导读:本文包含了荧光半定量论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:荧光,定量,射线,定量分析,层析,光谱,免疫。
荧光半定量论文文献综述
郭宇斌[1]（2016）在《X射线荧光光谱法快速半定量分析催化剂中的稀土总量》一文中研究指出本文主要探讨的是X射线荧光光谱法快速半定量分析催化剂中的稀土总量,全文在具体分析中主要从X射线荧光光谱法以及X射线荧光光谱法在快速半定量分析催化剂中的稀土总量应用等方面进行分析。(本文来源于《化工管理》期刊2016年34期）
唐东红,叶尤松,李哲丽,彭波,李桂珍[2]（2015）在《荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比较》一文中研究指出目的比较荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤脱氢酶氧化酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量的差异,为改进实验研究方法学提供参考依据。方法提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR与半定量PCR进行相对定量检测,结果做比对分析。结果两种检测方法均能检测到健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织0.4ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,半定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织15.625 ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR较半定量灵敏度高39倍。两种方法检测结果均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR与半定量PCR检测结果存在有一定差异。结论两种方法均可用于检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量,荧光实时定量PCR灵敏度较高于半定量PCR法。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2015年12期）
王廉明,庄李强,黄月霞,王德强[3]（2015）在《XPS在YAG:Ce~(3+)荧光粉中Ce~(3+)半定量分析方面的应用》一文中研究指出利用XPS测试方法对YAG:Ce3+荧光粉中的Ce3+含量进行了半定量分析,为研究Ce3+含量与YAG:Ce3+荧光粉发光强度的关系,在不同的烧结气氛下制备了一系列YAG:Ce3+荧光粉样品。通过分峰拟合计算可知,在4种不同的制备条件下,Ce3+的相对含量(fCe3+,用Ce3+峰面积与Ce3++Ce4+峰面积之比来估算)分别是88.46%,77.55%,75.33%和68.14%,所对应的烧结气氛依次为CO和N2的混合气氛、CO气氛、N2气氛和空气烧结气氛。YAG:Ce3+荧光粉的发光强度随着Ce3+相对含量的增加有显着增强。(本文来源于《华东理工大学学报(自然科学版)》期刊2015年04期）
方昱,蔡生力,刘红[4]（2015）在《凡纳滨对虾卵黄蛋白原和血蓝蛋白mRNA在卵巢不同发育时期的半定量和实时荧光定量PCR分析》一文中研究指出卵黄蛋白原和血蓝蛋白是凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)卵巢和/或肝胰腺合成的重要蛋白。利用半定量和荧光定量PCR技术分别检测了亲虾卵巢不同发育期卵黄蛋白原和血蓝蛋白mRNA在卵巢和肝胰腺的相对表达量。结果显示,卵黄蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中均有表达,其相对表达量随着卵巢发育持续增加,在第五期达到最高,在恢复期迅速下降。根据卵巢和肝胰腺质量的综合计算,凡纳滨对虾的卵黄蛋白中,卵巢的贡献率占主导地位,约占80%,而肝胰腺仅为卵巢的四分之一。血蓝蛋白mRNA主要在肝胰腺中表达,随着卵巢的发育,表达量呈增加趋势,至第叁期达到高峰,其后稍有下降,但仍然维持在较高水平,在第六期恢复到初始水平。血蓝蛋白是否直接或间接参与了卵黄发生和卵巢发育有待进一步探讨研究。(本文来源于《海洋通报》期刊2015年02期）
于磊,宋永清[5]（2015）在《X射线荧光光谱无标半定量分析钨精矿WO_3》一文中研究指出在荷兰帕纳科公司提供的X射线荧光光谱基本参数法半定量分析的Sem IQ软件基础上进行钨精矿WO3的分析,用黑、白钨精矿的样品进行化学定值分析其中WO3、P、As、Ca、Cu、Sn、Si O2、Mo、Mn含量,采用粉末压[1]片法加入一定量粘合剂制备成标样,重新建立一套半定量分析方法,提高了钨精矿WO3分析的准确度。应用该方法进行了大量钨精矿中WO3的半定量分析,并与原软件方法对比,WO3分析结果明显改善。(本文来源于《化工管理》期刊2015年02期）
郝芬[6]（2013）在《睾酮时间分辨荧光免疫检测试剂及降钙素原胶体金半定量免疫层析检测试剂的研究》一文中研究指出研究背景及目的免疫标记技术指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学(或生物)发光剂等作为示踪物,标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应,并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器,应用各种液相和固相免疫分析方法,对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定的方法。时间分辨荧光免疫分析(Timed-resolved fluoroimmunoassay, TRFIA)是一种灵敏的高端定量免疫检测技术,是以镧系稀土离子作为标记物来标记抗原或抗体,因镧系稀土离子具有独特的荧光特性,该技术能够获得极高的信噪比,从而具有很高的灵敏度,且还具有标记物制备简便、储存时间长、无放射性污染、检测重复性好、操作流程短、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰和应用范围十分广泛等优点。时间分辨荧光免疫分析相对于酶免分析、放射免疫分析有更高的临床应用价值。该技术适用于各种抗原抗体的临床检测,在市场上已得到广泛应用。睾酮作为性激素的一种,是临床激素六项检测中的重要组成部分,目前临床上常用的睾酮检测试剂主要是PE公司生产的时间分辨睾酮检测试剂及进口的化学发光法睾酮检测试剂,于是开发国产的睾酮检测试剂成为我们关注的焦点。睾酮由于是甾类激素,属小分子半抗原,98%的睾酮分子在血清中均是以与激素结合蛋白结合的状态存在,这些特殊性均为睾酮定量检测试剂的研发工作带来了困难与挑战。因此,在睾酮试剂的研制过程中,我们将异源桥式搭配理念引入研制过程中,以睾酮的结构类似物雄烯二酮为载体,在其C3位引入含有五个亚甲基的臂,在此结构基础上合成NHS活泼酯,其与BSA偶联后进行Eu标记从而作为反应体系中的示踪物,在以一步间接竞争法的模式基础上研制了此试剂用于血清、血浆中睾酮含量的测定。胶体金免疫层析是建立在酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、单克隆抗体技术和免疫胶体金标记技术基础上的以胶体金为标记物,利用特异的抗原抗体反应来放大反应,通过直接观察就可以判定结果的新技术。该技术具有简单、快速、准确和无污染等优点,在临床医学检测、激素检测、食品安全检测、药物残留和毒品快速检测诸多诊断领域迅速发展[1]。随着即时检验(POCT)产业的深入发展,胶体金试剂由于其本身所带有的快速、简便、易于携带、便于深入社区及边远山区等特点,成为目前POCT发展的主要领域,从而那些与发病急、危害大的疾病相关的检测指标的胶体金试剂的需求越来越大。降钙素原(PCT)作为一种与脓毒血症相关的特异性检测指标,只有当细菌感染时降钙素原才会升高,在其他的炎性反应中如病毒感染、自身免疫性疾病和创伤等均不会升高,所以其具有良好的特异性及灵敏度,能用于区分感染或非感染引起的炎症、器官功能障碍以及休克。从产生和消除的动力学过程来看,PCT也是最适合用作临床诊断指标的。加之脓毒血症能够在短时间内对病人的生命造成严重威胁,故其检测试剂的胶体金化也成为临床医生及诊断试剂厂家的关注的重点。但是目前检验领域仅有几家公司有相关试剂的生产能力,国内厂家几乎属于空白状态,大部分医院所使用的相关检测试剂全部依赖进口,如Braham公司生产的半定量PCT试剂,但其所具有的一个重要的缺陷是价格昂贵,无法满足社区与边远山区医疗需求,故研制国产的PCT胶体金半定量试剂成为我们的主要目标。国产PCT试剂一直寥寥无几的主要原因是没有性能优越的原料,大部分存在灵敏地低或特异性差的问题。为了更好的解决原料问题,我们对市售的PCT抗体进行了大规模的搜索工作,利用时间分辨免疫荧光检测进行原料配对等初筛工作,并且发现了满足半定量胶体金试剂研发要求的原料在TRFIA荧光值方面的特殊性,最终通过双抗体夹心法研制了能够进行PCT半定量检测的胶体金试剂。本文主要从制备睾酮及睾酮类似物的化学衍生物及其偶联物、睾酮时间分辨免疫荧光检测试剂的研究及降钙素原半定量检测试剂的研究共计叁个方面对所进行的研究做一总结。第一部分内容中,着重介绍了睾酮及睾酮类似物的化学衍生物及其偶联物的制备,制备过程以睾酮或睾酮类似物-雄烯二酮作为合成起始原料,向上述结构中引入O-(羧甲基)羟胺半盐酸盐(O-(carboxymethyl)hydroxylamine hemi-hydrochloride)或氨氧基已酸氢溴酸盐(6-Aminooxy-hexanoic acid,hydrobromide)作为臂结构。随后在NHS及DCC的条件下,搅拌过夜,将相应的肟合成NHS活泼酯结构,利用闪氏柱层析对其进行纯化,除去未反应的成分。最后将将活泼酯与BSA以摩尔比15：1的比例进行偶联,反应于室温下搅拌过夜,次日以分子筛进行纯化,并用BCA法分别检测四种睾酮偶联物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ的浓度分别为0.8mg/ml、0.9mg/ml、0.9mg/ml及0.8mg/ml。第二部分着重介绍了人睾酮时间分辨荧光免疫分析检测试剂的研究过程。首先利用高岭土、活性炭制备去激素血清作为校准品配制用基质,并配制睾酮校准品如下：A(0nmol/L)、B(1.0nmol/L)、C(3.2nmol/L)、D(6.8nmol/L)、E(14nmol/L)及F(51.2nmol/L)。第二步进行睾酮偶联物的标记,每种偶联物都取1mg进行标记,按照偶联物与Eu3+质量比2：1的比例加入铕标记配体,标记体系均为200μl,将待标记偶联物和铕标记试剂充分混匀后置于摇床上室温孵育18h。次日过分子筛层析纯化。根据280nm蛋白的吸收峰收集洗脱液,即为睾酮检测原。利用BCA法检测睾酮检测原的浓度,然后向其中加入铕标保护液,置—20℃保存。最终检测到睾酮检测原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ的浓度分别为132μg/ml、135μg/ml、138μg/ml和140μg/ml。第叁步是摸索羊抗鼠IgG的最适包被浓度,设置包被梯度,用包被液将羊抗鼠IgG多抗稀释至不同浓度后进行,37℃过夜,封闭,真空抽干,—20℃冷冻保存,检测在不同的包被浓度下,睾酮校准品A的荧光值,通过荧光值的比较选择最适的羊抗鼠IgG包被浓度,最终确定羊抗鼠IgG的最适包被浓度为6μg/ml。第四步是进行四种睾酮检测原的性能比较,根据各个睾酮检测原的标准曲线分别确定其ED50,选择ED50最低的检测原作为体系中所使用的示踪物,最终确定睾酮检测原Ⅳ为最佳检测原。第五步确定最适的样本加入量,将样本加入量做梯度,检测在不同加入量条件下的校准品A的荧光值(Bmax)及校准品B的荧光值,并计算B/Bmax的比值,选择比值相对较小并且不易对操作引入误差的样本量,最终确定最适样本加入量为25μl。第六步确定抗睾酮单克隆抗体及检测原的最佳使用浓度,将二者的浓度进行梯度稀释,利用棋盘滴定法进行实验,根据灵敏度及A点荧光值来选择最适二者最适的稀释度,最终确定抗睾酮单克隆抗体的最佳使用浓度为6ng/ml,检测原的最佳使用浓度为1μg/ml。由于血清中99%的睾酮是以与SHBG(性激素结合蛋白)相结合的形式存在,故反应缓冲液中阻断剂的存在对于血清睾酮含量的准确测定具有重要的意义,于是第七步我们进行阻断剂最佳浓度的测定,将二甲氧雌二醇的浓度做梯度稀释,根据不同阻断剂浓度下A点的荧光值及各个点的B/Bmax进行比较,选择灵敏度比较高且阻断剂的加入对于A点荧光值的影响程度在5%以内的浓度为阻断剂最适使用浓度,最终确定阻断剂的最适使用浓度为30μg/ml。第八步进行最佳反应时间的确定,将反应时间做梯度,检测不同反应时间下校准品A、B、C、D、E和F的荧光值与Btotal的比值,以各个校准品的反应都趋于平衡的时间作为体系的最佳反应时间,最终将最适反应时间定为90分钟。待试剂的各个参数都确定完毕后,对试剂的整体性能进行评价,平行测定十次校准品A的荧光值,并计算其标准差,用A点荧光值的平均值减去2倍标准差,将得到的荧光值带入标准曲线,所得的浓度即为分析灵敏度。经计算,分析灵敏度为0.15nmol/L;取不同浓度叁个样本分别进行梯度稀释,不同稀释度条件下的测量浓度与理论浓度的比值即为稀释回收率,此参数反映体系的健全性,本试剂的稀释回收率在98.8%-101.4%之间,稀释倍数与含量呈线性关系,说明本分析具有良好的健全性；研究此反应的特异性,将临床上可能与睾酮检测有交叉反应的各类激素样本在睾酮检测体系中进行检测,取睾酮体系ED50所对应的睾酮浓度与交叉物质在睾酮体系中达到A点荧光值一半时的浓度的比值,即为二者之间的交叉反应率,经实验证实,本试剂与孕酮的交叉反应率为0.14%,与双氢睾酮的交叉反应率为0.38%,与雌二醇的交叉反应率为0.07%,与17-羟基孕酮的交叉反应率为0.02%,与雌叁醇的交叉反应率为0.09%,与Danazol的交叉反应率为0.12%；在精密度分析方面,采用叁个伯乐质控品,各设10个复孔,同一次实验内和不同实验中重复多次测定,分析内变异系数为2.5-6.6%,分析间变异系数为3.6-7.8%,精密度良好。以SPSS13.0统计软件对数据进行分析,在线性评估方面应用直线回归分析方法,以P＜0.05为差异有统计学意义。利用Logit函数将睾酮的S形竞争曲线转换为直线,以此直线的相关系数评价体系的性能,转换为Logit函数后,线性回归方程为Y=1.453-2.193X,相关系数为r=0.99,R2=1.000,F=7303.334,P＜0.001,说明此竞争法体系的线性关系非常好；最后将本试剂与PE试剂做相关分析,分别对84例样本进行检测,评价两种试剂之间的检测相关性,相关性方程为Y=0.991X-0.331,相关系数为r=0.988,R2为0.977,F=3407.808,P＜0.001,说明本试剂能够很好的满足临床检测的要求。本论文的第叁个部分主要阐述了降钙素原胶体金半定量免疫层析检测试剂的研制过程。研制过程中,首先进行NC膜的筛选,对几种候选NC膜通过毛细管流时、灵敏度、反应结果出现时间及试剂条背景等指标的比较确定本试剂最终用膜,最终选取Millipore公司生产的HF135作为本试剂用膜；第二步进行的是胶体金结合垫材质的筛选,对候选的胶体金用玻璃纤维通过材质、非特异性吸附、胶体金能否恒定释放、金标垫上胶体金溶解与释放速度及能否预防溶血等方面进行比较后确定所选取的材质,经过一系列实验,最终确定选择Millipore的玻璃纤维GFCP103000作为本试剂用的胶体金结合垫材质；研制过程的第叁步是原料的筛选过程,主要是通过软件SPSS13.0对TRFIA数据进行线性回归分析,以P<0.05为差异有统计学意义,计算r值及P值,经分析,组合1至组合9均表现为线性性差,r值分别为0.982、0.958、0.973、0.966、0.786、0.859、0.884、0.977及0.458,P值分别为0.003、0.01、0.005、0.007、0.214、0.062、0.047、0.004及0.438,组合10及组合11经分析线性性好,r值分别为0.991及0.993,P值均为0.001。其后再利用胶体金方法对2对初筛得到的抗体组合进行进一步评估,评价配对后的特异性、灵敏度、比色区分度等指标,确定最佳配对,经过严密的实验设计及严谨的实验过程,最终确定使用Hytest的16B5作为包被原料,杭州启泰的MJG03作为标记原料。第四步是对所确定的标记原料进行最适标记条件的摸索,利用氯化钠法确定原料的最适标记pH值和最适标记量,经实验可知,MJGO3的最适标记pH条件为1ml金中加入0.1M的K2CO315μl,标记量为每100ml胶体金溶液标记1.5mg。第五步是确定包被用原料的包被条件,通过设置不同的包被条件,检测在不同包被条件下试剂的灵敏度、特异性、T线显色程度等指标,选择T线性能最好的条件,最终选择10mM PBS(pH7.2)作为包被液。第六步进行金标抗体使用浓度及包被浓度的摸索,通过将喷金量及包被浓度做梯度,选择能够同时满足灵敏度高、特异性好且0.5ng/ml、2ng/ml及10ng/m1叁个浓度显色差异大的组合,经过棋盘滴定法实验,最终确定金标抗体的使用浓度为OD535=40,喷金量为0.5μl/mm,检测线抗体16B5的工作浓度为2.5mg/ml,划线量为0.12μl/mm;质控线抗体的最佳工作浓度为1mg/ml,划线量为0.12μl/mm。在确定最佳喷金量及包被浓度的前提下,第七步进行比色卡标准的建立,将0.5ng/ml、2ng/ml及10ng/ml叁个浓度的阳性样本各测定20次,分别选择20次结果的平均显色度作为比色卡的标准。所有试剂相关的参数都确定后,对试剂性能进行进一步评估,通过测定检测不同降钙素原浓度的样本,最终确定试剂的最低检出量为0.2ng/ml;利用C-反应蛋白、降钙素、类风湿因子阳性样本评价试剂的特异性,发现本试剂与10mg/m1的C-反应蛋白、6.4mg/m1的降钙素及500IU/m1的类风湿因子均无交叉反应,特异性良好；血清血浆样本检测结果一致性考核方面,将PCT标本分别处理成血清、肝素抗凝血浆、EDTA抗凝血浆样本,确定血清、血浆检测结果是否一致,最终通过实验发现试剂在这两种样本的检测性能上具有一致性；本试剂经稳定性评价发现其在37℃条件下放置21天不会对试剂性能造成影响：精密性评价是平行测定0.5ng/ml、2ng/ml及10ng/ml参考品各十次,观察其显色程度,通过平行实验发现,本试剂精密性良好；最后将本试剂与定量试剂盒进行比较,取临床定量检测样本45例,用本试剂进行半定量检测,将二者的结果进行对比,以评价试剂半定量的准确性,通过实验发现,二者的符合率为88.9%。(本文来源于《南方医科大学》期刊2013-05-29）
赵兰芳,董永胜,井卫华,程泽[7]（2012）在《X射线荧光光谱法在光谱半定量分析中的应用》一文中研究指出采用粉末压片制样,对样品进行10°～148°2θ扫描测定,根据其角度不同定性,依据其强度大小定量,结合软件中的库样品成分,给出半定量结果。方法经大批样品的分析验证,其分析结果可靠,方法的检出限、精密度、准确度均满足质量管理的要求。(本文来源于《内蒙古科技与经济》期刊2012年02期）
韩晶,骞爱荣,胡丽芳,王哲,于丹[8]（2009）在《基于免疫荧光图像的微管蛋白半定量分析》一文中研究指出目的:建立一种基于免疫荧光图像的快速、简便、半定量分析微管蛋白的方法.方法:小鼠成骨样细胞MC3T3分别在正常及叁维回转条件培养48h后,免疫荧光细胞化学技术标记对照组和回转组的成骨细胞微管骨架,激光共聚焦显微镜采集荧光图像;采用叁种不同的专业图像分析软件SimplePCI,Imagepro-Plus6.0(IPP)及ImageJ定量分析叁维回转培养条件对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1微管细胞骨架的影响;用Western Blot检测α-微管蛋白表达量;用ImageJ软件确定MC3T3-E1细胞微管骨架的分形维数.结果:对采集到的细胞骨架荧光染色图像做定量分析发现,与对照组相比,经过48h叁维回转培养,MC3T3-E1细胞图像的荧光强度明显降低(P<0.01);Western Blot结果表明,经过48h叁维回转培养,MC3T3-E1细胞α-微管蛋白表达量表达量明显下降;Im-ageJ软件分析结果表明,经过48h叁维回转培养,MC3T3-E1细胞微管的分形维数也明显低于对照组(P<0.05).结论:图像分析软件的结果和实验结果一致,表明基于免疫荧光图像的分析方法是可行的,为细胞形态学的定量研究提供了新思路和手段.(本文来源于《第四军医大学学报》期刊2009年24期）
胡大康,张瑾,刘池波,杨敏,李向阳[9]（2009）在《荧光PCR法半定量肺炎支原体的研究》一文中研究指出目的:研究MPLI(肺炎支原体载量指数)的参考范围,探讨其在儿童肺炎支原体(MP)感染诊断中的应用价值。方法:2008年3月末采集3~6岁健康儿童咽拭子标本128例,采用FQ-PCR法分别检测MP-DNA和Hactin-DNA后计算MPLI值:MPLI=-lg(MP-DNA拷贝量/Hactin-DNA拷贝量),然后算出MPLI的参考范围(P5)。2008年3月~7月于我院儿科采集临床患儿咽拭子标本110例及其双份血清,分别用FQ-PCR法和MP-IgM法检测咽拭子和血清标本。以单次或双次MP-IgM型抗体阳性作为判定MP感染的标准,算出各种方法的SEN、SPE、+PV、-PV,并制作MPLI的ROC曲线。比较P5与ROC曲线所得界值的优劣。结果:ROC所得MPLI界值优于128例健康儿童MPLI的P5界值,所以,3~6岁儿童咽拭子MPLI的参考范围为:≥5.90。根据金标准,110例标本中有26例确诊为MP感染;以此为基础,一次MP-IgM法的SEN、SPE、+PV、-PV分别为73.1%、100.0%、100.0%和92.3%;两次MP-IgM法的均为100.0%;单一FQ-PCR法的依次为26.9%、95.2%、63.6%和80.8%;MPLI的依次为26.9%、98.8%、87.5%和81.4%。结论:(1)单一FQ-PCR法测定MP-DNA的弱点很明显:假阳性率高,主要由于未对临床标本进行"标准化",故而大大限制了其在临床上的大规模应用。(2)MPLI的优点在于对临床标本进行了"标准化",充分弥补了单一FQ-PCR法假阳性率高的弱点,结果更具说服力;MPLI能早于MP-IgM法诊断MP急性感染。(3)在允许(如经济状况等)的情况下,MPLI和MP-IgM法的结合将会是很好的组合,既能早期发现MP急性感染,又能准确诊断MP感染的恢复(早)期状态。(本文来源于《中国卫生检验杂志》期刊2009年04期）
杨兰辉,向莉,赵滢,韩林,王玉明[10]（2008）在《实时荧光半定量MSP检测肺癌组织CDH1甲基化水平实验条件的探讨》一文中研究指出目的探讨实时荧光半定量MSP检测肺癌组织中CDH1DNA甲基化水平的最适实验条件。方法通过改变实时荧光半定量MSP反应条件,探讨MSP反应体系最适浓度和反应条件。结果检测CDH1DNA甲基化实时荧光半定量MSP反应体系为dATP,dCTP和dGTP200μmol/L,dUTP400μmol/L,MgCl23.0mmol/L,引物600nmol/L,热启动TaqDNA聚合酶0.04U/μl,模板3μl,DMSO2.5,1×SYBGREEN染料,1×反应缓冲液,总体系25μl。反应条件为95℃预变性12min,95℃15s、退火温度1min(其中62℃2个循环、60℃3个循环和58℃45个循环)、69℃10s,循环次数50。结论改进和建立了CDH1DNA甲基化水平的相对定量检测方法。(本文来源于《现代检验医学杂志》期刊2008年06期）
荧光半定量论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的比较荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤脱氢酶氧化酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量的差异,为改进实验研究方法学提供参考依据。方法提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR与半定量PCR进行相对定量检测,结果做比对分析。结果两种检测方法均能检测到健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织0.4ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,半定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织15.625 ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR较半定量灵敏度高39倍。两种方法检测结果均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR与半定量PCR检测结果存在有一定差异。结论两种方法均可用于检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量,荧光实时定量PCR灵敏度较高于半定量PCR法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
荧光半定量论文参考文献
[1].郭宇斌.X射线荧光光谱法快速半定量分析催化剂中的稀土总量[J].化工管理.2016
[2].唐东红,叶尤松,李哲丽,彭波,李桂珍.荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比较[J].中国比较医学杂志.2015
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