合作为研究所用的代表菌株,所以只好引入标准2型菌株,并对其一对双组份调控系统1910HK/RR中的1910RR蛋白做了相关研究。所做工作报道如下:(1)猪链球菌的临床分离和耐药性试验采取患病猪的心包积液和肺组织各3份被采集作为病理材料,在5%血清的胰蛋白大豆琼脂培养基上划线接种,进行菌落形态和革兰氏染色的观察。采用猪链球菌通用引物鉴定其为猪链球菌,再采用型特异性引物来确定它的血清型。为了确定有效的药物进行治疗对其进行了药敏实验,为了检验其致病性对小鼠进行攻毒试验。试验结果表明:该病原菌为猪链球菌,但是血清型为除1型,2型,7型,9型以外的其他型。头孢菌素、青霉素、氨卞西林、氯霉素、利福平、万古霉素、阿莫西林、氧氟沙星、左氧氟沙星等高度抑制该菌的生长,环丙沙星,恩诺沙星、复方新诺明、四环素中度抑制该菌的生长,而多黏霉素B、磺胺甲基异恶唑、林可霉素等没有抑制效果。同时该菌的致病性较强,可导致小鼠死亡。这说明该猪场致病菌为猪链球菌,且可使用头孢菌素和青霉素等药物进行治疗。(2)1910RR蛋白多克隆抗体的制备PCR扩增的1910rr基因与表达质粒pET30aBamHI/HindIII双酶切后,以T4连接酶连接,构建表达载体pET30a-1910rr,酶切和测序鉴定正确后,运用化学转化法将其导入大肠杆菌BL21进行表达。通过改变诱导时间和IPTG浓度,降低诱导的温度,确定了pET30a-1910RR融合蛋白表达的最佳条件。以六联组氨酸镍柱吸附融合蛋白,用不同浓度的咪唑进行洗脱,以此确定蛋白洗脱的最佳咪唑浓度。洗脱下的蛋白采用TE透析液透析,除去咪唑等小分子杂质后得到较纯的蛋白。测量蛋白质浓度,再用蔗糖隔着透析袋吸附其中的水分以提高浓度。纯化后的1910RR蛋白对日本大耳兔进行皮下免疫,2周一次,共免疫四次,第叁次和第四次免疫时剂量增加。叁次免疫后用Western blot检测1910RR蛋白的免疫学活性,四免后以琼脂扩散实验测定所制备的1910RR多克隆抗体效价。结果表明:构建的质粒pET30a-1910rr酶切与测序鉴定正确。融合蛋白成功的在上清中表达,纯化效果较好。免疫印迹检测证实了血清中1910RR蛋白多克隆抗体的存在。琼脂扩散实验测定了所制备的1910RR蛋白多克隆抗体的效价。本研究从送检的病死猪的心包积液、肺等病理材料中成功分离到致病性猪链球菌,确定了病因,而对分离菌进行的药敏试验确定了治疗药物,对控制该猪场病情做出了贡献;同时通过原核表达系统表达了猪链球菌2型反应调控蛋白1910RR,制备了兔抗1910RR蛋白多克隆抗体,为运用CHIP-Seq技术研究双组分调控系统1910HK/RR与受调控基因的作用方式,并获得与1910RR蛋白相互作用的DNA序列及核心位点奠定物质基础。(本文来源于《长江大学》期刊2016-04-01)
徐立铭,郑琦,康健,步云,钱磊[7](2015)在《耻垢分枝杆菌MurB蛋白的可溶性表达、纯化和多克隆抗血清制备》一文中研究指出获得耻垢分枝杆菌MurB纯化蛋白,制备小鼠源性MurB多克隆抗血清。首先,利用PCR技术扩增耻垢分枝杆菌murB基因,连接至pColdII载体并转化至E.coli BL21(DE3)菌株;然后,低温下以IPTG诱导MurB蛋白的表达,并利用Ni-His亲和层析技术纯化MurB蛋白;最后,将MurB纯化蛋白联合免疫佐剂注射BalB/c小鼠,经过初次免疫和2次加强免疫后分离抗血清,并分别利用ELISA和Western blot技术检测制备的抗血清对MurB蛋白的效价和特异性。结果显示:已获得具有理想浓度和纯度的MurB纯化蛋白;已制备具有较高效价的小鼠源性MurB多克隆抗血清,该抗血清能够特异性识别耻垢分枝杆菌可溶性蛋白组分中的MurB蛋白。因此,制备的MurB多克隆抗血清能够应用于分枝杆菌MurB蛋白的检测分析,为MurB功能研究奠定了基础。(本文来源于《中国科技论文》期刊2015年18期)
王青,徐彦召,魏晓晓,王秋霞,杭柏林[8](2015)在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5a多克隆抗血清的制备》一文中研究指出构建XX2012株猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5a蛋白基因的真核表达载体,并制备出GP5a蛋白的多克隆抗血清。以XX2012株PRRSV GP5a蛋白的基因序列为扩增模板,设计并合成一对特异性扩增引物,通过RTPCR扩增得到该病毒株的GP5a蛋白全长基因片段,将其定向克隆到真核表达载体p CAGG中,构建含有GP5a蛋白基因的重组表达载体p CAGGS-GP5a,并将获得的p CAGGS-GP5a载体采用基因免疫的方式免疫BALB/c小鼠制备GP5a蛋白的多克隆抗体。结果显示,成功克隆出了XX2012株PRRSV GP5a蛋白全长基因,片段大小为156 bp;构建的p CAGGS-GP5a载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误;通过叁次基因免疫小鼠成功制备出了GP5a蛋白的多克隆抗体,间接免疫荧光试验证实制备出的多克隆抗体能特异性识别病毒感染后的细胞。由此获得了PRRSV GP5a蛋白基因的真核表达载体,制备出了GP5a蛋白的特异性多克隆抗血清,为今后开展GP5a蛋白的亚细胞定位及相关功能的研究奠定了基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年08期)
黄健,黄美容,杨昌伟,朱杰华,骆诗露[9](2015)在《肺炎链球菌SPD1672蛋白EL4功能环的原核表达及多克隆抗血清制备》一文中研究指出目的原核表达肺炎链球菌SPD1672蛋白膜外EL4功能环,制备并鉴定其多克隆抗血清。方法生物信息学分析SPD1672蛋白结构功能区,用p Cold TF质粒构建含EL4功能环的原核表达载体,IPTG诱导蛋白质表达后行镍柱纯化。经HRV 3C蛋白酶酶切、鉴定后,免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗血清,间接ELISA鉴定效价,western blot鉴定抗血清与肺炎链球菌D39菌株天然蛋白质的亲合力。结果 EL4环可能为SPD1672蛋白酶活性中心。成功构建p Cold TF-SPD1672EL4原核表达载体,诱导表达后获得纯度大于95%的重组融合目的蛋白质。该蛋白质免疫新西兰大白兔后获得效价达到5.12×106的多克隆抗血清,此抗血清与重组的SPD1672EL4蛋白及肺炎链球菌中天然SPD1672蛋白有较好的亲合力。结论成功获得高纯度的肺炎链球菌SPD1672EL4蛋白及其特异的多克隆抗血清,为进一步对SPD1672蛋白的结构与功能研究奠定了基础。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2015年04期)
易珍,袁佳佳,冯德峰,王盼盼,邓云[10](2014)在《小鼠nulp1基因多克隆抗血清的制备及检测》一文中研究指出为了在小鼠模型中更深入地研究nulp1蛋白在心脏发育中的功能,采用PCR技术扩增出小鼠nulp1基因的部分编码区并连接入pET-28a表达载体中,之后将重组质粒转入大肠杆菌(E.coli)通过IPTG诱导表达Hisnulp1融合蛋白,对该融合蛋白采用Ni-IDA凝胶柱层析纯化后,免疫新西兰兔制备了多克隆抗体,并用western blotting对抗体进行分析.结果表明,获得了高效价的特异性兔抗nulp1多克隆抗体.这为nulp1功能的进一步研究奠定了基础.(本文来源于《怀化学院学报》期刊2014年05期)
多克隆抗血清论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
目的:构建斑马鱼FOXP3A融合蛋白的原核表达系统,诱导表达并制备多克隆抗血清。方法:选取斑马鱼foxp3a基因cDNA的894 bp特异区段(s-foxp3a),对该片段进行密码子优化后构建原核表达载体pET-32a-s-foxp3a,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白并纯化,纯化后的蛋白免疫家兔,制备斑马鱼FOXP3A蛋白的多克隆抗血清,4次免疫后取血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价。结果:在16℃经0.5 mmol/LIPTG诱导10 h的条件下,SDS-PAGE分析表明斑马鱼S-FOXP3A-His融合蛋白以包涵体形式产生;间接ELISA检测结果显示,FOXP3A蛋白多克隆抗血清的效价在1.6×10~5以上。结论:制备了高效价的斑马鱼FOXP3A多克隆抗血清,为进一步解析斑马鱼FOXP3A蛋白的功能提供了基础工具。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
多克隆抗血清论文参考文献
[1].于秋荣,席俊,张红,李爽,陈珍妮.β-伴大豆球蛋白鼠源多克隆抗血清的制备及其免疫学特性鉴定[J].河南工业大学学报(自然科学版).2019
[2].陈芳,王兰,张左兵.基于密码子优化策略的斑马鱼FOXP3A分子的原核表达及多克隆抗血清制备[J].生物技术通讯.2019
[3].王咏枝,屈会化,邢洪霞,张越,成金俊.大黄酸兔源多克隆抗血清的制备与鉴定[J].中国中医药信息杂志.2018
[4].李小琴,张鹏远,任龙辉,代瑾然,王建光.落葵皱缩花叶病毒CP基因的原核表达及多克隆抗血清的制备[J].园艺学报.2017
[5].钟亮尹,刘思敏,曾智华,徐晓松,卢汉威.弓形虫CDPK5基因多克隆抗血清的制备及功能鉴定[J].重庆医学.2016
[6].程尧.猪链球菌的分离鉴定及1910RR蛋白多克隆抗血清的制备[D].长江大学.2016
[7].徐立铭,郑琦,康健,步云,钱磊.耻垢分枝杆菌MurB蛋白的可溶性表达、纯化和多克隆抗血清制备[J].中国科技论文.2015
[8].王青,徐彦召,魏晓晓,王秋霞,杭柏林.猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5a多克隆抗血清的制备[J].中国生物工程杂志.2015
[9].黄健,黄美容,杨昌伟,朱杰华,骆诗露.肺炎链球菌SPD1672蛋白EL4功能环的原核表达及多克隆抗血清制备[J].临床检验杂志.2015
[10].易珍,袁佳佳,冯德峰,王盼盼,邓云.小鼠nulp1基因多克隆抗血清的制备及检测[J].怀化学院学报.2014