柑橘黄龙病菌亚洲种菌毛装配蛋白基因(PAP)序列分析、原核表达及抗血清制备

论文摘要

菌毛装配蛋白（Flp pilus assembly protein, PAP）是一种分泌蛋白,参与细菌菌毛的组装,表达量高。本研究以感染柑橘黄龙病的海南琼海市绿橙叶片为材料提取总DNA,用其菌毛装配蛋白基因（PAP）的特异引物进行PCR扩增,获得该基因的目的片段,序列分析表明海南琼海柑橘黄龙病菌PAP基因与柑橘黄龙病菌亚洲种（GenBank登录号:CP001677.5）PAP基因序列一致。功能预测表明它含有两个与分泌功能相关的CpaC和Secretin结构域。PCR产物通过EcoRⅤ和XhoⅠ双酶切构建重组载体pET32a-PAP。将pET32a-PAP载体转化BL21（DE3）大肠杆菌,经终浓度为1 mmoL/L IPTG诱导,目的蛋白主要以包涵体形式表达。目的蛋白经Ni2+-NTA层析柱纯化,并作为抗原腹腔免疫小白鼠,获得效价在1∶500～1∶1 000的多克隆抗血清。Western blot分析表明,PAP多克隆抗血清特异性强;以田间样品总蛋白做抗原时,能特异性检测染病样品。本研究为PAP蛋白功能研究和开发柑橘黄龙病菌的蛋白检测产品提供研究基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李宾宾,余乃通,杨毅,王健华,张秀春,刘志昕

关键词: 柑橘黄龙病,基因表达,蛋白,抗血清制备

来源: 植物保护 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

单位: 海南大学热带农林学院,中国热带农业科学院热带生物技术研究所海南省微生物学重点实验室/农业农村部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

基金: 海南省重大科技计划项目(ZDKJ2017003),中国热带作物学会青年人才托举工程(CSTC-QN201704)

分类号: S432.42

DOI: 10.16688/j.zwbh.2018367

页码: 214-220

总页数: 7

文件大小: 8935K

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