论文摘要
Bmal1作为生物钟环路中的正向因子,可与Clock形成异二聚体,通过绑定per和cry的启动子区域的E-box启动转录。果蝇（Drosophila melanogaster）中cycle基因与bmall基因同源,小鼠（Mus musculus）只有一个Bmall基因,但在斑马鱼（Danio rerio）中有两个bmall基因,分别是bmalla,bmallb。研究发现,在小鼠和果蝇中,敲除Bmall/cycle.其行为节律丧失。本实验室已经对斑马鱼Bmallb的生物钟功能进行了初步分析,结果发现,斑马鱼Bmallb与果蝇CYCLE和小鼠BMAL1存在差异。而斑马鱼Bmal1a的生物钟功能尚不清楚。qRT-PCR实验发现斑马鱼bmal1a的mRNA呈现明显的昼夜节律,通过分析bmal1a基因的启动子,发现两个RORE元件,双荧光素酶报告实验和ChIP实验分别从体外和体内证实生物钟可以通过结合RORE元件直接调节bmal1a基因的表达。为了研究Bmal1a对生物钟的影响,我们利用bmal1a-/-以及bmal1a-/-;bmal1b-/-进行行为实验以及荧光定量实验。行为实验结果显示与WT相比,bmal1a-/-和bmal1a-/-:bmal1b-/-在DD（恒暗）和LL（恒亮）条件下周期延长,相位后移;LD（正常光暗）条件下,bmal1a-/-,.bmal1b-/-活动量明显下降。qRT-PCR结果显示,DD条件下,主要核心钟基因bmal1a在bmal1a-/-中表达上调,而bmal1b,perla,per3和crylbb在bmal1a-/-中表达下调。LD条件下,主要核心钟基因bmal1a,bmalb,bmal2,per1a,per3,cry1bb 在 bmal1a-/-表达明显下调;在bmal1a-/-,.bmal1b-/-中,主要核心钟基因bmal1a,bma12在DD条件下表达明显上调,bmal1b,per1a,per3,cry1bb在DD条件下表达明显下调,在LD条件下,核心钟基因bmal1a,per1a表达上调,bmal1b,bma12,per3,cry1bb表达下调。为了进一步研究Bmal1a对生物钟的影响,我们构建了bmal1a过表达转基因鱼系Tg（hsp70l:bmal1a;CG2）。行为实验结果证明热激过表达bmal1a,斑马鱼的活动量明显增加,行为节律发生改变。qRT-PCR结果显示,主要钟基因bmal1a,bmal2,perla.per3,cry1bb等在bmal1a过表达转基因鱼系中表达发生明显变化。另外,我们还构建了松果体特异性敲除bmal1a的转基因鱼系Tg（U6x:sgRNA（bm alla）:LC）;Tg（exorh..Cas9:CG2）和松果体特异性过表达bmalla转基因鱼系Tg（exorh:bmal1a;CG2）,这将有助于以后更准确地研究Bmal1a在松果体中的功能。综上所述,我们发现bmal1a在斑马鱼生物钟调节中起着重要作用。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 陈呈燕
导师: 王晗
关键词: 生物钟,斑马鱼,行为实验
来源: 苏州大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学,生物学
单位: 苏州大学
基金: 面上项目,31871 187,生物钟蛋白Period3在睡眠中的调节机制,面上项目,31871186,Groucho1和2在斑马鱼生物钟的作用机制研究,国家自然科学基金青年项目,81701347,雌激素影响注意缺陷多动障碍的机制研究,江苏省自然科学基金青年项目,BK20170351,注意缺陷多动障碍(ADHD)斑马鱼疾病模型per1b无效突变体的药物筛选
分类号: Q953
DOI: 10.27351/d.cnki.gszhu.2019.002965
总页数: 94
文件大小: 7367K
下载量: 38
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