悬钩子木多糖的分离纯化及免疫调节活性研究

悬钩子木多糖的分离纯化及免疫调节活性研究

论文摘要

目的从悬钩子木中分离纯化多糖,初步分析其结构特征并进行免疫调节活性研究。方法采用热水浸提法提取悬钩子木粗多糖(Rubus sachalinensis polysaccharides,RSP),再经Cellulose DE-52纤维素离子交换柱、Sephadex G-100凝胶柱色谱进行分离纯化;利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)鉴定纯度并测定相对分子质量;采用气相色谱分析其单糖组成;采用红外光谱和核磁共振波谱对其结构进行初步分析;采用CCK-8法检测其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;利用ELISA试剂盒测定其对白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放能力的影响。结果从悬钩子木中分离纯化得到RSP1-1和RSP1-2 2种多糖,相对分子质量分别为13 227(多分散指数1.15)和9 343(多分散指数1.08);2种多糖均主要含阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其物质的量比分别是RSP1-1(9.5∶7.0∶10.3∶18.6)和RSP1-2(5.7∶11.1∶10.3∶14.2);红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明RSP1-1可能主要含有α-1,3-Ara、β-1,4-Gal、β-1,3-Glc、β-1,3-Man片段,RSP1-2可能主要含有β-1,4-Gal、β-1,3-Glc、β-1,3-Man片段。质量浓度在5~200μg/m L时,RSP1-1、RSP1-2和RSP2均可刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.05),并且明显促进淋巴细胞分泌IFN-γ和TNF-α(P<0.05),质量浓度为5μg/m L时能促进淋巴细胞分泌IL-2(P<0.05)。结论 RSP1-1和RSP1-2均为首次从悬钩子木中分离得到的天然来源的均一多糖。红外光谱及核磁共振波谱进一步表征了其纯度和结构特征。RSP1-1、RSP1-2和RSP2均能不同程度促进脾淋巴细胞的增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和TNF-α,呈现一定的免疫调节活性。

论文目录

  • 1 材料与仪器
  •   1.1 材料
  •   1.2 仪器
  • 2 方法
  •   2.1 悬钩子木多糖(RSP)的提取
  •   2.2 RSP的Cellulose DE-52离子交换柱色谱
  •   2.3 RSP1的Sephadex G-100凝胶柱色谱[6]
  •   2.4 RSP1-1和RSP1-2的纯度鉴定[7]
  •     2.4.1 HPGPC色谱条件
  •     2.4.2 标准曲线的绘制
  •     2.4.3 样品的纯度测定
  •     2.4.4 紫外光谱扫描
  •   2.5 GC法分析单糖组成[8-9]
  •     2.5.1 标准单糖的衍生化
  •     2.5.2 RSP1-1和RSP1-2的水解和衍生化
  •     2.5.3 气相色谱(GC)检测条件
  •   2.6 红外光谱分析
  •   2.7 核磁共振分析
  •   2.8 RSP1-1和RSP1-2多糖对机体免疫功能的影响
  •     2.8.1 给药样品配制
  •     2.8.2 小鼠脾淋巴细胞悬液制备
  •     2.8.3 小鼠脾淋巴细胞增殖实验
  •     2.8.4 ELISA法检测IL-2、IFN-γ和TNF-α水平
  •     2.8.5 统计学处理
  • 3 结果
  •   3.1 多糖的分离纯化
  •   3.2 纯度鉴定与相对分子质量测定
  •   3.3 RSP1-1和RSP1-2单糖组成分析
  •   3.4 红外光谱分析
  •   3.5 核磁共振解析[16-18]
  •     3.5.1 RSP1-1的结构解析
  •     3.5.2 RSP1-2的结构解析
  •   3.6 RSP1-1、RSP1-2和RSP2对脾淋巴细胞增殖及IL-2、IFN-γ和TNF-α的影响
  • 4 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘贝女,张屏,吴迎香,苏日娜,赵红梅,包保全

    关键词: 蒙药,悬钩子木,特征图谱,天然多糖,分离纯化,单糖组成,免疫活性

    来源: 中草药 2019年24期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 中药学

    单位: 内蒙古医科大学药学院

    基金: 国家自然科学基金地区项目(81460651),内蒙古自治区研究生教育创新计划项目(S201713202),自治区级大学生创新创业训练计划项目(03052074)

    分类号: R284;R285

    页码: 5941-5949

    总页数: 9

    文件大小: 314K

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