导读:本文包含了肝癌细胞株论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:肝癌,细胞,细胞株,蛋白,秦巴,凋亡,淋巴细胞。
肝癌细胞株论文文献综述
徐单单,王颖,陈素红[1]（2019）在《Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞株SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响观察》一文中研究指出目的探讨Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1增殖、凋亡及耐药基因表达的影响。方法将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A、B、C组,A组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L WH-4,B组分别加入0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L 17-AAG,C组加入等量生理盐水,培养48 h后,采用MTT法测算各组肝癌细胞SK-HEP-1增殖抑制率,并计算IC_(50)。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A1、B1、C1组,分别加入2.3μmol/L WH-4、2.6μmol/L 17-AAG及生理盐水,培养48 h后,采用BrdU法观察肝癌细胞SK-HEP-1增殖活性。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A2、B2、C2组,分别加入2.25μmol/L WH-4、2.80μmol/L 17-AAG、生理盐水,培养48 h后,采用软琼脂平板实验检测肝癌细胞SK-HEP-1克隆形成率,流式细胞术检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡率,采用Western blotting法检测肝癌细胞SK-HEP-1凋亡蛋白Bcl2、Bax、Bcl-xL。将肝癌细胞SK-HEP-1随机分为A3、B3、C3组,分别加入2.30μmol/L WH-4、2.65μmol/L 17-AAG及生理盐水。培养48 h后,采用qPCR法检测耐药基因ABCB1、ABCG2。结果 WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1有抑制作用,且呈浓度依赖性(R~2=0.647(48h),P均<0.05),IC_(50)为(2.35±0.25)μmol/L。与C1组相比,A1、B1组SK-HEP-1绿色荧光减弱。A2、B2组克隆形成率相比,P<0.05。与B2组比较,A2组细胞凋亡率升高(t=0.342,P<0.05),Bax蛋白相对表达量升高,B淋巴细胞瘤-2基因及Bcl-xL蛋白相对表达量降低。A3组ABCB1、ABCG2基因相对表达量低于B3组(t分别为-8.88、-13.00,P均<0.05)。结论 Hsp90抑制剂WH-4对肝癌细胞SK-HEP-1具有增殖抑制、诱导凋亡作用,同时可降低耐药基因的表达。(本文来源于《山东医药》期刊2019年33期）
张华耀,谭浪平,刘建平,苏正,韦金星[2]（2019）在《小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究》一文中研究指出目的了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响。方法实验分为5组:正常肝细胞(LO2)组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-cateninHepG2/ADM转染组;细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况;设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin;Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法观察各组对阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5-FU)、环磷腺苷(VCR)和奥沙利铂(OHP)的敏感性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM中抑制效率最高:78.86%(P<0.05),选其为Si-β-catenin;细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强,转染Si-β-catenin后荧光显着减弱;β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高,mRNA表达分别为:0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12(P<0.05),蛋白表达分别为:1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212(P<0.05);转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中,β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少,mRNA表达分别为:0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03(P<0.05),蛋白表达分别为:0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050(P<0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数(RI)分别为0.61、0.55、0.30、0.55,对化疗药物敏感性显着增强(P<0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率(28.05±0.35)%,较其他组明显增加(P<0.05)。结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活,其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1,Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路,并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性,增加凋亡。(本文来源于《岭南现代临床外科》期刊2019年05期）
王亚琪,郜文辉,曾普华[3]（2019）在《益气化瘀解毒方对Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞株干预研究》一文中研究指出目的:分析索拉非尼(Sorafenib)获得性耐药人肝癌QGY7702细胞株(QGY7702/Sorafenib)的生物学特性及益气化瘀解毒方对其的干预作用。方法:培养Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞株,观察该细胞的形态及生长规律,利用CCK-8法分析暴露前后细胞的增殖和药物对细胞毒性的差异,流式细胞术检测耐药细胞的生长周期及凋亡率,划痕实验检测耐药细胞株的迁移能力。结果:Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞株的耐药性成立,对Sorafenib的耐药性是亲代细胞的2.5倍,与类圆形QGY7702细胞比较,形态转变为梭形或多边形,生长缓慢,对Sorafenib的敏感性降低,凋亡率下降,迁移力增强(P<0.05);益气化瘀解毒方干预后可缩短耐药细胞周期,提高耐药细胞的凋亡率及死亡率,降低耐药细胞的迁移能力(P<0.05)。结论:靶向药物Sorafenib可诱导人肝癌QGY7702细胞耐药并引起耐药细胞的生物学性状改变,益气化瘀解毒方可拮抗Sorafenib耐药。(本文来源于《中医学报》期刊2019年10期）
杨明镇,赵逵[4]（2019）在《哇巴因对肝癌细胞株P-gp表达的影响研究》一文中研究指出目的研究哇巴因对肝癌细胞株P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法选用人肝癌Bel-7402细胞株,阿霉素(ADM)大剂量间断冲击法建立Bel-7402/ADM模型并设为耐药组,正常Bel-7402设为对照组。采用免疫印迹(WB)检测两组哇巴因干预前后P-gp表达水平。结果哇巴因干预前,耐药组P-gp表达水平为(72.68±0.07),对照组为(22.21±0.04);哇巴因干预后,耐药组P-gp表达水平为(20.61±0.04),对照组为(14.32±0.05);哇巴因干预后,两组P-gp水平均显着低于哇巴因干预前,差异有统计学意义(P<0.05);哇巴因干预前后耐药组P-gp水平均显着高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论哇巴因可有效下调肝癌细胞株P-gp的表达。(本文来源于《中国实用医药》期刊2019年24期）
程涛,姚远,张生,张向宁,张爱辉[5]（2019）在《长链非编码RNA TMCC1-AS1在人肝癌细胞株中的表达及对SMMC-7721细胞增殖迁移能力影响观察》一文中研究指出目的观察长链非编码RNA TMCC1-AS1在人肝癌细胞株中的表达及对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖、迁移能力的影响。方法采用qRT-PCR法检测人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、Huh-7和正常人肝细胞株HL-7702中TMCC1-AS1的表达。使用PowerFect试剂分别将TMCC1-AS1干扰RNA(siTMCC1-AS1)和阴性对照干扰RNA(siNC)转染至SMMC-7721细胞,分别记为沉默组和对照组,采用qRT-PCR法检测转染后两组细胞中TMCC1-AS1的表达水平;采用CCK-8法检测转染后两组细胞培养24、48、72、96 h时OD值(以OD值表示细胞增殖能力);采用流式细胞术检测转染后两组细胞周期,比较处于不同周期的细胞比例;采用Transwell小室法检测转染后两组细胞迁移数量(以迁移细胞数表示细胞迁移能力)。结果人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、Huh-7和正常人肝细胞株HL-7702中TMCC1-AS1相对表达量分别为3.450±0.309、5.340±0.535、4.270±0.252和1.000±0.068,人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721、Huh-7中TMCC1-AS1相对表达量与正常人肝细胞株HL-7702相比,P均<0.01。沉默组SMMC-7721细胞中TMCC1-AS1相对表达量为0.34±0.11,对照组为1.00±0.04,两组相比,P<0.01。沉默组培养24、48、72、96 h时的OD值分别为0.316±0.028、0.402±0.033、0.726±0.065、0.934±0.073,对照组培养24、48、72、96 h时的OD值分别为0.362±0.031、0.613±0.048、1.025±0.083、1.384±0.115,两组相比,P均<0.05。沉默组G_0/G_1期、S期细胞比例分别为62.6%±3.7%、20.4%±1.8%,对照组G_0/G_1期、S期细胞比例分别为54.4%±3.9%、26.5%±1.9%,两组相比,P均<0.01。沉默组与对照组细胞迁移数量分别为(112±11)个和(188±13)个,两组相比,P<0.01。结论 TMCC1-AS1在人肝癌细胞株中表达上调;沉默TMCC1-AS1可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖和迁移能力。(本文来源于《山东医药》期刊2019年24期）
李娟,袁作辉,杨帆,王倩凤[6]（2019）在《秦巴硒菇提取物对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的调节作用的实验研究》一文中研究指出目的探究秦巴硒菇提取物对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及机制。方法用不同浓度秦巴硒菇提取物处理细胞,MTT检测细胞活性,流式检测细胞凋亡,用PCR和Westernblot检测P53/Caspase通路蛋白表达情况。结果根据预实验结果,选择秦巴硒菇提取物(0,0.5,1.0,2.0,4.0μg/mL)作用24 h、48 h以及72 h后对肝癌SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,并随时间和浓度的作用梯度增加抑制作用也明显增强。根据流式细胞分析检测结果显示,不同浓度秦巴硒菇提取物作用于人肝癌SMMC-7721细胞24 h后细胞凋亡率明显高于对照组(0μg/mL),随秦巴硒菇提取物浓度增加细胞凋亡率明显增高。另外递增浓度的秦巴硒菇提取物可促进人肝癌SMMC-7721细胞通路蛋白P53、Caspase3及Caspase9蛋白的表达。结论秦巴硒菇提取物能抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖从而促进细胞凋亡,其机制可能与诱导P53/Caspase信号通路激活有关。(本文来源于《卫生职业教育》期刊2019年16期）
黄松梅[7]（2019）在《罗哌卡因对人肝癌Sk-hep-1细胞株增殖抑制作用和凋亡的机制研究》一文中研究指出背景:近年来研究表明局麻药通过不同机制发挥抗肿瘤作用。罗哌卡因是一种新型长效的酰胺类局部麻醉药,一般用于局部浸润麻醉、椎管内麻醉、区域神经阻滞及术后镇痛。随着局麻药抗肿瘤作用的研究深入,罗哌卡因的抗肿瘤作用越来越引起学者的研究兴趣。目的:观察罗哌卡因对人肝癌Sk-hep-1细胞株增殖和凋亡的影响并探讨其抗肿瘤作用机制。方法:实验利用MTT法检测对照组,400μM,800μM,1200μM罗哌卡因处理人肝癌Sk-hep-1细胞株和人正常肝细胞L-02细胞株24h后,观察细胞毒性作用;选择400μM,800μM,1200μM罗哌卡因处理人肝癌Sk-hep-1细胞株24h,48h和72h后观察细胞存活率变化;不同浓度的罗哌卡因(400μM,800μM,1200μM)作用于人肝癌Sk-hep-1细胞24 h后,应用DAPI核染色法,观察人肝癌Sk-hep-1细胞发生凋亡时形态学变化;400μM,800μM,1200μM罗哌卡因处理人肝癌Sk-hep-1细胞24h后,蛋白免疫印迹法检测罗脉卡因对Cleaved caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bcl-2、Bax、Cyt-c等调亡相关蛋白表达的影响。结果:(1)MTT实验结果显示400μM,800μM,1200μM罗哌卡因无细胞毒性作用,对正常肝细胞存活率无明显影响(P>0.05)。与对照组比较,400μM,800μM,1200μM罗哌卡因作用于人肝癌Sk-hep-1细胞24 h,48 h和72 h后均能明显抑制细胞存活率(P<0.05,P<0.01,P<001),处理24 h罗哌卡因的IC50值为1303μM,但处理不同时间点同浓度比较无统计学意义(P>0.05)。(2)与对照组比较,400μM,800μM,1200μM罗哌卡因干预24h后,人肝癌Sk-hep-1细胞核出现萎缩、碎裂、核边集等细胞凋亡形态变化。(3)不同浓度罗哌卡因作用于人肝癌Sk-hep-1细胞24h后,与对照组相比,细胞凋亡相关因子Bax、Cleaved caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cyt-c等蛋白表达水平明显上调(P<0.01),而细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2表达水平明显下降(P<0.01),变化趋势呈现一定的浓度依赖关系。结论:(1)罗哌卡因对人肝癌细胞株Sk-hep-1有显着的生长抑制作用,该生长抑制作用与罗哌卡因诱导肝肿瘤细胞凋亡有关。(2)罗哌卡因诱导凋亡的机制可能与激活线粒体介导的凋亡通路诱导Sk-hep-1细胞凋亡有关。(本文来源于《延边大学》期刊2019-05-25）
许佐明[8]（2019）在《AKT对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长及HIF-1α信号通路影响的研究》一文中研究指出目的:建立人肝癌细胞SMMC-7721模型,研究与分析敲低AKT或/和HIF-1表达对HIF-1α或/和AKT蛋白表达水平及肝癌细胞增殖、凋亡的影响,探讨AKT在HIF-1α信号通路中的可能作用机制。方法:培养SMMC-7721人肝癌细胞株,随机分为5组:空白对照(BC)组、阴性对照(siRNA-NC)组、HIF-1敲低(HIF1-siRNA)组、AKT敲低(AKT-siRNA)组和HIF-1与AKT共同敲低(HIF1-AKT-siRNA)组。采用RNA干扰技术对细胞进行感染实验,进而构建AKT或/和HIF-1低表达的细胞模型。BC组细胞不予感染慢病毒,siRNA-NC组细胞用阴性对照慢病毒感染,HIF1-siRNA组用HIF-1 siRNA重组慢病毒感染,AKT-siRNA组用AKT siRNA重组慢病毒感染,HIF1-AKT-siRNA组用HIF-1 siRNA和AKT siRNA两种重组慢病毒感染。稳定表达后,用倒置荧光显微镜观察感染效率;细胞增殖抑制率使用CCK-8技术进行上机检测;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;并运用Western blot技术测定HIF-1α及AKT蛋白的表达状况。最后根据所得数据的类型和分布情况选用合适的统计学方法进行处理分析。结果:实验组感染效率均达到90%以上。细胞增殖抑制率比较:siRNA-NC组(2.8±1.0)稍高于BC组(0),差异无统计学意义(P>0.05);HIF1-siRNA组(51.0±1.3)、AKT-siRNA组(43.3±1.4)和HIF1-AKT-siRNA组(57.6±1.3)显着高于siRNA-NC组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-siRNA组高于AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-AKT-siRNA组高于HIF1-siRNA组和AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞凋亡水平比较:siRNA-NC组(11.51±0.25)稍高于BC组(10.79±0.26),差异无统计学意义(P>0.05);HIF1-siRNA组(54.83±.027)、AKT-siRNA组(21.81±0.24)和HIF1-AKT-siRNA组(62.83±0.26)显着高于siRNA-NC组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-siRNA组高于AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-AKT-siRNA组高于HIF1-siRNA组和AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α蛋白表达水平比较:siRNA-NC组(1.14±0.028)稍高于BC组(1.08±0.048),差异无统计学意义(P>0.05);HIF1-siRNA组(0.42±0.021)、AKT-siRNA组(0.92±0.019)和HIF1-AKT-siRNA组(0.27±0.018)显着低于siRNA-NC组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-siRNA组低于AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-AKT-siRNA组低于HIF1-siRNA组和AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。AKT蛋白表达水平比较:siRNA-NC组(1.20±0.021)稍低于BC组(1.23±0.020),差异无统计学意义(P>0.05);HIF1-siRNA组(0.84±0.018)、AKT-siRNA组(0.65±0.018)和HIF1-AKT-siRNA组(0.52±0.025)显着低于siRNA-NC组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-siRNA组高于AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05);HIF1-AKT-siRNA组低于HIF1-siRNA组和AKT-siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:敲低HIF-1、AKT表达均可抑制人肝癌细胞系SMMC-7721增殖,促进细胞凋亡。HIF-1可能是肝癌细胞生长的首要因子。AKT与HIF-1之间存在双向的网络调控关系,敲低AKT表达可降低HIF-1α翻译水平,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。相反,敲低HIF-1亦可下调AKT表达水平,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡;同时敲低AKT和HIF-1可发挥协同作用,抑制肝癌细胞增殖,促进细胞凋亡。(本文来源于《右江民族医学院》期刊2019-05-19）
赵参军,黄晓峰[9]（2019）在《异甘草素抑制人肝癌细胞株HepG-2增殖的机制探讨》一文中研究指出【目的】观察异甘草素对人肝癌细胞株Hep G-2增殖的抑制作用,探讨相关分子机制。【方法】取人肝癌细胞株Hep G-2,分成5组分别给予低(LD组,0.025 mg/ml)、中(MD组,0.1 mg/ml)、高(HD组,0.4 mg/ml)3个浓度异甘草素,空白对照组(BC组)予等量PBS缓冲液、阳性对照组(PC组)给予10μg/ml氟尿嘧啶,每组设5个复孔。光镜观察各组72 h后各组细胞形态学变化;MTT法检测各组24、48、72 h后增殖抑制率;流式细胞仪检测各组72 h后细胞周期分布;RT-q PCR检测各组磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)m RNA表达;Western blotting检测各组PI3K、Akt蛋白、pPI3K、p-Akt表达,计算p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值。【结果】BC组细胞形态规则、结构完整、染色质呈均匀分布;其余4组均有典型的边界不清、细胞膜破坏、细胞核固缩、染色质不均匀分布表现,其中HD组细胞形态学改变最严重,MD组稍优于HD组,且与PC组相近,LD组优于MD组和PC组,且与BC组最为接近;LD组24、48、72 h后增殖抑制率均低于PC组,HD组均显着高于PC组,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC组比较,其余4组G0/G1期均下降(P<0.05),G2/M均升高(P<0.05),3剂量组均呈剂量依赖性,且LD组G0/G1期高于PC组(P<0.05),G2/M期低于PC组(P<0.05);HD组G0/G1期低于PC组(P<0.05),G2/M期高于PC组(P<0.05);各组间S周期对比差异无统计学意义(P>0.05);5组PI3K、Akt m RNA表达差异均无统计学意义(P>0.05);与BC组比较,其余4组p-PI3K、p-Akt、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Ak均下降(P<0.05),且3剂量组呈剂量依赖性,LD组pPI3K、p-Akt、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Ak均高于PC组(P<0.05),HD组均低于PC组(P<0.05)。【结论】异甘草素能够促进人肝癌细胞株细胞形态学改变,抑制增殖,细胞处于G2/M期,且抗肿瘤增殖作用呈剂量依赖性,0.1 mg/ml异甘草素的效果与10μg/ml氟尿嘧啶的效果相近,其作用机制与抑制PI3K、Akt蛋白磷酸化有关。(本文来源于《武警后勤学院学报(医学版)》期刊2019年05期）
王磊[10]（2019）在《MicroRNA-198在原发性肝癌患者中的表达及对肝癌细胞株增殖、迁移的研究》一文中研究指出研究背景及目的原发性肝癌(HCC)在我国癌症发生率中位列第四,居恶性肿瘤导致人类死亡的第二位。由于缺乏明确的早期诊断标志物、特异性的临床症状等,肝癌患者确诊时通常已是晚期,大多数患者失去了手术机会,总的5年生存期很短。因此,研究影响肝癌的诱发因素及侵袭和转移的过程,进而研发肝癌治疗药物是现在研究重点。任何人体细胞的诱导分化、成熟均依靠人体细胞增殖迁移与凋亡平衡的过程,一旦这种均衡被破坏后就会引起各种疾病的出现或恶性肿瘤的发生,特别是人体细胞的增殖程度和恶性肿瘤的诱发及其侵袭转移有直接关系。MicroRNA(miRNA)是一类高度保守的长度为21-25nt的单链内源性非编码RNA小分子片段,通过特异性序列转录翻译或mRNA分裂来指导基因的表达,进而参与人体细胞发生、诱导、增值和自然凋亡等过程。人类从世界上第一个miRNA出现之后,众多的miRNA被研究,目前已发现的成熟体miRNA已大于2500个,大概调控人体内部1/3以上的编码基因。人体原发性肝癌的诱发是由多个抑癌基因下调、原癌基因激活及一系列调控机制导致的复杂过程。由于编码基因转录水平的调控失衡,出现组织细胞异常克隆性增生诱导肝癌。在人体原发性肝癌的生长、发展进程期间,miRNA通过抑癌基因活性下调,诱导正常细胞向异常细胞转变,或将细胞分化降低和抑制凋亡基因进而使异常细胞无节制生长;有些miRNA也可起到抑癌基因作用,抑制原癌基因和转移增值相关基因等作用,进而起到抑制肝癌细胞增殖和迁移过程。同时,miRNA通过大量调控基因的表达而起到作用,进而使细胞活动的各个方面进行调控,主要在细胞迁移、增殖、凋亡等不同的的生理、病理过程。因此miRNA对于人体正常肝细胞的异常转变、侵袭及迁移等多种病理生理进程期间起着重要的地位。近期的研究发现,人类microRNA中有一半位于与癌症相关的位点,这些定位提示microRNA可能与肿瘤的发生有关。很多学者研究显示,多个microRNA与肿瘤的发生、病理分级、临床分期、肿瘤的耐药性及预后等相关,若干microRNA直接参与肿瘤(包括前列腺癌,胰腺癌,肺癌,结肠癌等)各种进展过程。而且miRNAs在人体内一部分可成为抑癌因子,一部分可成为促癌因子,这些双重作用引导大量研究者在这些层面进行基础性的探索。大量的资料显示,一类特殊的小RNA在HCC里面发生转录改变,进而导致肝癌出现异常的表达过程。近期研究表明有多个miRNAs在肝细胞癌中是高表达的,包括miR-181,miR-21,miR-324,miR-186,miR-155等。另外,有部分miRNAs在肝细胞癌中低表达的,它们分别是:miR-139,miR-198,miR-199a-3p,miR-199a-5p,miR-195,miR-34a等。MicroRNA-198是miRNAs家族的重要一分子。有资料显示miR-198在前列腺癌、结肠癌及胰腺癌、肺癌等肿瘤中是低表达或无表达的。但是在肝癌中的情况还不甚明确。因此,我们研究团队猜测可能miR-198在HCC的诱导及进展中有重要影响。结合以上文献资料,本课题对miR-198在不同的肝癌细胞株及肝癌组织进行检测,研究miR-198的表达水平与HCC病人的生存期关联;然后运用体内外实验对miR-198在肝癌Huh7细胞株的增殖和侵袭进行测定;最后运用Western Blot方法对miR-198运用生物信息学预测的靶基因ZEB2行进一步验证。本研究具体为以下叁部分:第一部分miR-198在不同肝癌细胞株及肝癌组织的表达及与肝癌生存期关系方法1首先运用Real-time PCR测定肝癌不同细胞株和肝癌组织中MicroRNA-198的情况;2解析miR-198表达水平同肝癌患者临床资料及预后之间的关联。结果1与正常肝细胞chang liver和LO2相比,miR-198在肝癌细胞HepG2、Huh7、Hep3B和MHCC97H细胞中表达下调,其中Huh7细胞中表达最低;2 65例肝癌患者组织标本中,miR-198的表达水平在肿瘤分化程度(高、中、低)、TNM分期(ⅠⅡ、ⅢⅣ)、有无脉管癌栓、有无血管受侵、有无包膜受侵及有无远处转移等均有明显差异,且与对应的癌旁组织表达相比降低;miR-198表达水平与肝癌患者生存时间长短密切相关,呈正相关性。小结miR-198在HepG2、Huh7、Hep3B和MHCC97H细胞中的表达水平低下,且在临床HCC患者标本与其对应的癌旁正常肝组织对比,miR-198的表达水平也呈下降趋势;miR-198的表达水平与HCC患者不良预后临床参数负相关,且与患者的生存时间呈正相关,提示miR-198是肝癌患者一种负性调节因子,同患者生存期呈正相关性。第二部分探讨miR-198在肝癌Huh7细胞株中的生物学功能方法1在体外用miR-198模拟物(mimics)转染Huh7细胞;2运用流式细胞术检测miR-198对Huh7细胞凋亡影响;3通过CCK8实验、软琼脂克隆形成实验检测miR-198对Huh7细胞增殖能力的影响;4运用划痕实验、Transwell实验检测miR-198对Huh7细胞迁移功能影响;5体内裸鼠成瘤实验检测miR-198对Huh7细胞体内成瘤能力的影响。结果1流式细胞仪检测发现miR-198促进Huh7细胞凋亡;2 CCK8实验、软琼脂克隆形成实验与对照组比较,肝癌Huh7细胞株在转染miR-198 mimics显示,Huh7细胞株增殖情况显着降低;3划痕实验及Transwell实验都证实,miR-198能够抑制肝癌Huh7细胞株的迁移功能;4裸鼠动物体内实验结果显示:转染miR-198的Huh7细胞的成瘤功能显着受到下调。小结本阶段实验显示miR-198可以下调肝癌Huh7细胞株增殖迁移功能,增加Huh7细胞的凋亡比例;而且miR-198可以下调肝癌Huh7细胞株的增殖和成瘤功能,显示miR-198对肝癌细胞的增殖和迁移起到抑制功能。第叁部分miR-198靶基因预测及初步功能鉴定方法1利用生物信息学的方法对miR-198的靶基因进行了初步预测;2双荧光素酶报告系统验证miR-198直接靶向的基因;3运用Real time PCR及Western Blot检测NC、转染miR-198后Huh7细胞中ZEB2的表达水平;4利用RNA干扰技术沉默ZEB2的表达,运用Transwell实验检测其对Huh7细胞迁移能力;5分析miR-198和ZEB2在肝癌组织中的表达相关性。结果1利用生物信息学的方法初步明确ZEB2为miR-198的靶基因;2通过双荧光素酶报告系统,我们发现miR-198可以显着降低含有ZEB23’UTR-WT序列的报告基因载体的荧光素酶相对活性,提示miR-198可以直接靶向ZEB2;3 Real time PCR及Western Blot示ZEB2在肝癌组织表达与对应的癌旁组织对比显着升高;转染miR-198组、siZEB2组后ZEB2的表达明显下降;4 Transwell实验结果示miR-198 mimics组及Si-ZEB2组的迁移细胞数显着减少;5 miR-198和ZEB2在肝癌组织中的表达呈负相关性。小结本部分实验结果表明,ZEB2是miR-198的目标基因,miR-198是借助调节靶基因ZEB2的表达,进而调控肝癌Huh7细胞株的增殖和迁移;miR-198可通过抑制ZEB2的表达,从而抑制了Huh7细胞的迁移功能。结论本研究结果表明miR-198在肝癌组织及肝癌细胞中的表达水平低下,且其表达高低与肝癌的发展作用密切,呈负性调节关系。而且通过双荧光素酶报告系统证实miR-198靶基因为ZEB2,通过抑制ZEB2的表达进而抑制HCC的增殖、迁移。miR-198有可能成为肝癌的新的生物标志物,为我国肝癌患者的诊断、预后提供新的治疗途径。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
肝癌细胞株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响。方法实验分为5组:正常肝细胞(LO2)组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-cateninHepG2/ADM转染组;细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况;设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin;Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法观察各组对阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5-FU)、环磷腺苷(VCR)和奥沙利铂(OHP)的敏感性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM中抑制效率最高:78.86%(P<0.05),选其为Si-β-catenin;细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强,转染Si-β-catenin后荧光显着减弱;β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高,mRNA表达分别为:0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12(P<0.05),蛋白表达分别为:1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212(P<0.05);转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中,β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少,mRNA表达分别为:0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03(P<0.05),蛋白表达分别为:0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050(P<0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数(RI)分别为0.61、0.55、0.30、0.55,对化疗药物敏感性显着增强(P<0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率(28.05±0.35)%,较其他组明显增加(P<0.05)。结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活,其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1,Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路,并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性,增加凋亡。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肝癌细胞株论文参考文献
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