导读:本文包含了失巢凋亡论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:凋亡,受体,酪氨酸,骨肉瘤,干扰,活性氧,信号。
失巢凋亡论文文献综述
汤晓琳,杨丹,吕鑫,沈薇[1]（2019）在《SFRP1基因沉默抑制人胃黏膜上皮GES-1细胞失巢凋亡》一文中研究指出目的观察RNA干扰沉默分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)1基因对人胃黏膜上皮细胞(GES)-1失巢凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法应用SFRP1基因小干扰RNA(siRNA)转染处理GES-1后,分别采用Realtime RT-PCR和Western印迹检测SFRP1 mRNA和蛋白表达。细胞悬浮培养应用Poly-HEMA方法。采用流式细胞术和Calcein AM/EthD-1荧光双染法检测细胞失巢凋亡,软琼脂集落实验检测细胞非锚定生长状态,免疫荧光和Western印迹实验检测SFRP1沉默后Wnt通路中β-catenin的定位及表达,Realtime RT-PCR检测β-catenin靶基因c-Myc和CyclinD1 mRNA表达。结果与对照组比较,siRNA-891组中SFRP1 mRNA和蛋白表达明显被抑制。siRNA-891组细胞失巢凋亡率明显下降(P<0.05),EthD-1荧光染色的失巢凋亡细胞数目明显减少(P<0.05),软琼脂集落形成数目明显增多(P<0.05)。siRNA-891组中β-catenin蛋白表达水平明显增加,其靶基因c-Myc mRNA和CyclinD1 mRNA表达明显增高(P<0.01)。结论 SFRP1siRNA可抑制GES-1细胞失巢凋亡,使其失巢凋亡敏感性下降,激活Wnt分子通路可能是其机制之一。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2019年16期）
闫霞,胡兵[2]（2019）在《龙葵碱对大肠癌RKO细胞失巢凋亡作用及机制》一文中研究指出目的:研究龙葵碱对人大肠癌RKO细胞悬浮生长和失巢凋亡作用及机制。方法:采用聚羟乙基异丁烯酸(Poly-HEMA)包被,模拟"失巢"生长环境,龙葵碱作用于RKO细胞。CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞生长,EthD-1染色检测失巢凋亡,比色法检测Caspase-3活性,Z-VAD-FMK阻断Caspase-3,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光染色检测活性氧(ROS)生成,活性氧抑制剂NAC阻断ROS生成,Western blot法检测FAK表达和磷酸化。结果:龙葵碱可显着抑制RKO悬浮生长,呈剂量依赖性。龙葵碱作用后悬浮生长RKO细胞吸收EthD-1散发红色荧光,部分细胞可见核碎裂,呈现凋亡形态改变。龙葵碱可显着增强Caspases3活性,Caspases抑制剂Z-VAD-FMK可拮抗龙葵碱对细胞失巢凋亡的作用。龙葵碱可以升高细胞内ROS水平,活性氧抑制剂NAC可以拮抗龙葵碱对Caspases-3活性。龙葵碱还可抑制FAK磷酸化。结论:龙葵碱可以抑制RKO细胞悬浮生长,诱导失巢凋亡,其机制与活化Caspase-3、升高细胞内ROS水平和抑制FAK磷酸化相关。(本文来源于《第十七届全国中西医结合肿瘤学术大会摘要集》期刊2019-07-05）
闫洪亮,李杨,靳翠平,宫晓锦,李鹏飞[3]（2019）在《miR-204靶向BDNF调控上皮性卵巢癌细胞抗失巢凋亡的实验研究》一文中研究指出目的:探讨miR-204靶向BDNF对OV2008卵巢癌细胞抗失巢凋亡的影响及其可能机制。方法:选用OV2008细胞株,分为贴壁培养组和失巢凋亡组;qRT-PCR法检测miR-204表达水平;选择失巢凋亡组存活细胞,分为空白对照组、转染试剂组、miR-204 NC组、miR-204质粒组进行转染,qRT-PCR检测miR-204表达。应用四组细胞分别建立失巢凋亡模型,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测BDNF mRNA表达水平,Western blot法检测p-Akt和总Akt蛋白表达水平。结果:失巢凋亡组较贴壁培养组的miR-204含量降低(P<0.05)。与空白对照组、转染试剂组、miR-204 NC组比较,miR-204质粒组的miR-204表达水平高(P<0.05),细胞凋亡率增加(P<0.05),侵袭能力减弱(P<0.05),BDNF mRNA表达水平降低(P<0.05),p-Akt/总Akt值降低(P<0.05);前3组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-204在抗失巢凋亡表型的OV2008细胞株中低表达,过表达miR-204能抑制OV2008细胞的抗失巢凋亡能力,其机制可能与下调BDNF基因表达进而抑制Akt磷酸化有关。(本文来源于《现代妇产科进展》期刊2019年09期）
祁麟,齐春胜,肖波[4]（2019）在《靶向沉默TrkB基因对结肠癌细胞SW620失巢凋亡水平的影响》一文中研究指出目的在结肠癌细胞SW620中靶向沉默神经营养因子酪氨酸激酶受体B(TrkB)基因以探讨其对肿瘤细胞的失巢凋亡水平的影响。方法构建TrkB慢病毒干扰载体,使用TrkB-shRNA慢病毒感染SW620细胞,利用实时定量PCR和Western blot法分别检测TrkB基因在mRNA和蛋白水平表达量的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测下调TrkB基因表达后贴壁和悬浮生长状态下细胞失巢凋亡率的变化。结果成功构建TrkB-shRNA慢病毒干扰载体,获得SW620-i TrkB稳定感染细胞系。与SW620-iLuc对照组相比,转染SW620-iTrkB细胞中TrkB基因的mRNA和蛋白相对表达水平均降低(P<0.05)。不同生长状态和不同转染质粒转染均对SW620-iTrkB细胞的失巢凋亡水平有影响,存在交互效应(P<0.05)。与贴壁状态相比,悬浮状态下SW620-iLuc组和SW620-iTrkB组细胞凋亡率均明显上升(P<0.05);在悬浮状态下,SW620-i TrkB组细胞凋亡率明显高于SW620-iLuc组(P<0.05)。结论慢病毒载体介导的TrkB-shRNA能在结肠癌细胞SW620中产生特异性的基因沉默效应,显着增加细胞的失巢凋亡水平。(本文来源于《天津医药》期刊2019年06期）
翟永清[5]（2019）在《MicroRNA-451介导骨肉瘤细胞抗失巢凋亡的作用和机制研究》一文中研究指出研究背景骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤,好发于青少年,有高度的侵袭和转移特性,预后较差。自二十世纪七十年代起,由于新辅助化疗的应用,骨肉瘤的五年生存率逐渐提高到65%以上,但是自九十年代以来,骨肉瘤的治疗效果进入平台期,生存率一直没有明显的提高。骨肉瘤转移是引起患者最终死亡的主要原因,深入理解转移的机制,对于改善治疗效果有重要意义。失巢凋亡是由细胞脱离细胞外基质引起的程序性细胞死亡。在生理情况下,失巢凋亡可以阻止脱落的细胞重新粘附到不正确的位置上,对机体起着重要的防御作用。肿瘤细胞初始以原发灶的形式存在,待其脱离细胞外基质后,极少数获得抗失巢凋亡能力,可以在悬浮条件下存活,进而通过血液、淋巴等途径转移到其他器官增殖和分化。目前普遍认为,在肿瘤的发生发展过程中,抗失巢凋亡是转移和侵袭的重要基础。肿瘤细胞通过上皮-间质转化、激活抗凋亡的信号通路、调整细胞能量代谢等方式获得抗失巢凋亡的能力,而microRNA参与其中,起着重要作用。MicroRNA是一类非编码的小RNA分子,miRNA基因经过RNA聚合酶II、DROSHA、DICER等酶的转录加工,最终形成成熟的miRNA。成熟的miRNA通常和靶mRNA的3'非翻译区结合,在转录后水平调节基因表达。目前普遍认为,miRNA不但与细胞的凋亡调控、增殖分化和胚胎发育等生理过程密切相关,还可以作为致癌或抑癌基因,在肿瘤发生发展过程中起关键作用。MiR-451基因位于第17号染色体上,在很多恶性肿瘤中表达失调,通过不同的机制影响肿瘤的进展。但是,miR-451对骨肉瘤细胞抗失巢凋亡的作用和可能的机制,目前尚未阐明。第一章miR-451介导骨肉瘤细胞抗失巢凋亡目的:探讨miR-451在骨肉瘤细胞抗失巢凋亡中的作用,为临床诊疗寻找新的靶点。方法:选用骨肉瘤U20S和Saos-2细胞株,贴壁培养模拟骨肉瘤原发灶细胞的生长状态,为贴壁培养组;建立失巢凋亡模型,模拟骨肉瘤转移灶细胞的生长状态,为失巢凋亡模型组。荧光定量PCR检测贴壁培养组和失巢凋亡模型组中miR-451的表达水平。构建pre-miR-451质粒,转染U20S细胞。将U20S细胞分组为:空白对照组、转染试剂组、miR-451 NC组和miR-451质粒转染组。荧光定量PCR检测各组细胞的miR-45 1表达水平;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;transwell体外侵袭实验测定各组细胞的侵袭能力;划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力。结果:1.贴壁培养组中U20S和Saos-2细胞均为贴壁生长,可见伪足。失巢凋亡模型组中细胞呈悬浮生长状态,细胞紧密团簇状,无细胞贴壁现象。模型构建成功。2.在骨肉瘤U20S和Saos-2细胞系中,失巢凋亡模型组miR-451表达量均低于贴壁培养组,差异均有统计学意义(p<0.05)。3.成功构建质粒。荧光定量PCR结果显示,与空白对照组、转染试剂组、miR-451 NC组相比,miR-451质粒转染组细胞的miR-451表达水平明显升高(p<0.05);空白对照组、转染试剂组、miR-451 NC组之间的miR-451表达水平差异无统计学意义(p>0.05)。4.在空白对照组、转染试剂组、miR-451 NC组和miR-451质粒转染组U20S细胞中建立失巢凋亡模型,流式细胞学检测显示,与空白对照组、转染试剂组、miR-451 NC组相比,miR-451质粒转染组细胞凋亡率显着增高(p<0.05)。Transwell体外侵袭实验结果显示,与空白对照组、转染试剂组、miR-451 NC组相比,miR-451质粒转染组中透膜细胞数显着减少(p<0.05)。细胞划痕实验结果显示,与空白对照组、转染试剂组、miR-451 NC组相比,miR-451质粒转染组细胞在24小时和48小时的迁移距离显着减少(p<0.05)。结论:1.在骨肉瘤U20S和Saos-2细胞系中,失巢凋亡模型组miR-451的表达水平均下降。2.上调miR-451的表达水平后,U20S细胞失巢凋亡率升高,细胞侵袭能力减弱,细胞迁移能力减弱。第二章miR-451对骨肉瘤细胞Rab14及下游PI3K/Akt的调节作用目的:探讨miR-451介导骨肉瘤细胞抗失巢凋亡的机制,为早期诊断寻找潜在的肿瘤标志物,为临床治疗提供新的靶点。方法:生物信息学方法预测miR-451可能的靶基因;双荧光素酶报告基因验证miR-451和靶基因的相互作用;实时定量PCR及western blot检测靶基因mRNA及蛋白的表达情况;western blot检测PI3K/Akt信号通路蛋白的表达水平。结果:1.检索数据库发现Rab14可能是miR-451的靶基因之一。双荧光素酶报告系统结果显示,在U20S和Saos-2细胞中,miR-451 mimics能使野生型的Rab143'UTR的荧光素酶活性明显降低,而突变型的荧光素酶活性没有降低,说明miR-451可以结合Rab14的3'UTR。2.Real-time PCR检测转染miR-451 mimics后Rab14 mRNA水平的改变,结果显示,在U20S和Saos-2细胞系,Rab14 mRNA的表达水平均明显降低(P<0.01);Western Blot检测miR-451表达上调对靶基因蛋白的影响,结果显示,在U20S和Saos-2细胞系,miR-451可明显降低Rab14的蛋白表达水平。3.Western Blot检测p-PI3K、p-ERK和p-AKT蛋白表达水平,结果显示,在U20S和Saos-2细胞系中,miR-451 mimics组p-PI3K、p-ERK、p-AKT的表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.Rabl4是miR-451的靶基因之一。2.miR-451可以通过结合Rab14的3'UTR抑制其表达,通过调控下游的PI3K/Akt通路,抑制骨肉瘤细胞抗失巢凋亡。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-16）
钟幸[6]（2019）在《FASN激活pERK1/2/Bcl-xl通路介导细胞“失巢凋亡抵抗”促进骨肉瘤转移》一文中研究指出研究背景与目的:骨肉瘤(osteosarcoma)是最常见的骨恶性肿瘤,肺转移是其致死的重要原因。研究表明,细胞失巢凋亡抵抗是促进肿瘤转移的重要因素,但是,失巢凋亡抵抗促进骨肉瘤肺转移的机制尚不明确。我们前期实验研究显示,FASN在骨肉瘤合并肺转移患者中高表达。在本研究中,我们探索FASN在骨肉瘤失巢凋亡抵抗促进肺转移的作用及其分子机制。研究方法:1、骨肉瘤细胞(143B、MG-63、Saos-2)与正常成骨细胞(hFOB1.19)抗失巢凋亡能力的研究:采用台盼蓝细胞染色检测细胞失巢状态下的存活率,采用克隆形成实验检测细胞失巢后克隆形成能力,采用流式细胞术检测细胞失巢凋亡率,比较骨肉瘤及正常成骨细胞的失巢凋亡抵抗能力。2、FASN在骨肉瘤细胞抗失巢凋亡中的作用:在骨肉瘤细胞(143B、MG-63、Saos-2)与正常成骨细胞(hFOB1.19)中,采用Western-blot、qPCR、ICC检测FASN及pERK1/2、Bcl-xl表达水平。探索FASN/pERK1/2/Bcl-xl分子信号通路在骨肉瘤细胞失巢凋亡中的作用。3、改变FASN表达,验证FASN在失巢凋亡抵抗中的作用及机制:在FASN高表达细胞中下调FASN表达,在FASN低表达细胞中,上调FASN表达,检测细胞迁移、克隆形成率、细胞失巢凋亡率验证FASN促进失巢凋亡抵抗。Western-blot检测FASN/pERK1/2/Bcl-xl表达水平。我们对FASN-overexpression组进行了信号通路阻断试验。FASN-overexpression和control细胞中,使用MEK抑制剂GDC-0973阻断p-ERK1/2表达,检测下游BCL-xl表达及失巢凋亡率。4、建立失巢凋亡抵抗细胞株进一步验证FASN参与失巢凋亡抵抗:采用反复多次悬浮-贴壁的方法建立失巢凋亡抵抗细胞株143B-AR。检测143B-AR细胞失巢凋亡抵抗能力及FASN/pERK1/2/Bcl-xl表达水中。5、体内实验。裸鼠皮下成瘤后进行原位移植,比较143B-AR和143B细胞成瘤能力。活体注射下调FASN的慢病毒观察抑制FASN对成瘤能力及肺转移的影响。研究结果:1、骨肉瘤细胞抗失巢凋亡能力明显高于正常成骨细胞:悬浮培养后骨肉瘤细胞143B、MG-63失巢存活率、克隆形成数目显着高于非肿瘤细胞hFOB 1.19,而细胞凋亡率显着低于hFOB 1.19。2、FASN的表达水平与失巢凋亡抵抗呈正相关。FASN在143B、MG-63细胞中高表达,在Saos-2、hFOB1.19细胞中低表达。在蛋白水平上,FASN与pERK1/2/Bcl-xl的表达水平一致。3、下调FASN降低143B、MG-63细胞失巢存活率及迁移能力,增加失巢凋亡率,抑制pERK1/2/Bcl-xl通路。上调FASN增加Saos-2、hFOB1.19细胞失巢凋亡存活率及迁移能力,激活pERK1/2/Bcl-xl通路。并且,阻断pERK无法完全逆转上调FASN所致的失巢凋亡抵抗作用。4、143B-AR细胞具有失巢凋亡抵抗能力。与143B细胞相比,143B-AR细胞具有更高失巢存活率及迁移能力,失巢凋亡率更低,FASN/pERK1/2/Bcl-xl通路激活。抑制FASN可降低其失巢凋亡抵抗能力。5、体内实验验证FASN促进骨肉瘤细胞成瘤及转移。143B-AR细胞具有更强的体内成瘤能力,下调FASN抑制143B-AR细胞肺转移。结论:本研究中,我们明确了FASN在介导失巢凋亡抵抗促进骨肉瘤细胞肺转移明确中的作用,初步探索了骨肉瘤肺转移相关的分子机制,为今后骨肉瘤临床治疗提供新的治疗靶点。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-01）
龙新华[7]（2019）在《VCP诱导自噬通过抑制细胞“失巢凋亡”促进骨肉瘤转移》一文中研究指出骨肉瘤是儿童及青少年中常见的恶性骨肿瘤,早期转移是其重要特征,对于转移的患者,目前治疗效果仍不理想,肺部转移是骨肉瘤患者最主要的死亡原因。因此,深入研究骨肉瘤侵袭转移的分子机制,寻求新的防治靶点及干预策略对提高骨肉瘤转移患者的疗效至关重要。我们在前期研究中已证实VCP在骨肉瘤组织中呈过度表达,RNAi体外沉默VCP表达可以下调PI3K/AKT/NF-κβ通路活性而抑制骨肉瘤细胞侵袭、迁徙。然而,我们还发现PI3K/Akt通路的抑制并不能完全逆转VCP所介导的骨肉瘤侵袭转移,提示VCP介导骨肉瘤侵袭转移可能还涉及其他方面的机制。有研究者认为,细胞自噬可以暂时为与基质分离的细胞提供能量及维持生命活动的必须物质,延缓细胞凋亡。VCP作为叁磷酸腺苷酶超家族中的一员,与能量代谢及细胞自噬密切相关。我们推测,VCP很可能通过诱导骨肉瘤细胞自噬增强其“失巢凋亡抵抗”能力,从而促进骨肉瘤转移。本研究拟采用人新鲜骨肉瘤组织、骨肉瘤细胞株和裸鼠作为研究对象,分叁部分进行研究:首先从骨肉瘤组织中寻找VCP诱导细胞自噬的证据;然后在体外细胞实验中进一步证实VCP诱导细胞自噬、增强细胞失巢凋亡抵抗能力、促进骨肉瘤转移,同时探索可能的调控机制;最后在裸鼠体内进一步验证VCP诱导细胞自噬促进骨肉瘤生长及肺转移。第一部分VCP在新鲜骨肉瘤组织中表达及其与自噬的关系目的:检测VCP在骨肉瘤组织中表达;初步探讨VCP与细胞自噬的关系。方法:收集人新鲜骨肉瘤组织及瘤旁组织标本,RT-PCR检测VCPmRNA的表达水平;Western Blot检测VCP及自噬相关蛋白的表达水平。结果:1.新鲜骨肉瘤组织中VCPmRAN表达水平显着高于瘤旁组织。2.VCP、beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ在新鲜骨肉瘤组织中表达水平均显着高于瘤旁组织。结论:1.新鲜骨肉瘤组织中VCP呈高表达。2.VCP表达水平很可能与细胞白噬呈正相关。第二部分VCP通过激活ERK/NF-κβ信号通路诱导细胞自噬介导其“失巢凋亡抵抗”促进骨肉瘤转移目的:探讨VCP诱导细胞自噬增强失巢凋亡抵抗能力促进骨肉瘤转移及可能的机制。方法:构建VCP低表达慢病毒载体转染143B细胞,运用RNA干扰技术改变VCP表达水平;143B细胞悬浮培养7天处理;运用细胞自噬激动剂及抑制剂干预143B细胞;采用ERK抑制剂干预143B细胞。检测VCP、自噬相关蛋白及ERK/NF-κβ信号通路相关蛋白表达水平;检测细胞失巢凋亡抵抗能力;检测骨肉瘤细胞体外迁徙、侵袭能力。结果:1.RNA干扰组骨肉瘤细胞中VCP表达水平显着低于对照组,2.相对于对照组,RNA干扰组及自噬抑制剂处理组OS细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显着下调;而自噬激动剂处理的OS细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值显着上调。3.悬浮培养7天后,RNA干扰组细胞存活率显着低于对照组,自噬激动剂干预组细胞存活率显着高于自噬抑制剂干预组;自噬激动剂干预+RNA干扰组细胞存活率显着高于RNA干扰组。4.与对照组相比,VCP下调组细胞24小时内迁移率和穿膜细胞数显着减少,与对照组相比,用自噬抑制剂或自噬刺激剂处理的细胞24小时迁移率和穿膜细胞数没有显着差异。5.抑制VCP表达后,ERK/NF-κβ通路蛋白表达明显下调,同时细胞自噬相关蛋白也显著下调。6.ERK抑制剂处理组ERK、NF-κβ、Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ表达水平均明显低于对照组。结论:1.骨肉瘤细胞中VCP高表达诱导细胞自噬。2.细胞自噬增强骨肉瘤细胞失巢凋亡抵抗能力。3.VCP高表达可促进骨肉瘤细胞体外迁徙、侵袭。4.细胞自噬水平对细胞侵袭、迁徙能力影响不大。5.VCP通过激活ERK/NF-κβ信号通路诱导细胞自噬。第三部分VCP诱导细胞自噬促进骨肉瘤裸鼠体内生长、转移目的:探讨VCP诱导细胞自噬促进裸鼠体内骨肉瘤生长及肺转移。方法:建立荷瘤裸鼠模型,通过RNA干扰技术,改变VCP表达水平;运用细胞自噬激动剂及细胞自噬抑制剂改变细胞自噬水平,观察骨肉瘤在裸鼠体内生长及肺转移情况。结果:1.成功建立裸鼠皮下瘤模型及原位瘤模型。2.RNA干扰组5周瘤体重量显着低于阴性对照组及空白对照组。3.自噬激动剂处理组、白噬抑制剂处理组及空白对照组3周肿瘤大小相差不大;但自噬激动剂处理组肺转移率显着高于空白对照组及自噬抑制剂处理组。结论:1.VCP促进骨肉瘤裸鼠体内生长。2.细胞自噬促进骨肉瘤裸鼠体内肺转移。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-01）
汤晓琳[8]（2019）在《SFRP1基因沉默抑制人胃粘膜上皮细胞失巢凋亡及其机制研究》一文中研究指出目的正常上皮细胞与细胞外基质或相邻细胞脱离粘附后,发生的程序化细胞死亡称为失巢凋亡。研究发现许多肿瘤细胞,包括胃癌细胞具有抵抗失巢凋亡的能力,进而通过血液及淋巴转移至远处器官进行异位定植。但胃癌细胞发生失巢凋亡抵抗的分子机制还尚不明确。分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在胃癌等多种恶性肿瘤组织中呈低表达或表达缺失。研究发现SFRP1基因启动子区甲基化导致基因表达沉默,促进胃癌的形成和发展,但SFRP1表达沉默在胃癌发展中具体机制仍不十分明确。SFRP1表达沉默是否在正常胃粘膜上皮细胞癌变中发挥作用尚未见报道。我们在前期研究中发现人胃粘膜上皮细胞GES-1(Gastric mucosal Epithelial Cells-1,GES-1)为失巢凋亡敏感细胞,本研究通过RNA干扰沉默GES-1细胞中SFRP1表达,检测细胞失巢凋亡,非锚定生长及迁移侵袭能力的变化,探讨SFRP1对GES-1细胞失巢凋亡敏感性的影响,并进一步研究了SFRP1调控胃粘膜上皮细胞失巢凋亡的分子机制,为研究SFRP1在胃癌发展中的作用及机制提供新的思路和理论依据。方法1.应用SFRP1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人胃粘膜上皮细胞GES-1后,分别应用实时定量RT-PCR和Western blot检测SFRP1 mRNA和蛋白表达,筛选出沉默效应最显着的siRNA。2.应用poly-HEMA悬浮培养细胞模拟失巢环境。3.应用流式细胞术和Calcein AM/EthD-1荧光双染法检测转染SFRP1siRNA对细胞失巢凋亡的影响。4.应用软琼脂集落形成实验检测转染SFRP1siRNA对细胞非锚定生长的影响。5.应用Transwell小室实验检测转染SFRP1siRNA后细胞迁移力和侵袭力的变化。6.应用细胞免疫荧光和Western blot实验检测转染SFRP1siRNA后Wnt通路中β-catenin的定位及表达变化。7.应用实时定量RT-PCR检测转染SFRP1siRNA后β-catenin下游靶基因c-Myc和CyclinD1 mRNA表达变化。结果1.实时定量RT-PCR和Western blot结果表明,叁组SFRP1 siRNA及对照组Control siRNA分别转染GES-1细胞后,siRNA-891组SFRP1 mRNA表达较对照组显着降低(P<0.01)。SFRP1蛋白表达较对照组显着降低(P<0.05)。2.流式细胞术检测结果表明,悬浮培养24 h后,siRNA-891组细胞失巢凋亡率较对照组明显降低(P<0.05)。Calcein AM/EthD-1荧光双染法检测表明,与对照组比较,siRNA-891组EthD-1荧光染色的失巢凋亡细胞数目明显减少,Calcein AM荧光染色的存活细胞数目明显增多,荧光值分析显示siRNA-891组较对照组有显着差异(P<0.05)。3.软琼脂集落形成实验检测表明,siRNA-891组细胞与对照组比较,所形成的集落明显变大,集落数量明显增多,两组差异有统计学意义(P<0.05)。4.Transwell小室检测显示,与对照组相比,siRNA-891组细胞迁移及侵袭能力显着增强(P<0.05)。5.细胞免疫荧光结果显示,与对照组比较,siRNA-891组β-catenin在细胞核中表达增强。Western blot结果表明siRNA-891组β-catenin蛋白表达水平较对照组明显增加(P<0.05)。6.实时定量RT-PCR结果表明,与对照组相比,siRNA-891组细胞中c-Myc mRNA和CyclinD1 mRNA表达显着增高(P<0.01)。结论SFRP1基因沉默可抑制GES-1细胞失巢凋亡,诱导其获得失巢凋亡抗性,激活Wnt分子通路可能是其机制之一。(本文来源于《沈阳医学院》期刊2019-03-01）
杜尚策[9]（2019）在《NOX4介导的胃癌细胞耐失巢凋亡与转移的相关机制研究》一文中研究指出背景失巢凋亡是一种由细胞脱离细胞外基质而引发的细胞程序性死亡。在肿瘤细胞中,耐失巢凋亡对癌细胞在血液循环、淋巴循环中的生存乃至远处转移至关重要。但是胃癌细胞耐失巢凋亡的机制研究远未深入。氧化应激的平衡调控对肿瘤细胞的代谢、存活和生长至关重要,很可能参与了胃癌细胞的失巢凋亡进程。作为活性氧的主要来源之一,NADPH氧化酶4(NADPH Oxidase4,NOX4)在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。然而,目前对于NOX4在胃癌发生发展中的作用的研究甚少,关于NOX4对胃癌失巢凋亡调控的相关研究完全空白。方法我们对胃癌细胞进行了贴壁和悬浮培养。应用FITC Annexin V流式凋亡检测试剂盒检测细胞的失巢凋亡率。对胃癌细胞进行NOX4的敲降或过表达调控,并验证该调控对活性氧分泌以及EGFR表达的影响。在裸鼠尾静脉转移模型中验证了NOX4对胃癌细胞耐失巢凋亡以及远处转移的影响。采用免疫组化染色法检测并比较了90例胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常组织中NOX4和EGFR的表达。分析了NOX4的表达与胃癌患者临床病理学参数的关系。基于生物数据库利用生存分析探讨NOX4表达与胃癌预后的关系。结果相比于贴壁情况,悬浮培养下的胃癌细胞内NOX4表达水平和ROS分泌水平上调。敲降NOX4降低了ROS分泌和EGFR的表达,并促进了失巢凋亡。过表达NOX4上调了ROS的分泌和后续EGFR表达,并促进了耐失巢凋亡。NOX4敲降抑制了胃癌细胞在血液循环中的存活,阻碍其远处转移。NOX4在胃癌组织中的表达高于癌旁正常组织(p=0.0009)。胃癌组织中NOX4的表达与肿瘤大小(p=0.0321)、淋巴结转移(p=0.0125)、血管侵犯(p=0.0017)和不良预后(p=0.0000)密切相关。此外在胃癌组织中NOX4和EGFR的表达水平线性正相关。结论脱离基质引起的NOX4过表达通过ROS上调以及后续EGFR表达的上调促进了胃癌细胞的耐失巢凋亡以及远处转移。NOX4与胃癌的发展及预后密切相关。因此,针对NOX4的靶向治疗将有可能成为抑制和治疗胃癌进展和转移的潜在策略。(本文来源于《南京医科大学》期刊2019-03-01）
郭辰,贾俊,贾梦琪[10]（2018）在《头颈部鳞状细胞癌细胞抗失巢凋亡机制的转录组学研究》一文中研究指出研究目的:获得抗失巢凋亡能力的肿瘤细胞可造成肿瘤转移。本研究旨在研究抗失巢凋亡的CAL27AR细胞和普通CAL27细胞间的差异表达基因及其信号通路。研究方法:诱导并收集CAL27AR细胞,通过转录组分析获取CAL27AR细胞和普通CAL27细胞间差异表达基因;应用生物信息学方法对差异表达基因进行信号通路富集分析;通过逆转录PCR、Western blot及基因相关性分析等方法检验分析结果。研究结果:1.转录组分析显示实验组和对照组间共有2847个明显变化的差异表达基因;2.CAL27AR细胞中有23条信号通路被激活,而有22条信号通路被抑制;3.CAL27AR细胞中EGFR,TP53, IL-6表达下调,而VEGFA, KLF4, CDKN1A表达上调。EGFR信号通路、TP53信号通路受到抑制,VEGF信号通路被激活。STAT3酪氨酸705位点发生磷酸化。基因相关性分析证明在头颈部鳞状细胞癌和其他两种高表达VEGFA的肿瘤中存在VEGFA-STAT3-KLF4-CDKN1A信号轴。研究结论:CAL27AR细胞存在VEGFA-STAT3-KLF4-CDKN1A信号轴,该信号轴可阻碍细胞周期进程,介导CAL27AR细胞的细胞周期停滞在G1期,使其获得抗失巢凋亡能力。(本文来源于《第十四次中国口腔颌面外科学术会议论文汇编》期刊2018-10-19）
失巢凋亡论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究龙葵碱对人大肠癌RKO细胞悬浮生长和失巢凋亡作用及机制。方法:采用聚羟乙基异丁烯酸(Poly-HEMA)包被,模拟"失巢"生长环境,龙葵碱作用于RKO细胞。CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞生长,EthD-1染色检测失巢凋亡,比色法检测Caspase-3活性,Z-VAD-FMK阻断Caspase-3,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光染色检测活性氧(ROS)生成,活性氧抑制剂NAC阻断ROS生成,Western blot法检测FAK表达和磷酸化。结果:龙葵碱可显着抑制RKO悬浮生长,呈剂量依赖性。龙葵碱作用后悬浮生长RKO细胞吸收EthD-1散发红色荧光,部分细胞可见核碎裂,呈现凋亡形态改变。龙葵碱可显着增强Caspases3活性,Caspases抑制剂Z-VAD-FMK可拮抗龙葵碱对细胞失巢凋亡的作用。龙葵碱可以升高细胞内ROS水平,活性氧抑制剂NAC可以拮抗龙葵碱对Caspases-3活性。龙葵碱还可抑制FAK磷酸化。结论:龙葵碱可以抑制RKO细胞悬浮生长,诱导失巢凋亡,其机制与活化Caspase-3、升高细胞内ROS水平和抑制FAK磷酸化相关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
失巢凋亡论文参考文献
[1].汤晓琳,杨丹,吕鑫,沈薇.SFRP1基因沉默抑制人胃黏膜上皮GES-1细胞失巢凋亡[J].中国老年学杂志.2019
[2].闫霞,胡兵.龙葵碱对大肠癌RKO细胞失巢凋亡作用及机制[C].第十七届全国中西医结合肿瘤学术大会摘要集.2019
[3].闫洪亮,李杨,靳翠平,宫晓锦,李鹏飞.miR-204靶向BDNF调控上皮性卵巢癌细胞抗失巢凋亡的实验研究[J].现代妇产科进展.2019
[4].祁麟,齐春胜,肖波.靶向沉默TrkB基因对结肠癌细胞SW620失巢凋亡水平的影响[J].天津医药.2019
[5].翟永清.MicroRNA-451介导骨肉瘤细胞抗失巢凋亡的作用和机制研究[D].山东大学.2019
[6].钟幸.FASN激活pERK1/2/Bcl-xl通路介导细胞“失巢凋亡抵抗”促进骨肉瘤转移[D].南昌大学.2019
[7].龙新华.VCP诱导自噬通过抑制细胞“失巢凋亡”促进骨肉瘤转移[D].南昌大学.2019
[8].汤晓琳.SFRP1基因沉默抑制人胃粘膜上皮细胞失巢凋亡及其机制研究[D].沈阳医学院.2019
[9].杜尚策.NOX4介导的胃癌细胞耐失巢凋亡与转移的相关机制研究[D].南京医科大学.2019
[10].郭辰,贾俊,贾梦琪.头颈部鳞状细胞癌细胞抗失巢凋亡机制的转录组学研究[C].第十四次中国口腔颌面外科学术会议论文汇编.2018
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