导读:本文包含了非肌肉型肌球蛋白重链论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒,NMHCⅡ-A,致病性,组织定位
非肌肉型肌球蛋白重链论文文献综述
于琳琳,周德方,张利,周恩民,郑乾坤[1]（2018）在《猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A表达的影响》一文中研究指出为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染对非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)表达及组织定位的影响,本研究选取5月龄的PRRSV阴性健康长白猪和莱芜黑猪各12头,分别设感染组和对照组,滴鼻感染PRRSV后分别于3 d、7 d、14 d、21 d、28 d迫杀,分别对器脏进行病理组织学观察,免疫组织化学(IHC)和荧光定量PCR(q PCR)检测。组织病理结果显示,PRRSV对商品长白猪产生较强的致病性,感染猪表现明显的免疫抑制,典型的间质性肺炎和各器官炎症;而莱芜黑猪病轻微,仅呈轻微的间质性肺炎,部分淋巴结出现坏死性炎症。IHC检测结果显示,正常组织细胞中均有NMHCⅡ-A表达,但在肺、心肌、脾、扁桃体、软骨中表达较高,其主要定位于细胞浆中,两个品种间无显着差异;PRRSV感染后,NMHCⅡ-A表达趋势增强,且出现于细胞核中,推测PRRSV感染增强了NMHCⅡ-A核浆穿梭功能,两个品种间无显着差异。RT-q PCR检测结果显示,PRRSV在组织中的病毒载量与NMHCⅡ-A的转录水平呈正相关,不同组织间波动规律相似,但在不同品种间波动程度差异明显。综上所述,PRRSV感染对猪体内NMHCⅡ-A的表达产生了明显的影响,但品种间差异不明显。本实验为NMHCII-A作为PRRSV抑制物的候选蛋白提供了实验依据,并为今后PRRSV的防控奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年01期）
刘军,杨钟华,张山锋,王新泽[2]（2017）在《非肌肉肌球蛋白重链-9在骨肉瘤组织中的表达及其对细胞上皮间质转换和侵袭能力的影响》一文中研究指出目的非肌肉肌球蛋白重链-9(MYH9)对肿瘤的发生发展具有重要的调控作用,文中旨在探讨MYH9在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞上皮间质转换(EMT)和侵袭能力的影响。方法收集52例骨肉瘤癌组织及距肿瘤边缘5cm处的癌旁组织,RT-PCR和免疫组化检测骨肉瘤癌组织和癌旁组织中MYH9的mRNA和蛋白表达水平。脂质体法转染U2-OS细胞MYH9 shRNA表达质粒,沉默MYH9表达,转染后将细胞分成3组:以正常的U2-OS细胞为对照组、以转染空质粒的U2-OS细胞为空载组和以转染MYH9 shRNA的U2-OS细胞为干扰组。采用RT-PCR检测转染后U2-OS细胞MYH9的mRNA水平,Western blot检测U2-OS细胞转染后MYH9以及EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的蛋白水平变化,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化。结果 RT-PCR检测结果表明,癌旁组织中MYH9 mRNA的相对表达量(1.526±0.148)较癌组织(3.547±0.195)明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果表明,MYH9蛋白在肿瘤组织中主要表达于细胞质中,且MYH9蛋白在癌组织中表达显着高于癌旁组织,其阳性表达率分别为59.6%(31/52)和26.9%(14/52),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果表明,沉默MYH9基因表达后,干扰组MYH9 mRMA相对表达量和蛋白水平较对照组和空载组明显降低(P<0.05)。与对照组相比较,干扰组骨肉瘤细胞U2-OS中E-cadherin蛋白明显上调,Vimentin蛋白出现下调。Transwell实验表明,48 h后各组均有穿出微孔滤膜的细胞,干扰组穿出微孔滤膜的细胞[(41.2±15.1)个]较对照组[(117.3±12.4)个]和空载组[(193.5±14.7)个]明显减少(P<0.05)。结论 MYH9蛋白在骨肉瘤组织中表达显着高于癌旁组织,沉默MYH9可以通过降低骨肉瘤细胞上皮间质转换来降低骨肉瘤的侵袭能力。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2017年06期）
吴明,肖永强,刘名倬,李郁葱,李明利[3]（2016）在《慢病毒载体介导的shRNA沉默非肌肉肌球蛋白重链ⅡA对骨髓间充质干细胞旁分泌的影响》一文中研究指出目的观察慢病毒介导shRNA沉默非肌肉球蛋白重链ⅡA(MYH9)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)旁分泌功能的影响。方法采用脂质体法将含MYH9干扰序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro(实验组)质粒转染到293T细胞,以转染pHBLV-U6-ZsGreen-Puro空载质粒的细胞为空载组,以正常未转染细胞为对照组,包装产生的病毒液感染BMSCs。用荧光显微镜观察荧光蛋白表达;以β-actin为内参,分别用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫印迹(Western blot)检测MYH9 mRNA及蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测其培养基上清液中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、促血管生成素1(ANG-1)和促血管生成素2(ANG-2)的含量。结果成功构建重组质粒pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro,转染293 T细胞产生高滴度慢病毒,荧光显微镜下可见被慢病毒感染的rBMSCs表达强绿色荧光蛋白,qRT-PCR和Western blot结果显示2条慢病毒感染MYH9 mRNA表达水平明显下调,显着低于对照组和空载组(P<0.05);沉默MYH9基因后,实验组的ANG-1和bFGF在增殖末期较对照组和空载组有明显上升(P<0.05),ANG-2和VEGF未见明显差异(P>0.05)。结论 pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro慢病毒包装质粒转染BMSCs后,BMSCs旁分泌能力未受明显影响。(本文来源于《广东医学》期刊2016年16期）
吴海珍,刘宁宁,张璐,吕军华,肖一红[4]（2012）在《非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A单克隆抗体的制备及其靶位点区域的鉴定》一文中研究指出为制备非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHC-II A)的单克隆抗体(MAb),本研究将编码NMHC-Ⅱ A羧基端1 651～1 960氨基酸的表达重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞Rosseta中诱导表达,重组蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG 4000介导融合。ELISA方法检测筛选阳性杂交瘤细胞,制备腹水并纯化MAb,以间接免疫荧光和免疫沉淀方法鉴定MAb的特异性,western blot检测MAb靶位点区域。结果表明,通过筛选得到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其抗体亚型为IgG1,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶2 560和1∶1.0×106;该MAb能够特异性结合相应抗原,并结合Marc-145细胞;western blot结果显示该抗体与NMHC-Ⅱ A的1 812～1 894氨基酸位点结合。该抗体的制备为研究NMHC-Ⅱ A在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中的作用奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2012年10期）
吕军华,刘宁宁,赵钦,马玉萍,张冲[5]（2012）在《非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用》一文中研究指出前期研究结果证明抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的抗独特型抗体特异性结合Marc-145细胞上的非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(Nonmuscle myosin heavy chainⅡ-A,NMHCⅡ-A)蛋白,其结合位点位于NMHCⅡ-A的羧基端。本研究通过真核表达NMHCⅡ-A的羧基端(PRA)蛋白,验证其对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达PRA蛋白。Western blot和间接免疫荧光鉴定PRA蛋白的表达及其与Marc-145细胞的结合。通过病毒中和试验、荧光聚焦中和试验和荧光定量PCR检测PRA蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的作用。Western blot和间接免疫荧光结果表明,PRA蛋白在真核细胞中得到成功表达,其最高表达量为接种1个MOI杆状病毒后96h时。PRA蛋白特异性结合Marc-145细胞,使PRRSV感染Marc-145细胞延迟24h并且感染效率降低60%。真核表达的NMHCⅡ-A羧基端蛋白能特异性结合Marc-145细胞并有效降低PRRSV的感染。这些结果为进一步阐明NMHCⅡ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用提供了新的依据。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2012年09期）
吕军华[6]（2012）在《非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A蛋白羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)感染导致的一种急性传染病。该病能引起怀孕母猪流产、早产、死胎、木乃伊胎,仔猪与育肥猪则表现为明显的呼吸道症状,仔猪断奶前死亡率增高。目前PRRS已经遍及全球主要养猪的国家和地区,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV通过与细胞膜表面的特异性受体结合,利用细胞内吞作用感染易感细胞。现已报道的存在于Marc-145细胞上的PRRSV的受体有CD163和波形蛋白。CD163属于富含半胱氨酸超家族的清道夫受体蛋白,起协助PRRSV脱衣壳和将病毒基因组RNA释放到胞浆的作用。波形蛋白与其它中间细丝蛋白组成的多聚体可能参与PRRSV在细胞内的复制和转移。2008年,Zhou等用针对PRRSV GP5蛋白抗体的抗独特型抗体(Mab2-5G2)通过免疫共沉淀的方法从PAM和MA-104胞中提取出一个分子量约230KD的可溶性蛋白,该蛋白为非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A (Nonmuscle myosin heavy chain Ⅱ-A, NMHCⅡ-A)。非肌肉肌球蛋白Ⅱ型(NMⅡ)广泛存在于生物细胞中,在整个细胞周期,包括细胞迁移、胞质分裂、细胞吸附和细胞形态变化等过程中发挥重要作用。最新的研究.结果证明NMHC Ⅱ-A作为Ⅰ型单纯疱疹病毒进入易感细胞的功能性受体。本实验室前期研究证实NMHC Ⅱ-A蛋白的羧基端对PRRSV感染Marc-145细胞有阻断作用。为进一步验证NMHC Ⅱ-A在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用,本研究以NMHCⅡ-A蛋白羧基端为研究对象,探究其与单克隆抗独特型抗体Mab2-5G2的结合位点及其在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用,进行了以下实验：第一：NMHC Ⅱ-A与Mab2-5G2结合位点的鉴定及各蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞抑制作用的验证。首先对NMHC Ⅱ-A羧基端大小为310个氨基酸的蛋白(命名为PRA)进行分段表达和部分氨基酸的缺失表达,经I-ELISA和Western blot鉴定NMHCⅡ-A与Mab2-5G2的结合域为aa1677-1713。通过PRA蛋白的进一步分段表达和氨基酸的定点突变确定aa1678, aa1682和aa1700为NMHC Ⅱ-A与Mab2-5G2的结合位点。在活细胞工作站实时观察各蛋白对细胞周期无影响的前提下,通过病毒中和实验(Virus Neutralization Test, VNT)和荧光聚焦中和实验(Fluorescence Focus Neutralization, FFN)验证了各蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用,荧光定量PCR检测细胞内NMHC Ⅱ-A和CD163mRNA转录水平和Western blot检测细胞内NMHC Ⅱ-A和CD163蛋白表达水平。结果显示PRA蛋白及包含结合位点的蛋白有明显的抑制作用,而包含一个或不包含结合位点的蛋白抑制作用明显降低,并且蛋白对细胞内NMHC Ⅱ-A和CD163mRNA转录水平和蛋白表达水平无影响。证明NMHC Ⅱ-A与Mab2-5G2的结合位点在PRRSV感染Marc-145细胞中发挥作用。第二：PRA蛋白的真核表达及对PRRSV感染的抑制作用。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达并纯化得到天然构象的PRA蛋白。PRA蛋白与Marc-145细胞特异性结合,将PRRSV的感染延迟24h并且感染96h时其CPE明显弱于对照细胞。在PRRSV感染24h时,PRA蛋白能使其感染效率降低60%。但真核表达的PRA蛋白不能完全抑制PRRSV的感染,推测其他相关因素,如与PRRSV细胞受体的相互作用相关。第叁：鉴定PRA蛋白与Marc-145细胞内其它受体的相互作用。免疫共沉淀验证PRA蛋白与Marc-145细胞内NMHC Ⅱ-A和CD163相互作用,并且PRA的四段互不重迭的分段蛋白都可与NMHC Ⅱ-A和CD163相互作用。结果充分证明NMHC Ⅱ-A与CD163特异性结合。实验结果证明NMHC Ⅱ-A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的重要作用,这为进一步研究PRRSV感染细胞的分子机制提供了一定的依据,也为进一步探求PRRS的防控提供了新的思路。(本文来源于《山东农业大学》期刊2012-06-15）
吴海珍[7]（2012）在《非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A、B单克隆抗体的制备与鉴定》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）引起的猪的重要传染病之一，临床上主要表现为妊娠母猪早产、流产、死胎、木乃伊胎及弱仔等繁殖障碍及各年龄段猪的呼吸道症状和高死亡率。目前，PRRS已遍及全球主要养猪国家和地区，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。PRRSV进入细胞的过程是依赖受体实现的，目前已鉴定的PRRSV的细胞受体有4个：硫酸乙酞肝素HS、唾液酸粘附素Sn、CD163及波形蛋白Vimentin。HS主要是吸附PRRSV到易感细胞上，Sn介导PRRSV的内吞，CD163协助Sn内吞并介导PRRSV复制的脱衣壳、释放过程，Vimentin与其它中间丝蛋白组成多聚体参与PRRSV在细胞内的复制和迁移。非肌肉肌球蛋白II型（Nonmuscle myosin II, NM-II）广泛存在于肌细胞和非肌细胞中，在细胞迁移、细胞吸附、胞质分裂及胞内物质运输等发挥着重要的作用。非肌肉肌球蛋白II型重链（Nonmuscle myosin heavy chain II, NMHC-II）可分3种亚型：NMHCII-A、NMHC II-B和NMHC II-C，叁者氨基酸同源性达60%-80%的，但其氨基端和羧基端氨基酸序列存在明显差异，可据此制备特异性抗体识别不同亚型。本实验室利用PRRSV GP5蛋白的单克隆抗独特型抗体（MAb2-5G2）在Marc-145细胞中检测到NMHCII-A并进行探究，研究结果证明NMHC II-A羧基端蛋白可以降低PRRSV对Marc-145细胞的感染力，而NMHC II-B羧基端蛋白能够显着增强PRRSV感染细胞。这些研究结果表明：NMHC II-A、NMHC II-B在PRRSV感染Marc-145细胞过程中发挥作用。本研究通过蛋白纯化、免疫BALB/c小鼠、细胞融合与亚克隆技术，成功获得了针对NMHC II-A及NMHC II-B羧基端蛋白的单克隆抗体，均属于IgG亚类。这些单克隆抗体对相应抗原表现出高度特异性，相互之间不存在交叉反应。I-ELISA和western blot结果确定NMHC II-A的单克隆抗体结合域在NMHC II-A1812-1894AA处，NMHC II-B的单克隆抗体抗原结合域在NMHC II-B1759-1903AA处；迭加ELISA实验显示各单克隆抗体的抗原结合表位相同或相近。通过制备小鼠腹水和抗体纯化技术，获得纯化单克隆抗体进行细胞实验。间接免疫荧光实验表明单克隆抗体可以结合Marc-145细胞上的活性抗原，不同剂量的单克隆抗体与Marc-145细胞的结合力度与其浓度成正比：剂量越大，荧光信号越强。免疫沉淀实验进一步证实了单克隆抗体的生物活性。NMHC II-A及NMHCII-B羧基端蛋白单克隆抗体的制备为探究NMHC II-A、NMHC II-B与PRRSV之间的具体关系奠定了基础。(本文来源于《山东农业大学》期刊2012-06-15）
高继明[8]（2012）在《非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用研究》一文中研究指出猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）又名“蓝耳病”。是由PRRS病毒（PRRSV）感染所致的一种接触性传染病。该病以繁殖障碍、呼吸道疾病、哺乳仔猪的高死亡率、免疫抑制和持续性感染等为主要特征。其病原具有典型的嗜单核细胞/巨噬细胞特性，在体内，PRRSV主要感染猪肺泡巨噬细胞（Porcinealveolar macrophages, PAM），在体外，主要的易感细胞是非洲绿猴肾细胞MA-104及其衍生细胞Marc-145。PRRSV感染宿主细胞首先通过与细胞膜表面上的特异受体结合，利用细胞的内吞作用而感染易感细胞。至今，已经报道的与病毒感染相关的细胞蛋白由5个，分别为：唾液酸粘附素（Sialoadhesin, Sn）、似肝磷脂蛋白（Heparan sulphate， HS）、波形蛋白（Vimentin）、清道夫受体（CD163）和CD151蛋白。研究显示HS主要跟PRRSV与细胞的吸附相关，Sn则主要介导病毒的内吞，CD163则发挥协助Sn内吞，病毒脱衣壳和将基因组RNA释放到细胞质中的作用，CD151能够与PRRSV RNA3’UTR相互作用，转染CD151表达载体至PRRSV非易感细胞能使非易感细胞感染PRRSV，而且抗CD151蛋白的血清能够完全阻断病毒感染。细胞蛋白NMHC-ⅡA与PRRSV之间的关系是基于本实验室用模拟PRRSV GP5抗原表位的单克隆抗独特型抗体(Mab2-5G2)，通过免疫共沉淀从PAM和Marc-145中获得的一个分子量约为230kD的蛋白质，后经质谱分析和测序确定为非肌肉肌球蛋白重链ⅡA（Non-myscle myosin heavy chain ⅡA，NMHC-ⅡA）。在动物体内，非肌肉肌球蛋白Ⅱ（NMⅡ）重链有叁种亚型，分别为：NMHC-ⅡA、NMHC-ⅡB、NMHC-ⅡC。此蛋白广泛分布在整个生物体内，主要与细胞的吸附，迁移和胞质分裂相关。目前关于NMHC-ⅡA功能的研究主要集中于针对其对细胞的生理功能研究，而与病毒感染之间研究鲜有可见，作为病毒受体已经有报道称NMHC-ⅡA是HSV-1的一个功能性受体，另外PRRSV的重要受体蛋白CD163已经被证明在淋巴细胞中可溶性的CD163可以与NMHC-ⅡA结合，但关于CD163在Marc-145细胞中是否与NMHC-ⅡA有相互关系，是NMHC-ⅡA和CD163共同在病毒感染过程中发挥作用还是NMHC-ⅡA能够另外独立发挥作用目前还没有报道证实。本研究针对NMHC-ⅡA与PRRSV之间的相互关系进行了以下几方面的分析：1、NMHC-ⅡA蛋白与PRRSV病毒粒子体外相互作用分析为了更加明确的分析NMHC-ⅡA与病毒的相互作用关系，我们通过免疫共沉淀方法提纯Marc-145细胞内的NMHC-ⅡA蛋白和通过原核表达纯化NMHC-ⅡA截短蛋白PRA蛋白，将蛋白标记到Dynabeads (免疫磁珠)上利用蛋白-病毒pull down技术对NMHC-ⅡA蛋白病毒之间的关系进行分析。检测结果显示，NMHC-ⅡA与PRA蛋白均能捕获病毒粒子，而对照组没有出现病毒粒子检测条带。2、抗NMHC-ⅡA蛋白血清对病毒的阻断作用分析作为PRRSV的细胞受体CD163、Vimentin、Sn、CD151等蛋白的抗血清均能够有效阻断病毒感染，为了判断NMHC-ⅡA作为一个潜在受体其血清是否也能够阻断病毒感染，我们利用通过免疫共沉淀提纯的NMHC-ⅡA蛋白免疫小鼠，分离血清进行PRRSV感染阻断实验。实验结果显示血清在1:5稀释时能够有效阻断病毒感染细胞，阻断效率达到80%，随着稀释度的增加阻断效率逐渐降低，稀释度达到1:20时对病毒的阻断作用几乎消失。3、NMHC-ⅡA蛋白低表达细胞系的建立与病毒感染分析为了分析病毒感染过程中NMHC-ⅡA与PRRSV的相互关系，我们利用RNA干扰技术，设计合成4条（miRNA-1、miRNA-2、miRNA-3、miRNA-4,）针对NMHC-ⅡA基因的miRNA对NMHC-ⅡA基因表达进行沉默，分析NMHC-ⅡA表达量降低对PRRSV感染Marc-145的影响，同时设计无关的miRNA序列作为对照。通过荧光定量测定分析发现miRNA-4序列能够有效降低NMHC-ⅡA在细胞内的表达；经过抗生素和单克隆筛选获得miRNA-4载体转染能够稳定传代的细胞株P-4，该细胞株的NMHC-ⅡA表达水平与对照细胞P-NC相比降低了47%。利用该细胞株进行PRRSV感染实验，结果显示4℃条件下病毒吸附细胞的量没有因为NMHC-ⅡA蛋白表达量的降低而产生显着改变。但病毒感染后的增殖，通过TCID50测定发现NMHC-ⅡA低表达细胞的病毒滴度显着下降，病毒在24、48、72、96h的滴度分别是对照细胞的57.9%、77.7%、86.8%和87.4%。结果证明NMHC-ⅡA表达量的降低能够影响病毒的增殖。但是对病毒增殖的影响程度呈逐渐减弱趋势。4、NMHC-ⅡA蛋白与PRRSV在Marc-145细胞上的共定位分析为了更直观的观察NMHC-ⅡA蛋白与PRRSV在病毒感染过程中的相互关系，我们在P-4、P-NC和Marc-145细胞上对病毒吸附和内化等不同时期进行固定，对NMHC-ⅡA蛋白和PRRSV进行了双荧光染色，利用共聚焦显微镜进行共定位分析，判断两者之间在量上的相互关系以及病毒感染与时间的关系。结果显示，病毒对叁种细胞的吸附没有明显差异，但病毒吸附后内化的病毒量P-4细胞要明显低于对照细胞，该差异从内化15min后开始出现。关于病毒在不同细胞上的内化与时间的关系，通过观察发现，P-4细胞与对照细胞相比较病毒内化的时间明显推迟，P-4细胞开始出现内化的时间要比对照细胞晚15min左右。从P-4、P-NC和Marc-145细胞上都可以看到PRRSV的内化过程是伴随着NMHC-ⅡA蛋白的收缩而发生的，PRRSV从膜进入细胞质并向细胞核运动的时间相对较短，并且到达细胞核周围一定距离后在一定时间内位置相对不再变化。5、NMHC-ⅡA蛋白低表达细胞生长曲线，细胞周期测定和有丝分裂观察研究已经证明非肌肉肌球蛋白Ⅱ（NM-Ⅱ）在细胞内的生物学功能主要与细胞的粘附，迁移和胞质分裂相关。为了分析我们筛选的NMHC-ⅡA低表达细胞系是否会因为NMHC-ⅡA降低47%的表达而显着影响细胞的正常生理功能从而对病毒的感染产生影响。我们对该细胞进行了生长曲线测定，细胞周期测定和细胞有丝分裂观察。结果显示降低47%NMHC-ⅡA表达的细胞与对照细胞相比生长曲线没有产生明显差异，细胞周期变化分布基本一致，细胞有丝分裂能够正常进行。(本文来源于《山东农业大学》期刊2012-06-13）
段俗言[9]（2012）在《非肌肉肌球蛋白重链ⅡA C末端B细胞抗原表位多肽的制备及致病性的鉴定》一文中研究指出目的:预测足细胞非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A(nonmuscular myosin heavy chainⅡA,NMMHC-ⅡA)C末端B细胞抗原表位,研究表位合成肽的生物学活性,制备NMMHC-ⅡA抗体,并对其特异性进行鉴定。检测膜性肾病病人血清中非肌肉肌球蛋白重链ⅡA(NMMHC-ⅡA)C末端B细胞抗原表位抗体的表达,明确NMMHC-ⅡA在膜性肾病发病机制中的作用。方法:以NMMHC-ⅡA C末端氨基酸序列为基础,应用公共的生物信息学工具,分析NMMHC-ⅡA的序列特异性、二级结构,以及极性、亲水性、柔韧性、表面可极性等参数,然后借助专业的B细胞表位预测工具预测潜在的B细胞表位,最后对获得的数据进行综合分析,评判NMMHC-ⅡAC末端最有可能的B细胞表位。人工合成该B细胞表位多肽,采用皮下多点注射的方式免疫新西兰雄性大耳白兔,制备出特异性抗体,用免疫印迹(western blotting),免疫共沉淀,质谱分析等方法进行鉴定,并通过免疫荧光方法及兔肾组织病理改变探讨其抗体的生物学作用。收集15例行经皮肾活检穿刺术病理检查明确诊断特发性膜性肾病病人血清,10例继发性膜性肾病病人血清(包括狼疮性肾炎、肿瘤相关性膜性肾病及乙型病毒性肝炎相关肾病等)及10例正常人血清。将表位多肽偶联牛血清白蛋白(BSA)后(分子量约为70KD),通过还原western blotting方法检测其针对NMMHC-ⅡA C末端B细胞抗原表位的抗体表达情况,并用非还原人足细胞蛋白,检测目前证实与成人IMN的发生密切相关的M型磷脂酶A2受体(Phospholipase A2 Receptor,PLA2R)抗体,比较NMMHC-ⅡA及PLA2R的致病性。结果:综合分析多种生物信息学工具表明,NMMHC-ⅡAC末端1850-1863氨基酸区段(QVDDERRNAEQYKD)(Theoretical pI/Mw:4.59/1765.81Da)具有极大地B细胞表位可能。与正常对照组(生理盐水注射组)比较,该表位多肽免疫兔子后能产生针对该多肽的抗体,免疫双向扩散法检测兔血清滴度可达1:16,Western blotting和免疫共沉淀方法获得血清中抗体所能结合的特异性人足细胞蛋白成分,筛选出目标蛋白条带,并通过质谱分析方法明确该蛋白即为NMMHC-ⅡA。兔肾组织免疫荧光可见该抗体沿基底膜分布,同时兔子出现足突融合和系膜区增宽的肾脏损害。15例特发性膜性肾病病人血清中,14例病人可检出NMMHC-ⅡA抗体(93.3%),12例PLA2R抗体阳性(80.0%),其中11例同时有两种抗体(73.3%)。在继发性膜性肾病(狼疮性肾炎,乙肝病毒相关性肾炎,肿瘤相关性肾炎)患者中,有2例狼疮性肾炎患者血清中检出NMMHC-Ⅱ A抗体,其中1例狼疮性肾炎患者血清中同时测出PLA2R抗体;1例胃癌相关性肾炎及1例食管癌继发膜性肾病患者血清中检出PLA2R抗体。结论:应用生物信息学成功预测出的NMMHC-ⅡA C末端B细胞抗原表位,其抗体能在大部分特发性膜性肾病病人血清中检出,提示NMMHC-ⅡA为特发性膜性肾病的主要致病抗原之一,为进一步研究特发性膜性肾病的发病机制奠定基础。目的:分析比较2型糖尿病肾脏病(type 2 diabetic kidney disease,T2DKD)与2型糖尿病(diabetes mellitus,DM)合并非糖尿病肾损害(non diabetic kidney disease,NDKD)的临床及病理特征异同点。方法:回顾性分析2008年1月至2011年4月在我科住院的患者,临床诊断T2DM、并有蛋白尿,行经皮肾活检穿刺术病理检查共105例患者的临床病理资料,比较他们的异同点。结果:(1)NDKD组51例,占48.57%,一般情况如糖尿病病程、高血压病程等、代谢紊乱及肾脏损害均较T2DKD轻。病理类型以原发性肾小球疾病为主,包括局灶节段性肾小球硬化(25例,49.02%)、IgA肾病(16例,31.37%)、系膜增生性肾小球肾炎(8例,15.69%)、IgM肾病(2例,3.92%)。一半以上的患者无间质纤维化(54.90%)(P<0.05)及无小管萎缩、无基膜增厚(50.98%)(P<0.01)。血管病变也较轻,仅8%出现小动脉玻璃样变性,显着低于T2DKD组(50%)(P<0.01)。(2)T2DKD患者54例,占51.43%。根据肾脏病理损害的程度分为轻中重叁组,随着病理程度严重性的增加,临床表现也越严重。结论:在临床上通过一般情况、代谢指标及临床肾损害指标的比较,可初步区分T2DKD与NDKD,并且T2DKD患者随着病理情况轻重不同,临床表现及实验室指标存在显着差异。(本文来源于《南京医科大学》期刊2012-05-01）
许雪强[10]（2012）在《特发性膜性肾病抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体纯化与鉴定及人抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体被动性大鼠膜性肾病模型的制备》一文中研究指出第1部分特发性膜性肾病抗非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A抗体纯化与鉴定目的:纯化特发性膜性肾病患者体内的抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体并进行鉴定。方法:选择临床表现大量蛋白尿(≥3g/24小时),病理确诊为特发性膜性肾病的10位患者位研究对象,在使用激素及其他免疫抑制剂治疗前各抽取10ml EDTA抗凝血,离心后取其血清,选取正常人10名为对照;将患者组和对照组血清各自等比例混合,先用IgG分离试剂盒分离出IgG并用SDS-PAGE电泳证实并测定浓度;再进一步用免疫共沉淀试剂盒,逆向提取患者组和对照组血清中的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体,测定浓度后分别用足细胞蛋白和商品化Myosin9蛋白片段(分子量约110KD)为抗原进行WestemBlot,并予以证实。结果:特发性膜性肾病患者血清中的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体可以通过本研究中的方式进行一定程度上的纯化,且能达到一定浓度,明显高于正常对照的水平,有临床意义。结论:本研究利用免疫共沉淀的原理,主要经过两个步骤从患者体内提纯出一定浓度的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体,且与正常对照组提取浓度有显着差异,根据提纯的结果可以发现患者和正常对照的在该种抗体上存在区别,由此能更好地证实非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体在特发性膜性肾病患者可能存在的重要作用,结合前期的研究似乎可以推论非肌肉肌球蛋白重链ⅡA极有可能为特发性膜性肾病的新发现靶抗原之一。因此,可以考虑用从特发性膜性肾病人体提纯的该抗体进行特发性膜性肾病的免疫机制和疾病转移的研究。第2部分人抗非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ A抗体被动性大鼠膜性肾病模型的制备目的:探讨用从特发性膜性肾病患者体内提取的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体诱导被动性大鼠膜性肾病模型的方法及病理特点。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为9组:正常对照组,注射人抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体后3天组,5天组,7天组,14天组,21天组,28天组,35组,42天组,每组5只。观察各组大鼠24小时尿蛋白定量的变化,肾脏光镜、免疫荧光、透射电镜的病理学改变。结果:与正常对照组(第0天)比较,注射人非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体组的大鼠从第7天开始24小时尿蛋白总量增加,尿蛋白水平呈现逐渐上升的趋势,第14天时尿蛋白为13.44±1.22,差异具有显着性(P<0.05),第21天开始尿蛋白总量有显着增加(P<0.01),到42天时达到最多(35.15±3.58,P<0.01);光镜下,注射人抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体的大鼠肾脏组织在第14天,第21天,第28天的HE,Masson,PASM和PSM染色与正常对照组(第0天)比较未出现明显变化,仅有轻度系膜增生;免疫荧光结果显示:大鼠注射抗体后仅第1、3天肾组织内可检测到人IgG沿肾小球基底膜颗粒样沉积。而自身IgG在第7天后逐渐增强,第21天达到最强,主要沿基底膜颗粒样沉积,荧光强度无衰减趋势。电镜下,注射人非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体后大鼠足细胞逐渐出现部分足突融合,扁平,消失,第28天足突融合较为明显,此后上皮下致密物出现并逐渐增加,到第42天时基底膜局灶性增厚明显,这明显有别于正常对照组。结论:从特发性膜性肾病患者血清提取的非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体可以免疫SD大鼠出现类似于特发性膜性肾病的蛋白尿增加及病理改变特点,因此我们可以认为由非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体诱导的被动性大鼠膜性肾病模型的制备成功。由此可见我们可以利用患者血清在动物身上实现疾病的转移以及进一步应用于特发性膜性肾病的机制研究。(本文来源于《南京医科大学》期刊2012-05-01）
非肌肉型肌球蛋白重链论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的非肌肉肌球蛋白重链-9(MYH9)对肿瘤的发生发展具有重要的调控作用,文中旨在探讨MYH9在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞上皮间质转换(EMT)和侵袭能力的影响。方法收集52例骨肉瘤癌组织及距肿瘤边缘5cm处的癌旁组织,RT-PCR和免疫组化检测骨肉瘤癌组织和癌旁组织中MYH9的mRNA和蛋白表达水平。脂质体法转染U2-OS细胞MYH9 shRNA表达质粒,沉默MYH9表达,转染后将细胞分成3组:以正常的U2-OS细胞为对照组、以转染空质粒的U2-OS细胞为空载组和以转染MYH9 shRNA的U2-OS细胞为干扰组。采用RT-PCR检测转染后U2-OS细胞MYH9的mRNA水平,Western blot检测U2-OS细胞转染后MYH9以及EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的蛋白水平变化,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化。结果 RT-PCR检测结果表明,癌旁组织中MYH9 mRNA的相对表达量(1.526±0.148)较癌组织(3.547±0.195)明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果表明,MYH9蛋白在肿瘤组织中主要表达于细胞质中,且MYH9蛋白在癌组织中表达显着高于癌旁组织,其阳性表达率分别为59.6%(31/52)和26.9%(14/52),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果表明,沉默MYH9基因表达后,干扰组MYH9 mRMA相对表达量和蛋白水平较对照组和空载组明显降低(P<0.05)。与对照组相比较,干扰组骨肉瘤细胞U2-OS中E-cadherin蛋白明显上调,Vimentin蛋白出现下调。Transwell实验表明,48 h后各组均有穿出微孔滤膜的细胞,干扰组穿出微孔滤膜的细胞[(41.2±15.1)个]较对照组[(117.3±12.4)个]和空载组[(193.5±14.7)个]明显减少(P<0.05)。结论 MYH9蛋白在骨肉瘤组织中表达显着高于癌旁组织,沉默MYH9可以通过降低骨肉瘤细胞上皮间质转换来降低骨肉瘤的侵袭能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
非肌肉型肌球蛋白重链论文参考文献
[1].于琳琳,周德方,张利,周恩民,郑乾坤.猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A表达的影响[J].中国预防兽医学报.2018
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[3].吴明,肖永强,刘名倬,李郁葱,李明利.慢病毒载体介导的shRNA沉默非肌肉肌球蛋白重链ⅡA对骨髓间充质干细胞旁分泌的影响[J].广东医学.2016
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[9].段俗言.非肌肉肌球蛋白重链ⅡAC末端B细胞抗原表位多肽的制备及致病性的鉴定[D].南京医科大学.2012
[10].许雪强.特发性膜性肾病抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体纯化与鉴定及人抗非肌肉肌球蛋白重链ⅡA抗体被动性大鼠膜性肾病模型的制备[D].南京医科大学.2012
标签：猪繁殖与呼吸综合征病毒; NMHCⅡ-A; 致病性; 组织定位;