利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎

论文摘要

为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9 mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证。结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28%;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00%;将Cas9 mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40%;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失。综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 尉翔栋,吕晨晨,朱肖亭,冯亚杰,辛晓玲,施巧婷,梁瑞清,徐照学,王二耀,滑留帅

关键词: 基因,基因编辑,胚胎

来源: 河南农业科学 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南省农业科学院畜牧兽医研究所/河南省畜禽繁育与营养调控重点实验室,河南农业大学牧医工程学院,郑州外国语学校

基金: 国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-38),河南省肉牛产业技术体系项目(S2013-08),河南省农业科学院畜牧兽医研究所博士启动费项目(2016BSQD),河南省农业科学院自主创新专项(2018ZC57)

分类号: S823;Q78

DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2019.02.019

页码: 131-136

总页数: 6

文件大小: 840K

下载量: 228

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