导读:本文包含了半乳糖苷酶基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:半乳糖,基因,内质网,密码子,宏基,曲霉,热稳定性。
半乳糖苷酶基因论文文献综述
刁文涛,向凌云,宁萌,王雪妍,马焕[1]（2019）在《α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究》一文中研究指出利用大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,成功异源表达了一株链球菌(Streptococcus)S1的α-半乳糖苷酶基因,重组α-半乳糖苷酶经镍柱纯化后,测定其酶学性质。重组α-半乳糖苷酶最适pH值为6.5,最适温度为50℃,在碱性环境中(pH 7.5～10.0)及在40℃以下温度条件下该酶较为稳定;酶催化动力学结果显示,该酶在最适条件下水解硝基苯-α-D-半乳糖苷(pNPG)的最大水解速率(V_(max))为508.38μmol/(min·mg),米氏常数(K_m)值为1.2 mmol/L;通过薄层层析(TLC)法检测到该重组α-半乳糖苷酶可以高效地水解天然底物蜜二糖、棉籽糖和水苏糖中的α-半乳糖苷键。(本文来源于《中国酿造》期刊2019年08期）
张文洪,杨雁霞,杨正凤,黄遵锡,李俊俊[2]（2019）在《滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶基因的表达及酶学性质》一文中研究指出【目的】对滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶进行异源表达和纯化,并研究其酶学性质。【方法】从滇金丝猴粪便微生物的宏基因组中克隆出一个β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,对该基因进行异源表达和酶学性质分析。构建含有T7强启动子的pEASY-E2-galRBM20_1质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行酶学性质研究。【结果】滇金丝猴粪便来源的β-半乳糖苷酶(galRBM20_1)最适pH为5.0,在pH 4–7之间能保留70%及其以上的活性。最适温度为45°C,在37°C和45°C下耐受1 h,酶活不变。特别的是,该酶具有良好的Na Cl稳定性,经1–5 mol/L的Na Cl作用1 h后,相对酶活均能超过初始酶活:当NaCl的作用浓度为4 mol/L时,β-半乳糖苷酶相对酶活最高(146%);当NaCl的作用浓度为5mol/L时,β-半乳糖苷酶的相对酶活仍达到135%。【结论】本研究从滇金丝猴粪便微生物的宏基因库中克隆得到β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)表达,首次从动物胃肠道宏基因组中获得具有耐盐和转糖基产Galactooligosaccharides(GOS)性能的β-半乳糖苷酶。该酶具有良好的耐盐性,和较广的pH作用范围,使其在食品、生物技术领域和环保方面的发展具有良好的应用价值。(本文来源于《微生物学报》期刊2019年08期）
邱聪花,罗蒙,林娟,叶秀云,王国增[3]（2019）在《Alkalibacterium sp. SL3中α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和性质研究》一文中研究指出以大布苏盐碱湖分离菌Alkalibacterium sp. SL3的DNA为模板,利用PCR扩增α-半乳糖苷酶基因(gal SL3),构建重组质粒pET-22b-gal SL3,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达重组酶(r Gal SL3).通过镍柱亲和层析分离纯化重组酶,并对纯化的重组酶进行性质研究.研究表明,纯酶r Gal SL3最适pH值为5.5,最适温度为55℃;该酶在pH值5.0～10.0保持90%以上的剩余酶活,在50℃有非常好的热稳定性.在0～1.5 mol·L~(-1)NaCl溶液中该酶的酶活基本不受影响,在3.0 mol·L~(-1)NaCl溶液中有很好的稳定性. Pb~(2+)、Ca~(2+)、Co~(2+)、Li~+、Na~+、K~+、Triton-100和β-mercaptoethanol等对重组酶的活性有明显的促进作用.该酶水解对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷的Km、vmax和kcat分别为(2.64±0.02)μmol·m L~(-1)、(454.55±0.59)μmol·(mg·min)~(-1)和(347.73±1.27) s~(-1).重组酶可水解蜜二糖和棉籽糖,不能水解瓜尔豆胶.(本文来源于《福州大学学报(自然科学版)》期刊2019年01期）
郭昱含,杨勇智,郭贺楠,王剑,曹云鹤[4]（2018）在《米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果》一文中研究指出本试验旨在研究米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果。以NCBI数据库中米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因gal A的mRNA序列(GenBank登录号:XP_001817311.1)为依据,利用PCR扩增得到gal A基因并根据毕赤酵母使用密码子的偏好性优化基因序列,构建野生型和优化型毕赤酵母工程菌株,摇瓶发酵120 h,测定酶学性质。设置25和45℃2个温度,每个温度下各设置0.6、1.2和2.4 U 3个加酶量,用发酵得到的α-半乳糖苷酶酶解10 mL豆浆中的大豆寡糖。结果显示:该α-半乳糖苷酶基因gal A全长1 605 bp,不含内含子,编码534个氨基酸,诱导120 h后优化型工程菌株的α-半乳糖苷酶活性为1.952 U/mL,比野生型工程菌株提高了285%。发酵得到的α-半乳糖苷酶的最适pH为4.33,最适温度为55℃;在pH 3.00～8.00间稳定性良好,在55℃条件下保持40 min后残余α-半乳糖苷酶相对活性为60%;该酶对大部分金属离子具有抗性,但其被MnSO4抑制;以对硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷(p NPG)为底物时的酶动力学参数米氏常数(Km)为0.024 3 mol/L,最大反应速度(Vmax)为1.0×10-7mol/(L·s)。酶解试验结果显示,45℃下加酶量为2.4 U反应12 h后,大豆寡糖中棉籽糖的降解率为50.0%,水苏糖的降解率为31.9%。由此可见,本试验中生产的α-半乳糖苷酶对豆浆中的大豆寡糖有一定的降解作用。(本文来源于《动物营养学报》期刊2018年11期）
班秋妍[5]（2018）在《柿果实成熟软化中β-半乳糖苷酶基因功能分析》一文中研究指出新鲜柿果风味独特、营养丰富,但采后易软化,不利于采后贮藏保鲜,严重制约柿鲜果产业的发展。细胞壁结构是影响果实质地的重要因子,果实成熟后细胞壁水解酶的作用是导致果实软化的关键因素,果实细胞壁的降解是多个胞壁酶共同参与协同作用的结果,因此研究及鉴定参与果实软化的细胞壁水解酶对了解和调控果实软化进程具有重要意义。β-半乳糖苷酶属于糖基水解酶35家族,可水解糖链、糖脂及糖蛋白上非还原末端β-D-半乳糖残基,可通过水解细胞壁中半乳聚糖参与影响果实软化细胞壁降解进程。然而有关柿β-半乳糖苷酶基因鉴定及功能的研究尚未见报道。本研究以我国优良涩柿品种‘富平尖柿’为试材,于柿果实中分离鉴定β-半乳糖苷酶基因家族成员,通过系统分析其在柿不同组织、果实发育及不同采后处理下的表达模式,筛选获得两个在柿果实发育及软化中高表达的β-半乳糖苷酶基因:DkGAL1和DkGAL2,并利用转基因手段分析这两个基因的功能。主要研究结果如下:1.柿果实成熟软化进程与β-半乳糖苷酶活性和细胞壁半乳糖残基含量密切相关,柿果实细胞壁中半乳糖残基含量随果实成熟逐渐降低,果肉中游离半乳糖含量随果实成熟逐渐升高。采用丙烯和1-MCP处理采后柿果实,人为调控果实成熟软化进程,发现促进果实软化的丙烯处理使β-半乳糖苷酶活性显着提高,延缓果实成熟的1-MCP处理降低了β-半乳糖苷酶活性。2.从柿果实中克隆获得5个β-半乳糖苷酶基因,命名为DkGAL1~5,编码氨基酸个数732~857,基因序列分析表明它们均含有糖基水解酶35家族特征结构域G-G-P-[LIVM](2)-x(2)-Q-X-E-N-E-[FY]。分析各基因的表达模式发现,DkGAL1~5在柿各组织中均有表达,其中DkGAL1在叶和果实成熟起始时期表达丰度最高,DkGAL2在叶和发育期果实中表达量较高,推测DkGAL2主要参与叶片及果实发育。DkGAL3、DkGAL4和DkGAL5在果实中表达丰度较低,可能不是柿果实发挥β-半乳糖苷酶活性的主要基因。3.以丙烯和1-MCP处理的采后柿果实为材料,分析DkGALs基因家族成员表达模式。丙烯处理下DkGAL1表达量显着升高,而1-MCP处理下其表达被抑制,表明DkGAL1可能是参与柿果实软化的主要β-半乳糖苷酶基因。DkGAL2~5表达模式与果实成熟关系不显着。4.通过染色体步移技术分离获得长度为1702bp的DkGAL1基因启动子,该启动子活性可被乙烯和ABA处理显着诱导。于番茄中过量表达DkGAL1可缩短其果实发育及成熟时间,使果实转色加快,且果实细胞壁中半乳糖残基含量较野生型低,果肉中游离半乳糖含量较野生型高;细胞显微结构显示转基因番茄果实细胞间的中胶层降解和细胞分离加快;采后贮藏过程中,DkGAL1转基因番茄果实的转色速度快、硬度低、乙烯释放量高,乙烯合成关键基因和细胞壁降解相关基因表达量较高,表明DkGAL1可通过促进细胞壁半乳聚糖降解、提高乙烯合成和加速果肉细胞分离促进果实成熟。此外,过量表达DkGAL1可促进番茄种子萌发及胚根伸长,该种子萌发及胚根伸长过程中细胞壁半乳糖残基含量低于野生型,参与胚乳软化的细胞壁MAN2基因及参与胚根延伸的XET4基因表达量显着高于野生型,表明DkGAL1可通过参与胚乳软化促进种胚萌出。5.分离获得长度为1030bp的DkGAL2启动子序列,顺式作用元件分析发现其中含有与栅栏组织分化和叶形态发育相关的作用元件(HD-zip1/2),DkGAL2启动子可被ABA和GA_3显着诱导。转DkGAL2基因可促进拟南芥叶片生长和改变植株细胞形态。叶肉细胞显微结构显示转基因拟南芥叶片、叶柄及茎中细胞体积增大,纵向伸长明显,其中叶肉细胞内栅栏组织排列更整齐紧密。此外,过量表达DkGAL2可以提高拟南芥逆境胁迫耐受性,延缓转基因拟南芥整株及离体叶片黑暗诱导下的衰老。在MeJA、ABA和NaCl胁迫条件下,转基因拟南芥幼苗生长状态优于野生型,细胞内游离半乳糖含量高于野生型;黑暗诱导条件下转基因拟南芥叶绿素降解速率和丙二醛含量低于野生型植株,胞内ABA合成及信号转导相关基因(NCED3、SAG29、RD29B、ABF1、ABF4和ABI5)表达水平低于野生型,表明DkGAL2可通过水解细胞壁提高细胞内半乳糖含量缓解逆境胁迫并参与改变植株体内的ABA合成信号传递,降低植物对ABA信号的敏感性,从而在延缓叶片衰老中起作用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-03-01）
郭碧珊,蔡志鹏,Josef,Voglmeir,刘丽[6]（2017）在《Akkermansia muciniphila源β-半乳糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质研究》一文中研究指出β-半乳糖苷酶(EC 3.2.1.23)属于糖苷水解酶,由β-半乳糖苷酶基因编码,是由4个亚基组成的四聚体,一般可催化乳糖分解为一分子的葡萄糖和一分子的半乳糖,是糖链结构分析中的重要工具酶。Akkermansia muciniphila(DSM 22959),发现于2004年,是一种人体肠道益生菌,属于革兰氏阴性严格厌氧菌,能够使用肠粘蛋白和上皮黏液层的高糖基化蛋白作为其唯一的碳源和氮源。到目前为止,我们还未发现有来自Akkermansia muciniphila源的半乳糖苷酶的研究报道。本研究从Akkermansia muciniphila源中发现了一种编码β-半乳糖苷酶的基因,对其进行了基因克隆和体外重组表达,并对其生化特性和底物特异性进行了研究。结果表明:重组酶的最适pH为3.5;最适反应温度为45℃;不依赖金属离子;四种表面活性剂(尿素、SDS、曲拉通和β-巯基乙醇)均能降低酶的活性,其中酶对SDS最为敏感;此外来自Akkermansia muciniphila源的半乳糖苷酶具有严格的底物特异性,能够水解寡糖中的核心β1-3和β1-6半乳糖,而对β1-4半乳糖的作用极小甚至不能水解。(本文来源于《第十一届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》期刊2017-10-18）
张多多,郑菲,罗会颖,李中媛,罗学刚[7]（2017）在《嗜热子囊菌JCM12803的α-半乳糖苷酶基因tcgal27A在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出从嗜热子囊菌(Thermoascus crustaceus)JCM12803克隆α-半乳糖苷酶基因,并对其酶学性质进行系统的研究,旨为获得工业应用性质优良的α-半乳糖苷酶。通过RT-PCR方法从T.crustaceus JCM12803中克隆α-半乳糖苷酶基因序列,并对其酶学性质进行了系统的分析。结果显示,tcgal27A属于糖苷水解酶27家族,基因全长1 918 bp,含有4个内含子,c DNA全长1 419 bp,编码472个氨基酸,预测tcgal27A N端含有24个氨基酸为其可能的信号肽。将TCGal27A在毕赤酵母中成功地进行了表达,所获得的重组TCGal27A具有高比活(336.5 U/mg)及宽泛的底物特异性,对蜜二糖(14.4 U/mg)、棉子糖(9.1 U/mg)、角豆胶(3.6 U/mg)、魔芋粉(1.6 U/mg)、瓜尔豆胶(1.3 U/mg)、水苏糖(0.7 U/mg)都有着不同程度的降解作用。以pNPG为底物时的Km值为1.6mol/m L,Vmax为536.8μmo L/(min·mg)。TCGal27A的最适作用pH为4.5,最适温度为65℃,50℃处理1 h之后酶活力还能保持86.0%。这些结果表明耐高温TCGal27A性质优良,可添加到饲料中,在消化和提高豆粕蛋白能量利用率方面有良好的潜在应用价值。(本文来源于《生物技术通报》期刊2017年06期）
潘艳青,刘庆国,汪琨,朱廷恒[8]（2017）在《热稳定型α-半乳糖苷酶的应用及基因工程研究进展》一文中研究指出α-半乳糖苷酶是一种水解酶,可以将食品、饲料中的不良寡糖等抗营养因子水解,改变其营养成分并被动物吸收利用。该酶广泛存在于植物、动物及微生物中,在饲料、食品等工业以及现代医学中都有应用。目前,开发热稳定的α-半乳糖苷酶并利用基因工程方法进行分子改造和外源表达已成为研究热点。本文对近年来热稳定的α-半乳糖苷酶的应用和基因工程研究进展进行综述。(本文来源于《工业微生物》期刊2017年03期）
张继文[9]（2017）在《基因剂量及内质网分泌相关蛋白对α-半乳糖苷酶表达的影响》一文中研究指出α-半乳糖苷酶是一种能够催化水解各类以α键结合的非还原性末端α-半乳糖苷化合物的外切糖苷水解酶。本研究的主要目的是利用分子生物学技术和手段,构建并表达热稳定性好,酶活高的α-半乳糖苷酶重组基因酵母工程菌。本研究将Neosartorya fischeri P1α-半乳糖苷酶Gal A基因序列进行全基因人工合成,并连接到酵母表达载体pAO815上,构建了α-半乳糖苷酶重组表达质粒pAO-Gal A,随后成功将重组表达载体电转入毕赤酵母中进行表达。表达的α-半乳糖苷酶Gal A的最适pH为4.5,最适温度为50℃;单拷贝的α-半乳糖苷酶Gal A平均酶活达到55.74U/mL。终浓度20 mmol/mL的Fe Cl_2可以大幅提高α-半乳糖苷酶的酶活。之后又成功构建了α-半乳糖苷酶两拷贝和叁拷贝重组表达质粒,并转入酵母中进行了表达。两拷贝的α-半乳糖苷酶重组表达菌株的α-半乳糖苷酶酶活达到95.22 U/mL,比单拷贝菌株酶活提高70.83%;而叁拷贝重组表达菌株发酵液平均酶活为35.93 U/mL,比单拷贝菌株酶活降低35.54%。本研究还构建了4种与内质网分泌蛋白相关基因与α-半乳糖苷酶基因共表达的重组表达菌株,结果显示HAC1-Gal A共表达重组菌株的平均酶活为64.24 U/mL,PDI-Gal A共表达重组菌株平均酶活68.7 U/mL,Ero1-Gal A共表达重组菌株平均酶活70.71 U/mL,分别比α-半乳糖苷酶单拷贝重组表达菌株酶活提高15.25%、23.25%和26.86%。Hsp40-Gal A共表达重组菌株平均酶活30.67 U/mL,比α-半乳糖苷酶单拷贝重组表达菌株酶活降低了44.99%;将两拷贝重组表达菌株小摇瓶发酵酶活最高的菌株进行14 L水平的发酵罐高密度发酵,发酵120 h的上清液稀释40倍后,α-半乳糖苷酶酶活达到791.23 U/mL。加入终浓度20 mmol/mL的FeCl_2到反应体系中时,酶活达到1400U/mL。本研究的意义:通过利用分子生物学技术和手段构建并表达热稳定性好,酶活高的α-半乳糖苷酶重组基因酵母工程菌,提高α-半乳糖苷酶的表达量,降低生产成本,为α-半乳糖苷酶的工业应用提供优良的候选酶。(本文来源于《武汉轻工大学》期刊2017-05-20）
毕云枫,徐琳琳,姜珊,李娜,王溪竹[10]（2017）在《Thermotoga neapolitana中α-半乳糖苷酶基因的克隆表达与酶学性质研究》一文中研究指出将新阿波罗栖热袍菌(Thermotoga neapolitana)的耐热α-半乳糖苷酶基因经PCR扩增,以p ET-28a为表达载体,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中进行表达,用0.8 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,采用超声波细胞破碎菌体得到α-半乳糖苷酶。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的方法获得α-半乳糖苷酶的分子质量约为35 ku。并对α-半乳糖苷酶的酶学性质进行研究,结果表明:该α-半乳糖苷酶的最适反应温度为85℃;最适反应p H值为5.0;在金属离子对酶活影响的研究中发现Al~(3+)、Na~+、K~+、Ca~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Co~(2+)对酶活起到促进作用,Cu~(2+)、Fe~(2+)、Ag~(2+)、Mn~(2+)、Ni~(2+)的终浓度达到100 mmol/L时对酶活有较强的抑制作用;具有较好的热稳定性,在95℃处理38 h后仍具有50%的活性。(本文来源于《中国酿造》期刊2017年01期）
半乳糖苷酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】对滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶进行异源表达和纯化,并研究其酶学性质。【方法】从滇金丝猴粪便微生物的宏基因组中克隆出一个β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,对该基因进行异源表达和酶学性质分析。构建含有T7强启动子的pEASY-E2-galRBM20_1质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行酶学性质研究。【结果】滇金丝猴粪便来源的β-半乳糖苷酶(galRBM20_1)最适pH为5.0,在pH 4–7之间能保留70%及其以上的活性。最适温度为45°C,在37°C和45°C下耐受1 h,酶活不变。特别的是,该酶具有良好的Na Cl稳定性,经1–5 mol/L的Na Cl作用1 h后,相对酶活均能超过初始酶活:当NaCl的作用浓度为4 mol/L时,β-半乳糖苷酶相对酶活最高(146%);当NaCl的作用浓度为5mol/L时,β-半乳糖苷酶的相对酶活仍达到135%。【结论】本研究从滇金丝猴粪便微生物的宏基因库中克隆得到β-半乳糖苷酶基因galRBM20_1,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)表达,首次从动物胃肠道宏基因组中获得具有耐盐和转糖基产Galactooligosaccharides(GOS)性能的β-半乳糖苷酶。该酶具有良好的耐盐性,和较广的pH作用范围,使其在食品、生物技术领域和环保方面的发展具有良好的应用价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
半乳糖苷酶基因论文参考文献
[1].刁文涛,向凌云,宁萌,王雪妍,马焕.α-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究[J].中国酿造.2019
[2].张文洪,杨雁霞,杨正凤,黄遵锡,李俊俊.滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶基因的表达及酶学性质[J].微生物学报.2019
[3].邱聪花,罗蒙,林娟,叶秀云,王国增.Alkalibacteriumsp.SL3中α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和性质研究[J].福州大学学报(自然科学版).2019
[4].郭昱含,杨勇智,郭贺楠,王剑,曹云鹤.米曲霉来源α-半乳糖苷酶基因galA在毕赤酵母中的表达及其对豆浆中大豆寡糖的酶解效果[J].动物营养学报.2018
[5].班秋妍.柿果实成熟软化中β-半乳糖苷酶基因功能分析[D].西北农林科技大学.2018
[6].郭碧珊,蔡志鹏,Josef,Voglmeir,刘丽.Akkermansiamuciniphila源β-半乳糖苷酶基因的克隆表达及酶学性质研究[C].第十一届中国酶工程学术研讨会论文摘要集.2017
[7].张多多,郑菲,罗会颖,李中媛,罗学刚.嗜热子囊菌JCM12803的α-半乳糖苷酶基因tcgal27A在毕赤酵母中的表达[J].生物技术通报.2017
[8].潘艳青,刘庆国,汪琨,朱廷恒.热稳定型α-半乳糖苷酶的应用及基因工程研究进展[J].工业微生物.2017
[9].张继文.基因剂量及内质网分泌相关蛋白对α-半乳糖苷酶表达的影响[D].武汉轻工大学.2017
[10].毕云枫,徐琳琳,姜珊,李娜,王溪竹.Thermotoganeapolitana中α-半乳糖苷酶基因的克隆表达与酶学性质研究[J].中国酿造.2017
论文知识图
