耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析

耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析

论文摘要

碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因apr E539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30%~70%)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小。结果表明,AprE539的分子量大小为30 kDa。进一步对其酶学性质研究表明:AprE539的最适作用pH为11.0,最适作用温度为65~70℃;在pH6.0~12.0范围内具有较好的稳定性;在60℃保温1 h后酶活剩余70%; Cu2+、Mn2+、Ca2+和Mg2+对酶活有明显促进作用。AprE539在氨基酸序列上仅有2个氨基酸残基与碱性蛋白酶2709存在差异,但其酶学特征差异明显,为后续进一步探究其酶学性质差异性奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与仪器
  •   1.2 Apr E539蛋白酶编码基因的分子克隆与异源表达
  •     1.2.1 蛋白酶编码基因的克隆及重组质粒的构建
  •     1.2.2 重组菌的构建与酶液制备
  •   1.3 重组碱性蛋白酶的分离纯化与SDS-PAGE分析
  •   1.4 酶学性质的分析
  •     1.4.1 最适作用pH和pH稳定性
  •     1.4.2 最适作用温度和热稳定性
  •     1.4.3 金属离子和化学试剂对酶活的影响
  •   1.5 碱性蛋白酶酶活力的测定
  •   1.6 生物信息学分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539碱性蛋白酶编码基因的克隆及重组菌的构建
  •   2.2 重组碱性蛋白酶的制备与纯化
  •   2.3 重组碱性蛋白酶Apr E539的酶学性质分析
  •     2.3.1 最适作用pH
  •     2.3.2 p H稳定性
  •     2.3.3 最适作用温度
  •     2.3.4 热稳定性
  •     2.3.5 金属离子对酶活的影响
  •     2.3.6 碱性蛋白酶序列分析
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 谢爱连,林碧瑜,牛丹丹,NOKUTHULA Peace Mchunu,叶秀云

    关键词: 地衣芽胞杆菌,耐热嗜碱性蛋白酶,克隆与表达,酶学性质

    来源: 食品工业科技 2019年20期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 福州大学生物科学与工程学院福建省海洋酶工程重点实验室,Department of Biotechnology and Food Technology,Faculty of Applied Sciences,Durban University of Technology

    基金: 国家自然科学基金(31601407),海洋生物酶工程创新服务平台(2014FJPT02)

    分类号: Q78;Q55

    DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.20.017

    页码: 101-106

    总页数: 6

    文件大小: 2207K

    下载量: 267

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