直接竞争ELISA法检测动物源食品中利巴韦林残留

论文摘要

本研究针对动物源食品中利巴韦林残留的问题,建立了直接竞争酶联免疫分析方法,快速高效地检测利巴韦林残留。采用活泼酯法将利巴韦林（RBV）与钥孔血蓝蛋白（KLH）偶联制备利巴韦林完全抗原（KLH-RBV）,通过免疫新西兰大耳白兔得到多抗血清,经Protein A-Sepharose 4B凝胶柱纯化后得到纯化抗体,在此基础上建立直接竞争ELISA检测方法。该方法的IC50为10.84 ng/mL,最低检测限达0.002 ng/mL,对鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝等实际样品进行检测,加标回收率为80.23%～90.07%。采用高效液相色谱法进行验证,两种方法测定结果呈现良好的线性关系（R2≥0.99）。本文建立的方法灵敏度高,简便快速,适合现场大批量快速检测动物源食品中利巴韦林残留。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.2 实验方法

1.2.1 RBV完全抗原的合成

1.2.2 KLH-RBV完全抗原的鉴定

1.2.3 免疫血清的制备

1.2.4 抗体的纯化

1.2.5 酶标抗原的合成

1.2.6 直接竞争ELISA法操作步骤

1.2.7 直接竞争ELISA反应体系条件的优化

1.2.7.1 RBV抗体与酶标抗原工作浓度的确定

1.2.7.2 封闭液浓度的优化

1.2.7.3 离子强度的优化

1.2.7.4 最优pH的确定

1.2.7.5 标准曲线的绘制

1.2.8 样品检测

1.2.8.1 样品前处理

1.2.8.2 样品加标回收率的测定

1.2.9 高效液相色谱法验证

1.2.9.1 样品的前处理

1.2.9.2 添加回收率的测定

1.3 数据处理

2 结果与分析

2.1 RBV完全抗原的鉴定

2.2 抗体纯化及效果鉴定

2.2.1 抗体纯化

2.2.2 紫外分光光度法鉴定抗体纯化效果

2.3 直接ELISA反应体系条件的优化

2.3.1 RBV抗体与酶标抗原最佳工作浓度的确定

2.3.2 封闭液浓度的优化

2.3.3 离子强度的优化

2.3.4 最佳pH的确定

2.4 直接竞争ELISA检测方法的建立

2.5 样品加标回收率

2.6 高效液相色谱法验证

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘卫华,沙芳芳,李润磊,王鑫伟,王向红

关键词: 利巴韦林,直接竞争,快速检测,动物源食品

来源: 食品工业科技 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 河北农业大学食品科技学院,河北省农产品加工工程技术研究中心

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0401101)

分类号: TS207.3

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.09.042

页码: 242-247+252

总页数: 7

文件大小: 829K

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