论文摘要
目的:初步探讨人工合成多肽MAC-1（以下简称MAC-1）体外和体内抗乙型肝炎病毒作用及机制。方法:1、以转染人HBV全基因组的人肝癌细胞（HepG2.2.15）为体外细胞模型。（1）MAC-1对HepG2.2.15细胞的活性作用,不同浓度MAC-1（10,100,1000,2000,10000μg/ml）作用细胞48h,采用MTT方法检测细胞活性;（2）MAC-1抗HBV活性作用,根据不同组别:连续用药对照组（Control L）,间断用药对照组（Control J）,低、中、高（10,50,100μg/ml）三个MAC-1浓度组,恩替卡韦连续用药组（3.75nmol/L ETV L）,恩替卡韦间断用药组（3.75nmol/L ETV J）分别作用HepG2.2.15细胞3d、6d、9d,采用实时荧光定量核酸扩增技术（Real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR）和酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA）检测上清液HBV DNA、HBeAg和HBsAg水平。（3）MAC-1抗HBV的作用机制,根据不同剂量10,50,100μg/ml MAC-1分别作用24h,用逆转录实时荧光定量PCR（reverse transcriptionreal time quantitative PCR,RT-qPCR）检测细胞内3.5kb RNA、HNF1α、HNF4α的基因相对表达水平;采用Western Blot检测细胞内pERK,tERK,HNF1α,HNF4α的蛋白相对表达水平。2、以感染的雏鸭构建鸭乙型肝炎病毒（DHBV）动物模型。（1）感染雏鸭随机分为高浓度MAC-1组（40mg/ml/kg）,低浓度MAC-1组（20mg/ml/kg）,病毒对照组（生理盐水）,恩替卡韦对照组（0.1mg/kg）;未感染雏鸭随机分成2组:MAC-1对照组（40mg/ml/kg）,阴性对照组（生理盐水）各组采用腹腔注射的方法处理10天,分别在雏鸭用药前（D0）,用药第五天（D5）,用药第十天（D10）,停药第三天（P3）四个时间点颈静脉采血并称量体重,采用ELISA方法检测各时间点血清中DHBsAg、DHBeAg的水平,采用qPCR方法检测血清中DHBV DNA病毒的含量,采用组织病理切片法观察雏鸭肝脏组织的病理变化。结果:1、MAC-1体外对乙型肝炎病毒的影响及其作用机制研究。（1）MAC-1对HepG2.2.15细胞存活率影响:MAC-1小于1000μg/ml浓度下,对细胞没有明显毒性作用（P>0.05）;（2）MAC-1对HepG2.2.15细胞上清液中HBV的影响:三个浓度MAC-1与Control J比较,均作用使细胞上清液HBsAg、HBeAg、HBV DNA的表达减少（P<0.05）;（3）MAC-1对HBV作用的机制,各剂量MAC-1组与Control J组比较,3.5kb RNA及肝细胞内HNF1α、HNF4αmRNA表达均没有显著差异（P>0.05）,t-ERK和p-ERK信号蛋白和HNF1α蛋白没有统计学差异（P>0.05）,HNF4α蛋白表达出现显著下调,随着MAC-1浓度增加下调越明显（P<0.05）。2、以感染DHBV雏鸭为动物模型。（1）MAC-1对雏鸭血清DHBV复制:低和高浓度MAC-1组分别在T0、T5、T10和P3天,干预前后其DHBV DNA浓度无显著差异（P>0.05）,与病毒组比较DHBV DNA、HBsAg、HBeAg水平无明显差异（P>0.05）;（2）MAC-1对雏鸭体重与肝脾指数的影响:随着时间的延长,雏鸭体重逐渐增加,各组之间比较无统计学差异（P>0.05）,雏鸭肝脏指数和脾脏指数各组间比较均无差异（P>0.05）;（3）MAC-1对雏鸭肝脏组织病理的影响:病毒组炎细胞浸润病变较重,部分淤血等病理改变,MAC-1组炎细胞浸润与病毒组比较有减轻病理变化。结论:1、MAC-1可抑制HepG2.2.15细胞系上清液HBV DNA、HBsAg、HBeAg的水平;2、MAC-1抑制HBV复制可能通过下调HNF4α表达,但可能不是通过激活ERK1/2信号通路;3、MAC-1对雏鸭体内DHBV DNA和DHBsAg、DHBeAg表达无明显抑制作用;4、MAC-1一定浓度范围内可能具有改善HBV引起肝脏炎性病变的作用。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 王芳胜
导师: 陈峥宏,魏洪
关键词: 细胞,雏鸭模型,乙型肝炎病毒
来源: 贵州医科大学
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学,基础医学
单位: 贵州医科大学
分类号: R373
总页数: 65
文件大小: 2386K
下载量: 74
相关论文文献
- [1].浅谈生物多肽的临床作用[J]. 人人健康 2017(17)
- [2].人工合成多肽在生物材料上的修饰进展[J]. 中国医疗器械信息 2008(09)
- [3].狂犬病病毒G蛋白V区特异性单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 中国兽医科学 2017(05)
- [4].人工合成多肽FGL对神经细胞模型PC12细胞增殖与凋亡的影响(英文)[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2011(15)
- [5].多肽药物有望同时治疗罕见贫血和红细胞增多症[J]. 中国处方药 2016(06)
- [6].Trim22 B细胞表位预测及多克隆抗体制备与鉴定[J]. 中国免疫学杂志 2011(10)
- [7].自身免疫性心肌炎心肌基质金属蛋白酶的其抑制因子表达改变的意义[J]. 心肺血管病杂志 2011(01)
- [8].转化生长因子β_1活性抑制肽对糖尿病大鼠肾保护的作用[J]. 广东医学 2011(12)
- [9].HPV L1C-末端保守序列多肽免疫学特性的探讨[J]. 重庆医学 2014(01)
- [10].羊朊毒体单抗结合表位分析[J]. 生物工程学报 2009(03)
- [11].应用合成多肽技术制备肺癌转移相关蛋白1多克隆抗体的研究[J]. 临床肺科杂志 2016(05)
- [12].用人工合成多肽作为半抗原制备Bt Cry1Ac的单克隆抗体[J]. 中国农业科技导报 2012(02)
- [13].人工合成多肽P12体外杀菌作用的研究[J]. 广西医学 2011(04)
- [14].KCTD9多肽抗体的制备和应用[J]. 中国免疫学杂志 2009(03)
- [15].Epithalon对人胎肝细胞端粒酶活性和端粒长度的影响[J]. 重庆大学学报 2008(05)
- [16].HBx-d431突变体多肽抗体的制备及鉴定[J]. 分子诊断与治疗杂志 2014(04)
- [17].抗肿瘤多肽研究进展[J]. 中国生物工程杂志 2013(06)