导读:本文包含了农杆菌介导的瞬时表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:根癌农杆菌,大豆遗传转化,转化率,GUS基因瞬时表达
农杆菌介导的瞬时表达论文文献综述
杨明明,高海京,马啸燕,孙英楠,邵宇鹏[1]（2019）在《利用GUS基因的瞬时表达优化大豆根癌农杆菌介导的遗传转化》一文中研究指出高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、切豆方法、侵染时间、共培养方式以及共培养时间等方面对东农47、垦农18和B12088大豆栽培品种的遗传转化体系进行优化。结果表明:东农47萌发1 d,侵染30 min;垦农18和B12088萌发12 h,侵染30 min,GUS基因瞬时表达率最高。在其它的处理上,3个品种表现结果一致,即蘸取菌液切豆,共培养中子叶伤口朝下摆放,黑暗条件下共培养3～5 d,GUS基因瞬时表达最高。3个品种在最适条件下,GUS染色效率均达到90%以上,垦农18遗传转化效率较高。本研究为大豆农杆菌介导子叶节转化方法提供了一个改进的方案,并且为拓宽可利用于大豆遗传转化的种质资源奠定基础。(本文来源于《大豆科学》期刊2019年03期）
陈思涵,钱靖,彭杰军,鲁宇文,郑红英[2]（2018）在《农杆菌介导的外源基因在本氏烟中瞬时表达体系优化研究》一文中研究指出为提高外源蛋白的表达量及稳定性,期望通过RNA、蛋白水平的研究,制定一套高效的外源蛋白表达体系。通过共表达沉默抑制子、添加定位信号、沉默自噬关键基因atg5,分析各处理对植物外源蛋白表达的影响。结果表明:共表达植物病毒沉默抑制子p25或HC-Pro抑制mRNA降解速率,提高外源蛋白表达水平;外源蛋白增加内质网定位信号,可提高蛋白的持续表达能力;瞬时沉默自噬途径关键基因atg5,有利于外源蛋白的积累。外源蛋白表达过程中对易降解的外源蛋白,通过添加定位信号并结合使用沉默抑制子、自噬途径缺陷植株,可作为提高外源蛋白表达量及稳定性的新策略。(本文来源于《西南林业大学学报(自然科学)》期刊2018年04期）
韩林林,李俊华,赵喜亭,张晓丽,宋志辉[3]（2016）在《农杆菌介导的怀山药叶片瞬时表达方法的建立》一文中研究指出高效的瞬时表达体系是方便、快捷的研究怀山药基因启动子活性、基因功能和生产重组蛋白的新途径.本研究选取怀山药叶片为受体,以β-葡糖醛酸酶(GUS)和绿色荧光蛋白(GFP)的基因为报告基因,对共培养时间进行分析,得到二者瞬时表达的最初时间以及较佳观察时间,建立根癌农杆菌介导的怀山药瞬时表达技术体系.结果显示:当注射的菌液浓度OD600=0.6,共培养3d时,GUS基因和GFP基因开始有表达,二者适于观察的共培养时间分别为5d和4d.(本文来源于《河南师范大学学报(自然科学版)》期刊2016年06期）
霍琳,及晓宇,王玉成[4]（2016）在《农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化》一文中研究指出以整株烟草为试材,用转入植物表达载体p CAMBIA1301的根癌农杆菌EHA105进行遗传转化。通过分析不同菌液浓度、乙酰丁香酮浓度、Tween20浓度、蔗糖浓度、不同侵染时间及有无激素对GUS基因表达的影响,研究其瞬时表达的最佳条件。结果显示:用OD600值为0.2的农杆菌侵染3 h,在1/2 MS培养基中添加120μmol/L的乙酰丁香酮,1.5 mg/L的KT,0.5 mg/L的NAA,3%的蔗糖,共培养3 d,能够得到高效的GUS基因瞬时表达。(本文来源于《分子植物育种》期刊2016年01期）
梁童瑶[5]（2015）在《农杆菌介导的瞬时表达系统在烟草、丹参、夏枯草中的建立》一文中研究指出遗传转化一直以来都是研究药用植物次生代谢物调控的重要手段。其中,稳定转化具有重现性好的优势。但是,获得稳定转化的毛状根体系或转基因植株往往费时费力,无法满足大量药用植物次生代谢调控相关基因的研究需求。农杆菌介导的瞬时转化以其易操作、低成本、短周期的优势,已被广泛应用于植物功能基因的研究中。然而目前,药用植物的功能基因研究还常使用稳定遗传转化,或一些高成本、高难度的瞬时转化方法(如基因枪、原生质体转化等)。因此,本研究试图在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)和药用植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)、夏枯草(Prunella vulgaris L.)中,建立农杆菌介导的瞬时转化体系,为丹参、夏枯草功能基因的进一步研究提供新的方法与参考。本研究以本氏烟草、丹参、夏枯草为材料,尝试建立农杆菌介导的病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系;利用pEAQ载体高效表达次生代谢合成相关基因,异源构建次生代谢合成途径;构建农杆菌介导的幼苗瞬时转化体系。主要得到了以下结论:(1)本试验中,VIGS体系未能在丹参中成功建立。这可能与介导的农杆菌株、菌液侵染浓度、植物材料的生长状态、构建载体病毒株系及植物对病毒的防御机制等因素有关;从丹参的病样叶片中成功鉴定出黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV),为丹参中病毒沉默载体的构建及进一步研究提供了材料与依据。(2)通过pEAQ载体在本氏烟草叶片中高效表达了一个或多个外源基因。这为在烟草中快速有效的表达外源基因,并进一步探究其功能提供了有力方法。多个外源基因的高效共表达也为在本氏烟草中异源构建次生代谢途径提供了可能。(3)农杆菌介导的瞬时转化体系在不同的植物幼苗材料中有着不同的侵染效率。在本试验中,以丹参作为材料在农杆菌介导的VIGS、pEAQ载体的瞬时转化及幼苗瞬时转化这几种瞬时体系中都没能成功。这可能与丹参对外源基因的瞬时表达防御机制有关。夏枯草与烟草幼苗的瞬时转化结果也暗示,这种植物幼苗瞬时侵染效率的差异可能与幼苗个体大小差异与组织致密性等原因有关。(4)利用“FAST+机械损伤”的方法,初步建立了夏枯草幼苗瞬时遗传转化体系,为夏枯草中功能基因的研究提供了有效手段。但是,该体系在胁迫相关的功能基因研究中并不适用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
孙春莲,王洪洋,田振东[6]（2015）在《农杆菌介导的pCB302-3载体在本氏烟中瞬时表达条件优化》一文中研究指出以GFP为报告基因构建植物表达载体pCB302-3-GFP,采用农杆菌叶片注射法对其在本氏烟叶片中瞬时表达条件进行优化。分析基因沉默抑制子p19、菌液不同浓度以及侵染时间对GFP荧光强度的影响,结果显示,当农杆菌菌液D600为0.8~1.0并与含有p19基因的载体共注射条件下,农杆菌注射3~5d后本氏烟草叶片表现出很强的绿色荧光,实现了GFP在本氏烟草中的高效瞬时表达。(本文来源于《华中农业大学学报》期刊2015年03期）
张大燕,贾凌,向仲怀,何宁佳[7]（2015）在《农杆菌介导的桑树瞬时表达体系构建及miRn51与其靶基因的表达分析》一文中研究指出微小RNA(miRNA)是一类内源性非编码的单链小RNA,对植物的生长发育起着重要调控作用。建立高效的桑树瞬时表达体系是研究桑树miRNA及其靶基因功能的有效手段。将川桑(Morus notabilis)基因组中克隆的miRn51前体序列连接到PLGNL载体上,构建了PLGNL-35S-miRn51重组质粒,通过农杆菌介导其在桑树叶片中瞬时表达。采用GUS组织化学染色、多酚氧化酶活性检测以及荧光定量PCR等方法,分析不同缓冲液、重组农杆菌注射菌液浓度、转化时间、桑树品种等试验条件对农杆菌介导的桑树叶片瞬时表达体系转化效率、miRn51及靶基因表达水平的影响,当采用1号缓冲液和菌液D(600 nm)=0.6的重组农杆菌进行瞬时转化时,转化桑树叶片3 d后miRn51的表达量最高,其靶基因Mn PPO2的表达水平受到明显抑制,不同桑树品种对瞬时表达体系的瞬时表达效率有一定影响。以上结果表明,建立的农杆菌介导的桑树瞬时表达体系能简便、有效、快捷地验证桑树miRNA对其靶基因的调控作用。(本文来源于《蚕业科学》期刊2015年01期）
孙蔓莉,孟玉玲,张强,黄桂艳,单卫星[8]（2015）在《农杆菌介导的烟草瞬时表达影响因素研究》一文中研究指出通过探究根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的烟草瞬时表达体系的影响因素,确定烟草瞬时表达的最佳条件,为目的基因的功能研究提供技术支持。利用马铃薯晚疫病抗性基因RB和致病疫霉菌效应基因Avrblb 1作为报告基因,采用农杆菌介导的注射渗透法,摸索农杆菌菌悬液OD600值和菌系(遗传背景)、烟草品种及其生长时期等因素,确定烟草高效的基因瞬时表达条件。研究结果表明:介导烟草基因瞬时表达的根癌农杆菌菌悬液适宜OD600值为0.3~0.8;在菌悬液OD600值为0.1及以上时,AGL1、GV3101和C58C1介导的报告基因瞬时表达效率相似,均引发较强的叶片坏死反应;在农杆菌菌悬液OD600值小于0.1时,AGL1介导的瞬时表达效率最高。测试的烟草品种都具备较高的瞬时表达效率,苗龄6~8周的烟草适合分析。通过测试农杆菌菌悬液OD600值和菌系(遗传背景)、烟草品种及其生长时期等因素,确定本氏烟和普通烟均可实现基因高效瞬时表达的条件。(本文来源于《西北农业学报》期刊2015年01期）
刘雪梅,王蕾,文添龙,何鹏,俞嘉宁[9]（2014）在《农杆菌介导的棉花子叶瞬时表达系统的建立》一文中研究指出植物瞬时表达系统在研究功能基因的亚细胞定位、蛋白质互作、启动子活性等方面具有重要作用。选取棉花(Gossypium hirsutum)子叶为材料,以β-葡糖醛酸酶基因(GUS)、增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)为报告基因,对棉花子叶生长时间、农杆菌浓度、注射量、共培养时间等因素进行了分析,建立了农杆菌介导的棉花子叶瞬时表达系统。结果表明,对萌发6天的棉花子叶注射50μLOD600为0.5的含目的基因的农杆菌LBA4404或GV3101,共培养2–3天后,外源基因表达效率最高。利用此方法从棉花萌发到观测结果,仅需8–13天,且操作简单易行,可快速检测棉花来源的启动子活性、亚细胞定位、蛋白质互作等。该方法在棉花基因功能研究方面有很好的应用价值。(本文来源于《植物学报》期刊2014年05期）
王磊,陈雯,刘娅,杨若韵,阴霞[10]（2014）在《月季花瓣中农杆菌介导的基因瞬时表达体系的优化及其在RNAi中的应用》一文中研究指出在植物中通过农杆菌介导的基因瞬时表达和基于RNAi的基因沉默可便捷高效地研究基因功能。本研究采用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)注射侵染法,利用GUS作为报告基因,探讨了月季(Rosa hybrida)品种、农杆菌菌株、开花级别、花瓣位置、农杆菌侵染浓度和侵染液成分等因素对月季花瓣中基因瞬时表达效果的影响。结果表明,月季品种蜜糖3级切花的中层花瓣中瞬时表达效果最佳;农杆菌菌株GV3101介导的瞬时表达效果最好,侵染浓度以OD600=0.9为宜,添加10 mmol/L MgCl2及10 mmol/L MES的侵染液效果优于重蒸水。同时,利用上述优化瞬时表达体系进行RNAi沉默,成功抑制了外源报告基因GUS和内源基因RhSAG的表达。相比对照,RhSAG沉默花瓣的萎蔫速度较慢,说明衰老进程得到延缓。该体系的优化为月季花瓣中基因功能的鉴定提供了有效工具。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2014年02期）
农杆菌介导的瞬时表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为提高外源蛋白的表达量及稳定性,期望通过RNA、蛋白水平的研究,制定一套高效的外源蛋白表达体系。通过共表达沉默抑制子、添加定位信号、沉默自噬关键基因atg5,分析各处理对植物外源蛋白表达的影响。结果表明:共表达植物病毒沉默抑制子p25或HC-Pro抑制mRNA降解速率,提高外源蛋白表达水平;外源蛋白增加内质网定位信号,可提高蛋白的持续表达能力;瞬时沉默自噬途径关键基因atg5,有利于外源蛋白的积累。外源蛋白表达过程中对易降解的外源蛋白,通过添加定位信号并结合使用沉默抑制子、自噬途径缺陷植株,可作为提高外源蛋白表达量及稳定性的新策略。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
农杆菌介导的瞬时表达论文参考文献
[1].杨明明,高海京,马啸燕,孙英楠,邵宇鹏.利用GUS基因的瞬时表达优化大豆根癌农杆菌介导的遗传转化[J].大豆科学.2019
[2].陈思涵,钱靖,彭杰军,鲁宇文,郑红英.农杆菌介导的外源基因在本氏烟中瞬时表达体系优化研究[J].西南林业大学学报(自然科学).2018
[3].韩林林,李俊华,赵喜亭,张晓丽,宋志辉.农杆菌介导的怀山药叶片瞬时表达方法的建立[J].河南师范大学学报(自然科学版).2016
[4].霍琳,及晓宇,王玉成.农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化[J].分子植物育种.2016
[5].梁童瑶.农杆菌介导的瞬时表达系统在烟草、丹参、夏枯草中的建立[D].西北农林科技大学.2015
[6].孙春莲,王洪洋,田振东.农杆菌介导的pCB302-3载体在本氏烟中瞬时表达条件优化[J].华中农业大学学报.2015
[7].张大燕,贾凌,向仲怀,何宁佳.农杆菌介导的桑树瞬时表达体系构建及miRn51与其靶基因的表达分析[J].蚕业科学.2015
[8].孙蔓莉,孟玉玲,张强,黄桂艳,单卫星.农杆菌介导的烟草瞬时表达影响因素研究[J].西北农业学报.2015
[9].刘雪梅,王蕾,文添龙,何鹏,俞嘉宁.农杆菌介导的棉花子叶瞬时表达系统的建立[J].植物学报.2014
[10].王磊,陈雯,刘娅,杨若韵,阴霞.月季花瓣中农杆菌介导的基因瞬时表达体系的优化及其在RNAi中的应用[J].农业生物技术学报.2014