导读:本文包含了双顺反子载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:顺反子,载体,蛋白,荧光,叶绿体,转染,质粒。
双顺反子载体论文文献综述
马玉珍,任宇,白红梅,王赛璐,云志中[1]（2019）在《人肝细胞再生增强因子双顺反子表达载体的构建及表达》一文中研究指出PCR扩增人肝细胞再生增强因子(Human augmenter of liver regeneration,ALR)基因,将其插入质粒pIRES2-EGFP多克隆位点中,构建成新霉素(Neo)、增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescence protein,EGFP)双标记基因且EGFP和ALR基因为双顺反子的真核表达载体pAIE.另外体外培养绵羊胎儿成纤维细胞(Sheep fetal fibroblast cells,sFFCs),脂质体lipofectAMINETM介导pAIE转染sFFCs,经过筛选后形成单克隆细胞,RT-PCR和免疫组化方法进一步检测ALR基因的表达.进一步将转基因细胞饥饿培养,体外成熟培养绵羊卵母细胞146个,进行体细胞核移植,经融合、激活后,在培养液中进行发育培养,对发育到8细胞胚胎在激光共聚焦显微镜下观察;同时利用免疫组化检测ALR基因在胚胎中的表达.结果表明:由IRES连接的EGFP和ALR基因在sFFCs内同时存在并表达;得到45个8细胞体细胞克隆胚胎,其中14个发育形成囊胚,EGFP和ALR基因在体细胞克隆胚胎中同时存在并表达.因此由IRES连接标记基因和目的基因,以标记基因指示目的基因的表达,可减少检测目的基因的繁琐手段,可得到高纯度表达ALR基因的转基因细胞和胚胎,为生产药用蛋白治疗肝脏疾病奠定实验基础.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2019年05期）
唐维,李强,张允刚,后猛,闫会[2]（2019）在《甘薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基双顺反子共表达载体构建》一文中研究指出为了研究甘薯AGPase小亚基功能,创制高淀粉甘薯新材料,本研究构建了甘薯35S-IbAGPa1-NosT-35SIbAGPa2-NosT共表达载体.实验首先通过酶切连接的方法构建出中间载体pzp-35S-NosT,然后将分离得到的IbAGPa1和IbAGPa2 2个小亚基核苷酸片段分别与pzp-35S-NosT载体进行连接,从而得到35S-IbAGPa1-NosT和35S-IbAGPa2-NosT 2个表达框.随后,将扩增的目的基因35S-IbAGPa1-NosT的全长片段与已经构建好的pzp-35S-IbAGPa2-NosT载体通过In-fusion技术进行连接反应,最终获得双顺反子共表达载体.(本文来源于《江苏师范大学学报(自然科学版)》期刊2019年01期）
李劲,刘琳[3]（2016）在《禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达》一文中研究指出为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态.以APV-1的c DNA克隆(p HL1003)为模板,运用PCR技术扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期Agno-1a区序列作为载体片段;从质粒p EGFP-N1中扩增出编码绿色荧光的EGFP DNA片段;经连接构成重组质粒p HL1003-GFP,通过脂质体细胞转染方法将质粒DNA转染到鸡胚胎和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,通过细胞培养观察荧光表达状况.DNA序列分析证实了重组克隆中的EGFP序列与已知的质粒p EGFP-N1中EGFP序列一致.转染72 h后观察鸡和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光,说明GFP可以在构建的双顺反子重组质粒的下游中正常表达并产生荧光.p HL1003-GFP重组质粒的构建及其在禽类原代成纤维细胞中的高效表达,为我们研究多顺反子翻译起始调控中Agno-1a基因的表达对下游病毒结构蛋白基因的翻译调控机制提供了简洁易用的系统和模型.(本文来源于《中南民族大学学报(自然科学版)》期刊2016年01期）
陈中湘,刘晓蕾,刘丽莎,崔光晶,邬国军[4]（2014）在《含EGFP报告基因单顺反子HCV亚基因组复制子载体的构建和表达》一文中研究指出目的构建含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的HCV复制子表达载体,并实现其在细胞中的复制表达。方法用分子生物学基因克隆技术对HCV 2a型复制子的基因进行改造,用EGFP基因替代HCV基因组中的包膜基因(E1和E2)体外构建重组单顺反子HCV亚基因组复制子真核表达质粒pcDNA-JFH1-EGFP,经限制性内切酶酶切分析和测序鉴定;脂质体介导转染人肝癌细胞系Huh-7细胞,用荧光显微镜观察EGFP表达,采用半定量RT-PCR方法检测重组复制子的HCV RNA负链,采用Western blot检测HCV NS3蛋白的复制表达,并观察IFN-α对重组质粒表达的HCV RNA复制的抑制作用。结果构建的4个重组质粒酶切分析与预期相符,HCV亚基因复制子表达载体中未发生EGFP和HCV编码区读码框架改变,转染重组载体Huh-7细胞检测到HCV负链及EGFP和HCV NS3蛋白表达。转染后48h,1 000IU/ml和2 000IU/ml IFN-α处理的细胞HCV RNA表达水平分别为未处理组的20.0%和7.6%。结论含EGFP报告基因的单顺反子HCV亚基因组复制子表达载体pcDNA-JFH1-EGFP构建成功,在Huh-7细胞中能有效复制表达,为进一步研究HCV提供了实验平台。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2014年05期）
谢力[5]（2014）在《表达轮状病毒NSP4、VP7基因双顺反子腺病毒载体疫苗的构建及免疫效果研究》一文中研究指出轮状病毒(Rotavirus, RV)是世界范围内引起5岁以下婴幼儿病毒性肠胃炎的最主要病原体。RV根据VP6特异性可分为7个组(A-G),造成人类婴幼儿腹泻的主要是A组轮状病毒。全球每年有超过1亿患儿因感染RV导致腹泻,200万需要住院治疗,其中约50万因严重腹泻而死亡。至今还没有治疗轮状病毒感染的特效药物,疫苗仍然是预防和控制轮状病毒感染,减少重症死亡病例的最有效途径。目前已有多个国家和地区使用疫苗预防RV感染,获批上市的疫苗Rotateq, Rotarix及罗特威均属于减毒活疫苗,这叁种疫苗的使用为减少轮状病毒腹泻的患病和死亡发挥了重要作用。由于选用的毒株不同,加之不同地区自然条件、经济状况的差异以及母乳中可能存在的抗体等因素使活疫苗的有效性受到一定程度影响。另外,活疫苗制备中的外源因子污染、可能引起的不良反应(如肠套迭)和潜在的毒力返祖风险也是活疫苗在安全性上存在的问题。因此,在尚未获得完全安全有效的疫苗前选择合适的毒株研制不同形式的疫苗还是非常必要的。以往研究RV基因工程疫苗主要选择编码结构蛋白VP7和VP4的基因作为目的基因。VP7和VP4蛋白具有很好的免疫原性和特异性,但VP7、VP4在不同型RV中存在较大差异,且随着病毒在自然界或人体的循环也易产生基因的漂移和变异,从而可能影响到免疫原的特异性和免疫的有效性。本课题利用RV基因组中变异性小,高度保守的一个多功能非结构蛋白NSP4,与具有良好特异性和免疫原性的外壳蛋白VP7结合,构建可同时表达NSP4和VP7的双顺反子重组腺病毒疫苗,并在小鼠上对其免疫原性和保护效果进行评价。重组腺病毒疫苗的构建及体外表达产物检测。以源于流行区的G1P[8]型轮状病毒ZTR-68株基因组RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增NSP4和VP7基因,并顺序将获得的VP7和NSP4基因克隆至含有2个多克隆位点的真核载体pcDNA3.0BA。随后以得到的pcDNA3.0BA-NSP4-VP7质粒为模板,PCR扩增含有NSP4和VP7基因以及2基因间的BGHpolyA和CMV启动子序列的基因片段(NSP4-polyA-CMV-VP7),将NSP4-polyA-CMV-VP7亚克隆至腺病毒穿梭载体pshuttle-CMV中,构建含有2个基因表达盒的双顺反子穿梭质粒pshuttle-NSP4-VP7。再通过穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在E.coli BJ5183中发生同源重组获得pAd-NSP4-VP7重组质粒。线性化的pAd-NSP4-VP7转染Ad293细胞后包装生成具有感染性的重组腺病毒rAd-NSP4-VP7。同时构建表达单基因的重组腺病毒rAd-VP7和rAd-NSP4。在电镜下可观察到3种重组腺病毒颗粒的典型形态,通过间接免疫荧光、Western blot等方法可检测到NSP4和VP7基因在Vero细胞中的转录和表达。实验动物免疫及疫苗免疫原性评价。将3种重组腺病毒rAd-NSP4-VP7、 rAd-NSP4、rAd-VP7传代后以肌注和滴鼻的方式免疫ICR小鼠。3种重组腺病毒均不同程度地诱导产生了血清IgG、IgA抗体和肠道SIgA抗体,且血清抗体均具有对ZTR-68株RV的中和活性,rAd-NSP4-VP7和rAd-VP7免疫组的中和保护效果相对更为显着。通过流式细胞术分析免疫小鼠脾淋巴细胞中CD4+、CD8+及CD69+亚群的构成比情况,结合ELISPOT检测]IFN-γ、IL-4细胞因子的分泌,证明3种重组腺病毒也诱导产生了有效的细胞免疫应答,以rAd-NSP4-VP7和rAd-NSP4免疫组的效果更为显着。乳鼠的攻毒及保护性效果评价。通过将不同株RV口服接种BALB/c和ICR乳鼠后观察检测乳鼠腹泻和排毒的情况,建立了Wa(G1P[8]型)和ZTR-68株RV感染乳鼠的动物模型。通过对ICR孕鼠进行rAd-NSP4-VP7重组腺病毒疫苗免疫,再对新生乳鼠进行攻毒,攻毒后新生乳鼠的粪便病毒检出率明显降低,证实了rAd-NSP4-VP7疫苗的免疫保护作用。本研究阐述了可同时表达NSP4和VP7的双顺反子重组腺病毒rAd-NSP4-VP7的构建过程,并证实重组疫苗rAd-NSP4-VP7具有良好的免疫原性,可以同时诱导机体产生包括体液免疫、细胞免疫及粘膜免疫几个方面较为全面的免疫应答反应,且对乳鼠在攻毒后的排毒有显着的保护效果。研究同时还通过比较rAd-NSP4-VP7双顺反子疫苗与rAd-NSP4、rAd-VP7单基因重组腺病毒的免疫效果差异,为NSP4、 VP7蛋白协同表达作为新型轮状病毒疫苗的开发研究提供了实验依据和有益探索。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2014-04-01）
续宗耀,王英振,张海宁,吕成昱,周峰[6]（2013）在《人胰岛素样生长因子-1真核双顺反子表达载体pIRSES2-EGFP-hIGF-1的构建与鉴定(英文)》一文中研究指出目的:利用基因工程原理构建人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)全长基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,并观察其在人胚肾293细胞中的表达。方法:应用PCR方法从人肝细胞文库中提取人hIGF-1全长cDNA序列,克隆入T-pMD18载体中,经测序证实序列正确后,利用XhoI/EcoRI进行双酶切并定向插入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用双酶切、电泳和PCR进行鉴定证实插入片段的正确性。应用高效转染试剂X-treme GENE HP DNA Transfection reagent介导真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1转染人胚肾细胞(HEK293),转染后利用倒置荧光显微镜与RT-PCR观察目的基因在靶细胞中的表达。结果:经酶切和测序证实重组质粒载体构建正确,转染后48小时可观察到绿色荧光的表达,RT-PCR结果证实转染pIRES2-EGFP-hIGF-1后可有hIGF-1基因靶细胞中表达。结论:成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,目的基因与标记基因可同时在靶细胞中表达,为后续研究奠定基础。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2013年15期）
曲鑫建[7]（2013）在《多顺反子质粒载体重编程脂肪间充质干细胞为诱导多能干细胞》一文中研究指出诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs)是通过向分化的体细胞转入特定的外源转录因子进行重编程,从而获得具有自我更新能力和多能性的细胞。iPSCs具有形成体内所有细胞类型的潜能,尤其是能以患者自身体细胞制备iPSCs可用于特定疾病的治疗,不但能解决干细胞临床应用所遇到的免疫排斥问题和伦理医学等难题,而且在基础研究、再生医学以及药理科学中也有着广阔的发展前景和重要的意义。目前,iPSCs的来源主要是将细胞导入外源基因进行重编程而获得。但是根据细胞种类的不同,所采用的具体基因组合和转基因方式各不相同,获得的iPSCs的质量也不尽相同,存在着安全性等方面的隐患。为提高产生iPSCs的安全性,本研究采用多顺反子质粒载体在无饲养层细胞条件下重编程脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells, ADSCs)获得iPSCs,旨在为再生医学的深入研究和应用提供更安全便利的细胞源。首先,构建了两种多顺反子质粒载体pIRES2-OSKM-EGFP和pIRES2-OS-EGFP。以分别实现四因子和两因子多顺反子质粒载体转染人ADSCs的目标。先以重迭PCR方法将酶切位点(EcoR I、SaL l和BamH I)与具有自我剪切功能的2A元件(P2A、T2A和E2A)序列插入至Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc基因序列之间；再将各个基因片段连接(Oct4-P2A-Sox2-T2A-Klf4-E2A-c-Myc, OSKM)构建成单个开放阅读框(open reading frame, ORF);最后以双酶切、连接的方式插入pIRES2-EGFP质粒载体,构建成携带四因子的多顺反子质粒载体pIRES2-OSKM-EGFP.随后以Nhe I酶切pIRES2-OSKM-EGFP作为模板,利用PCR方法克隆Oct4-P2A-Sox2片段,再以重迭PCR方法在Oct4-P2A-Sox2序列两端添加酶切位点Nhe I和Sac I,然后以双酶切、连接的方式插入pIRES2-EGFP质粒载体,构建成携带Oct4和Sox2两个基因的多顺反子质粒载体pIRES2-OS-EGFP。经过设计特异引物进行PCR反应和测序鉴定,证实所构建的两种多顺反子质粒载体序列正确。因此,本实验成功采用2A元件构建了两种质粒载体pIRES2-OSKM-EGFP和pIRES2-OS-EGFP。然后,先使用构建的四因子多顺反子质粒pIRES2-OSKM-EGFP载体转染人ADSCs,在无饲养层细胞条件下将其重编程为iPSCs。首先分离培养ADSCs,将传代培养至第四代的ADSCs用pIRES2-OSKM-EGFP质粒载体转染一次,间隔4天后进行第二次转染。光学显微镜下观察,在转染后的3～4周,当有明显的细胞克隆出现时,将集落边缘界限清晰的细胞克隆进行挑取,并分离传代培养与鉴定。对重编程细胞的相关检测结果表明：细胞克隆的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AP)表现为阳性；定量RT-PCR检测内源性多潜能相关基因Oct4、Sox2、 Klf、 c-Myc和TERT的mRNA呈高水平表达；免疫荧光细胞化学显示其表达多能性标志蛋白分子Oct4、 Nanog、TRA-1-60和SSEA4;细胞保持正常核型。更重要的是,Southern blot检测结果表明,无质粒载体序列插入／整合到iPSC基因组中。此外,体外分化实验证实可形成拟胚体(embryonic bodys, EBs)并具有分化成叁胚层细胞类型的能力；体内分化实验则表明,该细胞可形成畸胎瘤并具有分化形成叁个胚层组织的能力。因此,本实验成功使用多顺反子质粒载体转染了ADSCs,并将其重编程为iPSCs;经过细胞特异性标记基因检测和分化能力检测,证实iPSCs具有类似胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)的形态与功能。接着,使用仅携带两个多能性因子Oct4和Sox2的多顺反子质粒pIRES2-OS-EGFP载体转染ADSCs并将其重编程为具备多能性细胞特点与功能的iPSCs.先以pIRES2-OS-GFP质粒载体第一次转染ADSCs细胞,以转染当天计为向iPSCs诱导的第0天,在第7天后进行第二次转染。在含有4ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的干细胞培养液中培养传代,21天后逐步分离出集落边缘界限清晰的细胞克隆。高倍镜下集落中的单个细胞核较大,核质比例较高；细胞集落生长稳定,核型正常；AP检测其为阳性；免疫细胞化学检测细胞表达Oct4、Nanog、 TRA-1-60和SSEA4; RT-PCR检测其表达ESCs的标志基因。经体内体外分化实验,可分别检测到形成叁个胚层的EBs和畸胎瘤,并且无质粒载体序列插入／整合至iPSCs基因组中。上述实验结果显示,只采用多顺反子质粒载体携带Oct4和Sox2两个转录因子转染ADSCs,仍然可以使其重编程为iPSCs。最后,使用多顺反子质粒pIRES2-OSKM-EGFP载体重编程ADSCs获得多能性后,又进行了该细胞向神经细胞诱导分化的研究。先使用质粒载体对传代至第六代的ADSCs转染操作,以转染操作当天计为第0天。为达到更高转染效率,细胞培养4天后进行第二次转染。在第一次转染后的第7天,将原来的ADSCs生长培养基更换为添加G418药物的筛选培养基；一周后,更换为不含有G418药物的培养基。细胞进行药物筛选后继续培养。相关结果表明：经免疫荧光细胞化学检测,重编程细胞表达多能性蛋白标记Oct4、 Nanog、TRA-1-60、TRA-1-81和SSEA4; RT-PCR结果显示,细胞不仅表达多能性相关基因Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc,还表达ESCs多能性特异基因REX1和TERT;细胞核型正常,无质粒载体序列插入／整合到iPSCs基因组中。而且,将重编程的多能细胞培养在神经诱导分化培养基中,并经过3周的诱导培养后,细胞表达神经细胞相关蛋白标志分子Nestin、GFAP、TUJl、RIP和Nurrl。进而通过免疫细胞化学技术,在培养板中随机选取不同视野,计算了表达不同蛋白标志分子阳性细胞与总细胞数目比例,结果显示：GFAP70.5±8.0%(n=258)、 TUJ182.7±7.3%(n=266)、RIP60.4±5.2%(n=212)和Nurr173.6±9.2%(n=244).因此,本试验经过细胞形态和标志分子表达检测,成功诱导了ADSCs来源的多能细胞,并使其向神经细胞发生了分化。本研究分别构建多顺反子质粒载体pIRES2-OSKM-EGFP和pIRES2-OS-EGFP,在无饲养层细胞条件下分别重编程ADSCs获得iPSCs,提高了所产生的iPSCs的安全性。(本文来源于《大连理工大学》期刊2013-04-15）
武玉永,姚庆收,马立新[8]（2013）在《油菜叶绿体多顺反子双交换表达载体的构建(英文)》一文中研究指出[目的]构建甘蓝型油菜叶绿体多顺反子表达载体,以期为油菜叶绿体基因工程研究奠定基础。[方法]根据GenBank中已知的油菜叶绿体DNA序列AF267640和Z50868,设计两对引物,用PCR方法获得了两段甘蓝型油菜叶绿体DNA片段,分别命名为RbcL和ACCD。将这两段甘蓝型油菜叶绿体DNA同源片段克隆到质粒pMD18-T中得到质粒pHBM715,然后再将由壮观霉素抗性基因aadA、甘露聚糖酶基因man和绿色荧光蛋白基因gfp这3个基因串联的表达盒克隆到质粒pHBM715中,从而构建成甘蓝型油菜叶绿体多顺反子表达载体pHBM716,并将该载体在大肠杆菌中进行表达鉴定。[结果]通过平板定性分析对所构建的油菜叶绿体表达载体上的表达盒进行了功能鉴定,表明同一多顺反子的3个基因在大肠杆菌中均得到了表达。[结论]该研究成功构建了甘蓝型油菜叶绿体多顺反子表达载体,为油菜叶绿体基因工程研究奠定了基础。(本文来源于《Agricultural Science & Technology》期刊2013年03期）
常德,李开龙,潘春晓,郭英华,刘长庭[9]（2013）在《含热休克蛋白70和绿色荧光蛋白双顺反子慢病毒载体的构建与鉴定》一文中研究指出目的构建并鉴定人热休克蛋白70(Hsp70)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子慢病毒表达载体,以探索Hsp70对细胞保护作用的影响。方法通过基因重组技术将人Hsp70连接到含EGFP的慢病毒载体中,包装并收集病毒,感染人胰腺癌细胞系Aspc-1细胞后,通过荧光显微镜观察EGFP的表达,同时利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Westernblot)技术检测Hsp70基因的表达情况。结果酶切和测序鉴定Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体构建正确,包装病毒感染细胞后荧光显微镜观察到细胞发绿色荧光,RT-PCR和western blot检测均表明感染病毒后细胞Hsp70的表达量明显增加。结论成功构建了Hsp70-IRES-EGFP双顺反子慢病毒载体,为后续研究Hsp70的功能和作用机制奠定了一定的基础。(本文来源于《中华保健医学杂志》期刊2013年01期）
李文品,廖玉才,黄涛,李和平[10]（2012）在《油菜叶绿体多顺反子定点整合表达载体的构建》一文中研究指出根据拟南芥叶绿体基因组序列设计PCR引物,从我国甘蓝型油菜栽培品种F4叶绿体基因组中克隆了长度为1.5kb的trnI和trnA2个基因序列,核酸序列分析表明它们与拟南芥基因的同源性高达94%和99%,这两个克隆的油菜叶绿体基因组序列trnI和trnA被用于构建叶绿体定点整合表达载体。利用烟草叶绿体基因强启动子Prrn和终止子TpsbA,以及筛选标记基因aadA和目的基因HSA,构建了多顺反子表达盒Prrn-aadA-HSA-TpsbA,将表达盒置于油菜叶绿体trnI和trnA序列之间,最后构建成油菜叶绿体多顺反子定点整合表达载体pIPaHTA。酶切鉴定及序列分析证实,构建的表达载体具有预期的调控元件及结构,这为后期油菜叶绿体转化体系的建立奠定了基础。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2012年05期）
双顺反子载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了研究甘薯AGPase小亚基功能,创制高淀粉甘薯新材料,本研究构建了甘薯35S-IbAGPa1-NosT-35SIbAGPa2-NosT共表达载体.实验首先通过酶切连接的方法构建出中间载体pzp-35S-NosT,然后将分离得到的IbAGPa1和IbAGPa2 2个小亚基核苷酸片段分别与pzp-35S-NosT载体进行连接,从而得到35S-IbAGPa1-NosT和35S-IbAGPa2-NosT 2个表达框.随后,将扩增的目的基因35S-IbAGPa1-NosT的全长片段与已经构建好的pzp-35S-IbAGPa2-NosT载体通过In-fusion技术进行连接反应,最终获得双顺反子共表达载体.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双顺反子载体论文参考文献
[1].马玉珍,任宇,白红梅,王赛璐,云志中.人肝细胞再生增强因子双顺反子表达载体的构建及表达[J].内蒙古大学学报(自然科学版).2019
[2].唐维,李强,张允刚,后猛,闫会.甘薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基双顺反子共表达载体构建[J].江苏师范大学学报(自然科学版).2019
[3].李劲,刘琳.禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达[J].中南民族大学学报(自然科学版).2016
[4].陈中湘,刘晓蕾,刘丽莎,崔光晶,邬国军.含EGFP报告基因单顺反子HCV亚基因组复制子载体的构建和表达[J].中国病原生物学杂志.2014
[5].谢力.表达轮状病毒NSP4、VP7基因双顺反子腺病毒载体疫苗的构建及免疫效果研究[D].北京协和医学院.2014
[6].续宗耀,王英振,张海宁,吕成昱,周峰.人胰岛素样生长因子-1真核双顺反子表达载体pIRSES2-EGFP-hIGF-1的构建与鉴定(英文)[J].现代生物医学进展.2013
[7].曲鑫建.多顺反子质粒载体重编程脂肪间充质干细胞为诱导多能干细胞[D].大连理工大学.2013
[8].武玉永,姚庆收,马立新.油菜叶绿体多顺反子双交换表达载体的构建(英文)[J].AgriculturalScience&Technology.2013
[9].常德,李开龙,潘春晓,郭英华,刘长庭.含热休克蛋白70和绿色荧光蛋白双顺反子慢病毒载体的构建与鉴定[J].中华保健医学杂志.2013
[10].李文品,廖玉才,黄涛,李和平.油菜叶绿体多顺反子定点整合表达载体的构建[J].基因组学与应用生物学.2012
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