导读:本文包含了反义显像论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:核酸,探针,核苷酸,分子,肿瘤,标记,逆转录。
反义显像论文文献综述
任炳秀,韩胜,靖功伟,王娇亚,王欣[1]（2018）在《hTERT-ASON-Cy5光学反义探针肿瘤靶向显像研究》一文中研究指出目的:以光学方法活体内检测肿瘤细胞端粒酶活性,为肿瘤靶向显像研究提供一种新的方法。方法:以荧光染料Cy5对人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸(human telomerase reverse transcriptase antisense oligonucleotide,hTERT-ASON)进行标记制备hTERT-ASON-Cy5分子探针;建立人黑色素瘤A375细胞荷瘤裸鼠模型,通过尾静脉注射反义探针后在Ivis Spectrum光学成像仪下进行平面成像,以肿瘤(tumor,T)及裸鼠背部皮肤(skin,S)作为感兴趣区(region of interest,ROI)计算T/S比值;显像后48 h处死小鼠,对肿瘤进行端粒酶免疫组织化学检测。结果:hTERT-ASON-Cy5可靶向A375肿瘤,T/S比值可达2.15±0.38,A375细胞端粒酶表达呈强阳性,并可被hTERT-ASON所抑制。结论:hTERT-ASON-Cy5可用于活体内端粒酶阳性肿瘤靶向显像研究。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2018年18期）
韩静雅[2]（2014）在《脂质体介导~(99)Tc~m-EGFRmRNA反义肽核酸肿瘤显像的实验研究》一文中研究指出目的：研究脂质体介导放射性核素99Tcm标记的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）mRNA反义肽核酸(peptidenucleic acid, PNA)的方法，测定该反义分子探针的标记率，评价其体内外稳定性，并探讨脂质体介导对99Tcm标记EGFR mRNA反义PNA体外靶细胞摄取、荷瘤裸鼠体内生物学分布及特异性显像的影响。探索促进99Tcm标记EGFR mRNA反义肽核酸分子探针进入靶细胞的方法，进一步提高该核素分子探针肿瘤基因显像的效果。方法：以EGFR mRNA（genbank序列号：NM_201283.1）的第503-519碱基序列（17bp）为靶序列，设计反义PNA5'-AATGAGGACATAACCAG-3'，于其5'端连接由Gly-(D)-Ala-Gly-Gly4个氨基酸形成并且能与99Tcm进行强力螯合的类似N4结构的短肽，最后在PNA与该结构之间引入可以消除空间阻碍的隔离物γ-氨基丁酸(4-aminobutyric acid, Aba)，完成反义PNA分子的合成。因PNA不带电荷，为了使反义PNA分子带负电荷以利于脂质体包裹，再合成与上述反义PNA3'末端8个碱基互补的短寡核苷酸链，即5′-CTGGTTAT-3′结构。利用碱基互补配对原则将带有短肽螯合功能的EGFR mRNA反义PNA与部分互补寡核苷酸杂交，使反义PNA分子带负电荷后进行99Tcm标记，标记后以脂质体包裹反义探针。用反相高效液相色谱法(reverse-phase highperformance liquid chromatography, RP-HPLC)鉴定脂质体介导及非介导的99Tcm标记EGFR mRNA反义PNA（99Tcm-EGFR-PNA）的标记率。并将两者于37℃条件下分别在生理盐水及人新鲜血清中孵育1、2、4、6、12、24h，用RT-HPLC测定各自在不同介质及不同时间点的放射化学纯度，以检测其体外稳定性。并采用静置贴壁法培养人卵巢癌SKOV3细胞及人乳腺癌MDA-MB-435S细胞，收集对数生长期细胞，按每只裸鼠1×1011/L的浓度接种0.2ml到无特异病原体级裸鼠右前肢外侧皮下，当瘤体直径约1cm时，选取肿瘤形态规则、色泽红润、大小无明显差异的荷瘤裸鼠用于实验。用RP-HPLC测定EGFR高表达的SKOV3细胞荷瘤裸鼠注射脂质体介导及非介导分子探针后2-3h时的尿液中分子探针的放化纯，以监测分子探针体内稳定性。研究脂质体介导与非介导的分子探针在EGFR高表达的SKOV3细胞及EGFR低表达的MDA-MB-435S细胞的摄取以及滞留情况，以了解探针的药代动力学。取32只SKOV3细胞荷瘤裸鼠，利用随机数字表法分为2组，每组16只。各组分别注射脂质体介导及非介导99Tcm-EGFR-PNA。取16只MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠，尾静脉注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA。在各组内按随机数字表法分别于注药后1、2、4、6h各取4只动物模型，眼静脉取血后，颈椎脱臼处死，取各脏器分别测定其放射性计数并称重，测定3个标准源的放射性计数，计算每克组织中放射性计数与标准源（3个标准源均值）的比值即%ID/g以及肿瘤与肌肉组织的%ID/g比值(tumor to muscle, T/M)。比较各时间点脂质体介导对分子探针在动物模型体内分布的影响。取10只SKOV3细胞荷瘤裸鼠，利用随机数字表法分为2组，每组5只。各组分别注射脂质体介导及非介导的99Tcm-EGFR-PNA。取5只MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠，尾静脉注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA。均于注药后1、2、4、6、8、10h行静态显像，观察各组内随时间变化肿瘤部位放射性浓聚的变化，利用感兴趣区技术测定肿瘤部位放射性计数与对侧正常部位同等区域放射性计数的比值（target to nontarget ratio, T/NT），并比较3组间显像的差异。所有实验数据均采用SAS9.1统计学软件进行统计学分析，实验数据以均数±标准差表示，对数据进行两样本t检验（或t'检验）或Wilcoxon秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。结果：经RP-HPLC法检测，脂质体介导及非介导的99Tcm-EGFR-PNA放射及紫外峰几乎均为单峰，放射峰保留时间分别为19min、12.5min，6h内标记率分别为（95.17±0.55）%(n=6)、（98.75±1.09）%(n=6)，均较高，满足体内显像要求，无需进一步纯化。于37℃水浴条件下，在生理盐水及人新鲜血清中各孵育1、2、4、6、12和24h，6h内分子探针放射化学纯度均在90%以上，且放射峰位置较稳定，未见漂移。RP-HPLC鉴定注射了脂质体介导或非介导分子探针的荷瘤裸鼠的尿液，其放射峰出现时间点均以标记物走样时的保留时间点为主，主峰前出现一小代谢物峰，但并非游离99TcmO-4。尿液中脂质体介导及非介导的分子探针的放化纯分别为89.3%和90.0%。脂质体介导明显提高了EGFR高表达的SKOV3细胞对分子探针的摄取率（t′=47.11-58.67，Z=2.80，均P <0.05），最高可达8.8倍。加入脂质体后细胞对反义探针的摄取高峰时间由不加脂质体时的6h延迟至12h。EGFR高表达的SKOV3细胞对脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA的细胞摄取率明显高于MDA-MB-435S细胞对其摄取率（t=20.54-30.16，t′=9.45，Z=2.80，均P﹤0.05）。脂质体介导后人卵巢癌SKOV3细胞对反义探针滞留率增加（t′=7.25-11.55，Z=2.80，均P<0.05）。体内生物分布实验显示，在EGFR高表达SKOV3细胞荷瘤模型组，探针主要分布在肿瘤、肝脏、肾脏，肿瘤组织放射性计数明显高于瘤体对侧肌肉组织的放射性计数，并且随时间延长，逐渐增加。脂质体介导可以明显提高不同时刻T/M值（t=11.24, t′=3.96-11.94,均P<0.05）。并且注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA后SKOV3细胞荷瘤裸鼠各时间点的T/M值明显高于MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠的T/M值（t=9.69，11.84，t′=6.2，6.23，均P<0.05）。体内显像实验显示，SKOV3细胞荷瘤裸鼠注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA1h后肿瘤组织即有明显放射性核素浓聚，随时间延长浓聚程度增加，6h达摄取高峰，之后放射性核素浓聚程度轻度减低。SKOV3细胞荷瘤裸鼠非脂质体介导组，注药后1h肿瘤部位出现轻度摄取,6h达摄取高峰，之后放射性核素浓聚程度快速减低。并且脂质体介导可以明显增加各时间点T/NT值（t=3.96，t′=12.65-14.69，Z=2.83-5.29，均P<0.05）。MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA后，在显像时间内肿瘤部位无明显放射性核素浓聚。结论：脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA标记率高，体内外稳定性好，能够被EGFR高表达的细胞特异性摄取，可用于EGFR高表达肿瘤体内特异性显像。脂质体可以明显促进99Tcm-EGFR-PNA进入细胞，提高EGFR高表达肿瘤的显像效果，有助于肿瘤基因显像的诊断。(本文来源于《河北医科大学》期刊2014-03-01）
马超,康磊,王荣福[3]（2013）在《放射性核素锝[~(99)Tc~m]标记方法在反义显像中的应用进展》一文中研究指出反义显像是核医学显像领域里的重要组成部分。本文以放射性核素锝[99 Tcm]标记寡核苷酸制备反义探针为切入点,对寡核苷酸的99 Tcm标记方法做一综述。主要涉及寡核苷酸标记前的化学修饰、寡核苷酸标记方法的选择和优化、多种不同螯合剂的优势对比,以及一些反义显像的应用。以简单程序化的方式合成稳定而高效的基因反义探针,将给反义显像的发展注入新的动力,并为肿瘤的诊断与治疗带来福音。(本文来源于《核化学与放射化学》期刊2013年05期）
王娜[4]（2013）在《~(99)Tc~m标记EGFR mRNA反义肽核酸荷瘤卵巢癌基因显像的研究》一文中研究指出目的：研究~(99)Tc~m标记表皮生长因子受体（Epidermal growth factorreceptor, EGFR) mRNA反义肽核酸(peptide nucleic acid, PNA)行EGFR基因分子探针的制备，测定其标记率及放化纯，评价其在体内外的稳定性，并探讨其在EGFR mRNA表达阳性卵巢癌荷瘤裸鼠体内分布及体内显像的情况，以探索核素基因显像在活体内评价肿瘤基因表达状况，为肿瘤早期特异诊断和靶向治疗及疗效评价提供新的分子影像学方法。方法：针对EGFR mRNA（genbank序列号：NM_201283.1）的第503-519碱基序列（17bp），设计反义PNA5′-AATGAGGACATAACCAG-3′及无义PNA5′-AGTAGAGATGTGACGAT-3′，将4个氨基酸(Gly-(D)-Ala-Gly-Gly)连接在其5′端，此四个氨基酸可形成一个类似N4结构的强螯合基团，在PNA与四个氨基酸之间再引入一个隔离物γ-氨基丁酸(4-amino-butyric acid，Aba)以消除空间障碍，然后用核素~(99)Tc~m进行标记。用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）测定两种探针的标记率及放化纯，并分别测定其在室温下静置、与生理盐水及人新鲜血清1:1混合置于37℃水浴箱中1、2、4、6、12、24h的放化纯以分析其在体外的稳定性；收集了注射~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义及无义PNA探针荷瘤裸鼠30min及2-3h尿液，用HPLC测定其标记率以了解其在荷瘤裸鼠体内的稳定性。采用静置贴壁法培养人卵巢癌SKOV3细胞，收集对数生长期的人卵巢癌SKOV3细胞，调配成浓度为3x10~6个/ml加入到六孔板中，6×10~5个细胞/每孔（200μL/孔），然后置于培养箱中进行培养。待细胞长满至整个孔的80%-90%后，换新鲜培养基，然后加入30μL（37kBq）稀释好的反义或无义PNA溶液，再置于培养箱中分别培养1、2、4、6、12、24h后收集其上清及沉淀，测定其放射性计数，计算不同时间的摄取率并比较有无差异。将稀释好的30μL~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义或无义PNA(37kBq)加入到SKOV3细胞的每个培养孔内（6×10~5个/孔），分别在培养箱内培养6h后，迅速移去培养基并换成新鲜培养基，再置于培养箱中继续培养至1、2、4、6、12、24小时收集每孔的上清及沉淀，并测定其放射性计数。计算不同时刻的细胞滞留率，初步探讨两种探针在人卵巢癌SKOV3细胞中的药代动力学。采用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)测定人卵巢癌SKOV3细胞中EGFR mRNA的表达情况。收集对数生长期的人卵巢癌SKOV3细胞，调配成浓度为3.0×10~7个细胞/ml RPIM1640培养基（不含胎牛血清）的单细胞悬液，注射于裸鼠右前肢皮下，每只裸鼠注射体积为0.2ml（6×10~6个细胞）。待肿瘤长到1-1.5cm时，选取肿瘤形态规则，色泽红润，大小无显着性差异的荷瘤小鼠用于实验。对比分析了分子探针在荷人卵巢癌SKOV3裸鼠体内分布及基因显像情况,抽取荷人卵巢癌SKOV3裸鼠48只，随机分为反义及无义两组，每组24只，每组再分为1、2、4、6h四个亚组，每个亚组6只，分别经尾静脉注射~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义或无义PNA探针0.1ml（1110kBq），分别于注射1、2、4、6h眼静脉采血后，断颈处死，取其心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺、胃、肠、脑、骨骼、肌肉及肿瘤等不同的组织或脏器，同时设置3个标准源，分别称重并测定不同时刻不同脏器的放射性计数及3个标准源放射性计数。计算每克组织中放射性计数占标准源总放射性计数（3个标准源的平均值）的比值(%ID/g)，比较两者间差异。再抽取荷人卵巢癌SKOV3裸鼠10只，随机分为反义及无义两组，每组5只，分别注射~(99)Tc~m标记的两种探针后，在1、2、4、6、8、10h进行静态显像，分别观察两组显像荷瘤裸鼠肿瘤放射性浓聚程度随时间变化的情况。计算不同时刻肿瘤部位放射性计数与对侧正常部位放射性计数比值(T/NT)。采用SAS9.1统计软件对实验数据进行统计学分析，所有实验结果的组间比较均采用两个样本的t检验，如果任何一组数据不符合正太性（p＜0.1）或者方差不齐（p＜0.1），则采取成组设计两样本比较的秩和检验，以p＜0.05表示差异有统计学意义。结果：在设定的HPLC条件下，~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义或无义PNA呈单峰，保留时间为12.5min，其在室温下6h内标记率分别为98.80%±1.14%、98.63±1.36%（n=6），放化纯不低于95%；两种探针分别与生理盐水、人新鲜血清混合后6h，标记物的放化纯大于93%,甚至在混合后24h，其放化纯仍达到85%；收集注射了两种标记探针裸鼠的尿液后，经HPLC测定，注射了~(99)Tc~m标记反义探针后30min的尿液呈单峰，保留时间为12.5min，其注射后2-3h的尿液放化纯仍达到89%。人卵巢癌SKOV3细胞对~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义及无义PNA的摄取率在1-6h随时间延长逐渐上升，随后逐渐下降，即6h细胞摄取率达到高峰，但~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义PNA在各个时间点的细胞摄取率均高于~(99)Tc~m-EGFR mRNA无义PNA（P＜0.05）；而两种探针的细胞滞留率随时间延长均逐渐下降，~(99)Tc~m-EGFR mRNA无义PNA的细胞滞留率在1-24h内均低于~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义PNA（P＜0.05）。RT-PCR结果表明，人卵巢癌SKOV3细胞中EGFR mRNA高表达。荷人卵巢癌SKOV3裸鼠体内分布结果显示~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义或无义PNA在荷人卵巢癌SKOV3裸鼠体内的放射性分布除肿瘤外主要集中在肝脏和肾脏。尾静脉注射~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义PNA后1-6h，肿瘤摄取随时间延长逐渐增高，明显高于肌肉组织，而注射~(99)Tc~m-EGFRmRNA无义PNA后1-6h，肿瘤摄取随时间延长逐渐降低；注射后任意时刻，肿瘤对~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义PNA的摄取均高于~(99)Tc~m-EGFR mRNA无义PNA（P＜0.05）。荷瘤裸鼠体内基因显像结果显示，注射~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义PNA后1h，肿瘤部位可见放射性核素浓聚，且在注射后1-6h，肿瘤放射性浓聚程度随时间延长越来越明显；而注射~(99)Tc~m-EGFR mRNA无义PNA的任一时刻，肿瘤部位均未见明显显影；反义组显像裸鼠的T/NT比值在显像的各个时间点均高于无义组（P＜0.05）。结论：~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义PNA用四个氨基酸短肽作为螯合剂标记的分子探针其标记率及放化纯均较高，体内外稳定性好，用于体内显像能特异性的聚集在EGFR高表达的肿瘤组织中，可作为一种有潜力的核素分子探针用于EGFR mRNA基因表达阳性的卵巢癌等肿瘤显像诊断，并可评价肿瘤EGFR表达状况。(本文来源于《河北医科大学》期刊2013-03-01）
任秀春[5]（2012）在《~(99)Tc~m-EGFR mRNA反义肽核酸的制备及其在荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠模型中的显像研究》一文中研究指出目的:研究99Tcm标记表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor, EGFR) mRNA反义肽核酸(peptide nucleic acid, PNA)的制备方法，评价其标记条件及体外稳定性，并探讨该分子探针在荷Lewis肺癌C57BL/6小鼠体内显像的价值，研究反义基因显像早期、特异性诊断恶性肿瘤的可行性，为核素基因反义显像分子探针的制备及其早期诊断肿瘤提供实验依据。方法:以EGFR mRNA第251-267位寡核苷酸片段即5′-AGCAGCGATGCGACCCT-3′为靶序列，利用化学合成法人工合成EGFRmRNA反义PNA5′-AGGGTCGCATCGCTGCT-3′及无义PNA5′-AGTAGAGATGTGACGAT-3′。于反义/无义PNA5′端连接4个氨基酸(Gly-(D)-Ala-Gly-Gly-)的短肽结构，形成一个类似N4结构的强螯合基团，并引入1个γ-氨基丁酸(4-aminobutyric acid, Aba)作为隔离物消除空间阻碍，形成结构为Gly-(D)Ala-Gly-Gly-Aba-5′-AGGGTCGCATCGCTGCT-3′的化合物，利用配体交换法对反义PNA进行99Tcm标记。以相同的方法标记无义PNA，利用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)及快速薄层层析法(instant thin-layer chromatography, ITLC)测定标记物的即刻标记率，同时将标记物室温下放置4h、8h、12h以及24h后测定其体外稳定性；并将两种分子探针分别与人新鲜血清混合后37℃条件下静置24h，然后测定其在血清中的稳定性。复苏小鼠肺癌(Lewis)瘤株，接种于一只小鼠的右侧腋窝皮下，待移植肿瘤生长直径达2.0cm左右，处死荷瘤小鼠，将肿瘤组织切割成(3-4)mm3大小的组织块，制备成单细胞悬液，注射于小鼠右侧腋窝皮下，每只小鼠注射0.2ml，约4×106个细胞。定期观察小鼠的生存状态、饮食及肿瘤生长状况，当移植瘤体直径约1cm时，选取肿瘤形态规则，色泽红润，大小无显着性差异的荷瘤小鼠用于试验。利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)检测Lewis肺癌肿瘤组织中EGFR mRNA的表达情况。取10只荷瘤小鼠，随机平均分为反义显像组和无义显像组，分别经尾静脉注射标记率较高的99Tcm-EGFRmRNA反义/无义PNA0.1ml(含37MBq)，于注射后2h、6h、12h以及18h上机显像，观察两组间荷瘤小鼠移植瘤放射性浓聚的差异。采用SPSS16.0统计学软件对实验数据进行分析，所有计量资料结果均以x±s表示，两组间计量资料行独立样本t检验，多组间计量资料采用单因素方差分析，以p<0.05表示差异有统计学意义。结果:①经HPLC分析，在理想的标记条件下，99Tcm-EGFR mRNA反义PNA呈单峰，保留时间约为3.1min。经ITLC检测，标记物的即刻标记率可达(95.64±2.48)%(n=5)，室温下静置8h后标记率大于90%；标记物与新鲜血清孵育24h后标记率均仍>82%。99Tcm-EGFR mRNA反义PNA即刻标记率高，无需纯化，稳定性较好，可直接用于动物体内显像实验；②RT-PCR结果显示：在相应的位置可看到清晰的特异性条带，说明Lewis肺癌肿瘤组织高表达EGFR mRNA；③注射反义探针后2h移植瘤显影，肿瘤/对侧肢体放射性比值，即靶与非靶比值(target to nontarget ratios, T/NT比值)随时间推移而增加，12h以后两组T/NT比值(反义组12h：6.05±0.18，18h：7.06±0.18；无义组12h：1.29±0.12，18h：1.02±0.05)差异均有统计学意义(12h：t=53.392，P＜0.05；18h：t=76.657，P＜0.05)，其中18h时肿瘤显像最清晰。在显像早期，无义探针在移植瘤内有轻度浓聚，在6h以后肿瘤的浓聚程度下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:99Tcm-EGFR mRNA反义PNA标记过程简便，生物学性能良好，即刻标记率高，无需纯化，可直接用于动物体内显像实验，并且能够在EGFR mRNA高表达的Lewis肺癌肿瘤组织内特异性聚集，较稳定地滞留在瘤体内，对肿瘤组织有良好的靶向作用，为肿瘤基因反义显像提供了较好的实验依据，有希望用于肿瘤的早期、特异性诊断。(本文来源于《河北医科大学》期刊2012-03-01）
赵新明,任秀春,戴萌,刘亚丽,张敬勉[6]（2011）在《~(99)Tc~m标记c-erbB-1 mRNA反义肽核酸及Lewis肺癌小鼠显像》一文中研究指出目的通过制备~(99)Tc~m标记的c-erbB-1 mRNA反义肽核酸(PNA)探针并进行Lewis肺癌小鼠显像,初步探讨该基因显像的可行性。方法化学合成c-erbB-1 mRNA的反义、无义PNA,在5′端连上4个氨基酸(Gly-(D)Ala-Gly-Gly),形成1个(本文来源于《中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编》期刊2011-08-24）
马超,匡安仁,黄蕤,唐恭顺[7]（2011）在《阴离子长循环脂质体在瘤鼠体内分布和反义显像》一文中研究指出建立乳腺癌模型,了解游离的131I-bcl-2/bcl-xlASON(FA)以及阴离子长循环脂质体包裹的131I-bcl-2/bcl-xlASON(NA)在瘤鼠体内组织分布。SD大鼠尾静脉注射N-甲基亚硝基脲溶液,诱导建立乳腺癌模型。NA和FA分别静脉注射后0.5、1、2、3、4、6、12和24 h,断头处死瘤鼠,取其组织器官测量,计算每克组织放射性计数占注入剂量的百分数(%ID/g)。计算瘤鼠肿瘤/血液或肿瘤/肌肉比值。分别静脉注射0.4 mCi NA1、31I-错配序列阴离子长循环脂质体(NS)和131I-无义序列阴离子长循环脂质体(NN)后0.5、1、2、3、6和12 h,进行瘤鼠全身前后位静态显像。MNU致瘤时间为(96±1.2)d,SD大鼠致癌率为70%(90/130),组织学类型为乳腺癌。注射后10 h,NA在瘤鼠肿瘤组织、肝和脾内的分布分别为(6.23±0.23)%ID/g、(12.00±0.26)%ID/g和(18.25±1.33)%ID/g。肿瘤/血液和肿瘤/肌肉比值分别为6.29±0.76和10.55±0.68。NA注射后10 h,肿瘤显示最佳。NS和NN注射组瘤鼠肿瘤显示不清。NA体内清除率低,体内循环时间长,肿瘤部位浓聚增加,提示NA很可能提高放射反义治疗疗效。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2011年02期）
戴萌[8]（2011）在《~(99)Tc~m-survivin mRNA反义肽核酸在人肺癌A549荷瘤裸鼠体内分布及显像研究》一文中研究指出目的:通过制备~(99)Tc~m标记的survivin mRNA反义肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)探针,并进行人肺癌A549荷瘤裸鼠的体内分布及基因显像实验,观察反义探针在荷瘤裸鼠体内分布情况及在肿瘤组织部位的放射性聚集程度,探讨基因显像早期诊断肿瘤的可行性,为核素基因显像技术在肿瘤早期诊断方面进一步临床性研究提供实验室依据。方法:选用survivin mRNA的第240-251位寡核苷酸片段为靶序列,利用化学合成法合成与其互补的反义肽核酸片段5’-CCCAGCCTTCCA-3’,于5’端连上4个氨基酸组成的短肽结构(Gly-(D)-Ala-Gly-Gly-),形成1个类似N4结构的强螯合基团,为消除空间阻碍,引入1个γ-氨基丁酸(4-aminobutyric acid,Aba)作为隔离物,然后利用配体交换法进行~(99)Tc~m标记。以同样方法对无义肽核酸片段5’-TACCGTCTGCGA-3’进行~(99)Tc~m标记。采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)对标记物进行鉴定,测定标记物的保留时间及放射性化学纯度。以纯乙腈为展开剂,分别用聚酰胺凝胶膜和快速硅胶纸两种快速薄层层析法(instant thin-layer chromatography, ITLC)对标记物即刻标记率进行综合测定,并测定与人新鲜血清37℃保温24小时后的标记率,检测探针的体外稳定性。采用贴壁法培养人肺癌A549细胞,收获对数生长期的细胞,制备成1×107个/0.2ml生理盐水的单细胞悬液,接种到4周龄的雌性裸鼠的右前肢皮下,约14天后成瘤,待肿瘤直径长至1～1.5cm时,选取肿瘤形态规则,色泽红润,中心无坏死的荷瘤裸鼠纳入实验。利用Rt-PCR实验检测人肺癌A549细胞及肿瘤组织中survivin基因mRNA的表达情况。细胞摄取率及滞留率实验初步探讨反义肽核酸在肺癌A549细胞中的药代动力学作用。抽取30只荷瘤裸鼠,随机分为反、无义体内分布组,每组又分为1、2、4h叁个亚组,各5只,每只荷瘤裸鼠经尾静脉注射~(99)Tc~m标记的survivin mRNA反义或无义PNA (740kBq/0.1ml)后,分别于1、2、4h将对应各组荷瘤裸鼠眼静脉采血,处死并解剖各组织或脏器,分别测定血液、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、胃、肠道、脑、骨骼、肌肉及肿瘤等组织的重量及放射性计数,并测定相同时刻标准源的放射性计数,计算每克组织中放射性计数占标准源总放射性计数的比值(%ID/g),计算肿瘤组织与肌肉组织的%ID/g的比值(tumor to muscle ratios, T/M)。抽取A549荷瘤裸鼠10只,随机分为反、无义两组,各5只,每只荷瘤裸鼠经尾静脉注射~(99)Tc~m标记的survivin mRNA反义或无义PNA(37MBq/0.1ml)后,进行1、2、4h上机显像,观察两组间显像的差异。利用感兴趣区技术(region of interest,ROI)测得肿瘤组织与对侧正常组织的放射性计数的比值(target to nontarget ratio, T/NT)。所有计量资料均以x±s表示,采用SPSS13.0统计学软件对组间数据进行两个样本的成组t检验,P<0.05统计学差异有显着性。结果:~(99)Tc~m-survivin mRNA反义PNA经HPLC检测标记物呈单峰,保留时间约为12分钟,与survivin mRNA反义PNA的紫外峰保留时间基本一致。两种ITLC法综合检测~(99)Tc~m-survivin mRNA反义PNA即刻标记率为95.48%±1.92%(n=5),与人新鲜血清37℃保温24小时后标记率仍>85%。无义PNA即刻标记率及体外稳定性与反义PNA基本相同。Rt-PCR实验结果表明人肺癌A549细胞及肿瘤组织中均高表达survivin基因。细胞摄取实验结果显示A549细胞对两种肽核酸的摄取无明显统计学差异,肿瘤细胞与反义肽核酸在相互作用1h后有一个较稳定的平台期。3h内细胞对两种肽核酸都有一定的清除作用,无义组较反义组清除快,两组在60及120分钟时细胞滞留率差异有统计学意义。荷瘤裸鼠体内分布结果表明~(99)Tc~m-survivin mRNA反义PNA在肿瘤组织内分布明显高于肌肉组织。此外,肾脏和肝脏中的放射性分布最高。反义组1、2、4h肿瘤组织的%ID/g分别为2.51±1.20、1.52±0.16、1.35±0.27。计算反义、无义两组各时刻T/M值,组间结果显示4h时差异有统计学意义(t=2.506, p=0.041)。反义基因显像显示~(99)Tc~m -survivin mRNA反义PNA在肿瘤部位特异性聚集,随着时间的延长,聚集程度也相对逐渐增加,4h时肿瘤组织部位显像最清晰。利用ROI技术测得的1、2、4h小时T/NT值分别为2.70±0.28、3.44±0.35、4.21±0.63。此外荷瘤裸鼠腹腔有一定的放射性聚集。无义PNA在肿瘤部位中仅稍有放射性核素聚集,显像过程中聚集程度变化不明显。4h时反义、无义两组间T/NT值差异有统计学意义(t=2.918, p=0.019),与体内分布中T/M比值结果相吻合。结论:~(99)Tc~m-survivin mRNA反义PNA即刻标记率高,体外稳定性好,无需纯化即可用于动物模型中体内显像,可被高表达survivin基因的人肺癌A549细胞特异性摄取,荷瘤裸鼠反义基因显像结果达到了预期的实验目的,反义肽核酸在肿瘤组织内特异性聚集,与体内分布结果一致,显示了放射性核素基因显像技术早期、特异性诊断肿瘤的可行性,为肿瘤核素基因显像技术进一步临床性研究提供实验室依据。(本文来源于《河北医科大学》期刊2011-03-01）
刘亚丽[9]（2011）在《~(99)Tc~m-survivin mRNA反义肽核酸基因显像在肿瘤与炎性反应模型中的对比研究》一文中研究指出目的:制备99Tcm标记的survivin mRNA反义肽核酸(peptic nucleic acid,PNA)探针,对比其在荷A549肺癌裸鼠模型及金黄色葡萄球菌炎性反应小鼠模型中的体内生物学分布及显像情况,探讨99Tcm-survivin mRNA反义肽核酸在肿瘤早期特异性诊断中的价值。方法:以survivin mRNA 240～251位碱基序列为靶序列人工合成survivin mRNA反义PNA(5′-CCCAGCCTTCCA-3′),在其5′端连接上四个氨基酸Gly-(D)Ala-Gly-Gly-,并引入一个γ-氨基丁酸(4-aminobutyric acid, Aba )作为隔离物消除空间阻碍,形成结构为Gly-(D)Ala-Gly-Gly-Aba-5′-CCCAGCCTTCCA-3′的survivin反义PNA化合物,再利用配体交换法对其进行99Tcm标记。用聚酰胺凝胶薄膜法和高效液相色谱仪(high performance liquid chromatography,HPLC)测定其标记率及稳定性。培养大量人肺腺癌细胞(A549),取对数生长的A549细胞用生理盐水制成细胞悬液,注射于每只BALB/c裸鼠的右前肢背侧皮下,SPF级(specific pathogen free,无特定病原体)环境下饲养,成瘤后约4～5周肿瘤长至直径约1～1.5cm,制成荷瘤裸鼠模型。取长势良好的金黄色葡萄球菌菌落制成生理盐水悬液,注射于每只昆明小鼠的右前肢背侧肌肉,48h后小鼠注射部位出现红、肿、活动障碍,制成炎性反应小鼠模型。选取瘤体大小相近,形态规整的20只荷瘤裸鼠,按随机数字法将其分为4组,每组5只。随机选取其中3组(1h组、2h组、4h组),每只裸鼠经尾静脉注入0.1ml约555KBq(15μCi)99Tcm-survivin mRNA反义PNA,分别于注射后1h、2h、4h眼静脉采血后,脱颈椎处死,取心、肝、肺、脾、肾、小肠、胃、骨骼、肌肉、肿瘤组织等称重后进行γ计数,同时测量两个标准源的放射性计数。计算每克组织的百分注射剂量率(percentage activity of injection dose per gram of tissue,%ID/g)及肿瘤/肌肉(target to non- target,T/NT)比值。剩余1组(5只),每只裸鼠经尾静脉注入0.1ml约37MBq (1mCi) 99Tcm-survivin mRNA反义PNA分别于1、2、4h行SPECT静态显像。同样的方法处理炎性反应组昆明小鼠。采用SPSS 13.0软件进行统计学处理。所有计量资料结果以x±s表示,两组间计量资料比较采用两个独立样本的成组t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果:99Tcm-survivin mRNA反义PNA的即刻标记率为(94.89±2.73)%,标记化合物在室温下放置4h后标记率无明显变化,标记率仍>95%。标记物经HPLC测定呈单峰。99Tcm-survivin mRNA反义PNA在荷瘤裸鼠的肝脏、肾脏中放射性分布最高,其次是脾、肠道、肿瘤;其它组织中放射性分布较少。在炎性反应小鼠体内亦是肝脏、肾脏放射性分布最高;其次是脾、肠道、胃;其它组织中放射性分布较少。经尾静脉注射99Tcm-survivin mRNA反义PNA后0.5h即可见肿瘤部位放射性聚集,随时间延长浓聚程度增强,至4h时显像较清晰,而炎性反应部位各时间点显影均较淡。将99Tcm-survivin mRNA反义PNA在肿瘤组与炎性反应组各时间点T/NT值进行比较,结果显示:肿瘤组各时间点T/NT值均高于炎性反应组,其中注射后4h肿瘤组与炎性反应组T/NT比值分别为3.69±1.13和2.03±0.47,差异有统计学意义(t=3.01,p=0.02)。结论:99Tcm-survivin mRNA反义PNA具有良好的生物学的性能,可在荷瘤裸鼠体内与高表达survivin基因的人肺癌A549肿瘤组织特异性结合,在炎性反应动物模型中摄取不明显,99Tcm-survivin mRNA反义肽核酸基因显像可通过其在肿瘤组织中的特异性浓聚区分肿瘤与炎性反应,为肿瘤的特异性诊断提供了一种可能的新方法。(本文来源于《河北医科大学》期刊2011-03-01）
李贵平,陈旭坚,黄凯,池晓华[10]（2009）在《肿瘤预定位反义显像的应用研究和进展(文献综述)》一文中研究指出放射性核素标记抗肿瘤单抗的放射免疫显像(Radioim-munoimaging,RII)和治疗(Radioimmunotherapy,RIT)是当今肿瘤核医学研究热门领域之一。近年来,随着高亲和力单抗的问世,核素标记技术的改进,显像技术的发展等,该领域已(本文来源于《放射免疫学杂志》期刊2009年03期）
反义显像论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的：研究脂质体介导放射性核素99Tcm标记的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）mRNA反义肽核酸(peptidenucleic acid, PNA)的方法，测定该反义分子探针的标记率，评价其体内外稳定性，并探讨脂质体介导对99Tcm标记EGFR mRNA反义PNA体外靶细胞摄取、荷瘤裸鼠体内生物学分布及特异性显像的影响。探索促进99Tcm标记EGFR mRNA反义肽核酸分子探针进入靶细胞的方法，进一步提高该核素分子探针肿瘤基因显像的效果。方法：以EGFR mRNA（genbank序列号：NM_201283.1）的第503-519碱基序列（17bp）为靶序列，设计反义PNA5'-AATGAGGACATAACCAG-3'，于其5'端连接由Gly-(D)-Ala-Gly-Gly4个氨基酸形成并且能与99Tcm进行强力螯合的类似N4结构的短肽，最后在PNA与该结构之间引入可以消除空间阻碍的隔离物γ-氨基丁酸(4-aminobutyric acid, Aba)，完成反义PNA分子的合成。因PNA不带电荷，为了使反义PNA分子带负电荷以利于脂质体包裹，再合成与上述反义PNA3'末端8个碱基互补的短寡核苷酸链，即5′-CTGGTTAT-3′结构。利用碱基互补配对原则将带有短肽螯合功能的EGFR mRNA反义PNA与部分互补寡核苷酸杂交，使反义PNA分子带负电荷后进行99Tcm标记，标记后以脂质体包裹反义探针。用反相高效液相色谱法(reverse-phase highperformance liquid chromatography, RP-HPLC)鉴定脂质体介导及非介导的99Tcm标记EGFR mRNA反义PNA（99Tcm-EGFR-PNA）的标记率。并将两者于37℃条件下分别在生理盐水及人新鲜血清中孵育1、2、4、6、12、24h，用RT-HPLC测定各自在不同介质及不同时间点的放射化学纯度，以检测其体外稳定性。并采用静置贴壁法培养人卵巢癌SKOV3细胞及人乳腺癌MDA-MB-435S细胞，收集对数生长期细胞，按每只裸鼠1×1011/L的浓度接种0.2ml到无特异病原体级裸鼠右前肢外侧皮下，当瘤体直径约1cm时，选取肿瘤形态规则、色泽红润、大小无明显差异的荷瘤裸鼠用于实验。用RP-HPLC测定EGFR高表达的SKOV3细胞荷瘤裸鼠注射脂质体介导及非介导分子探针后2-3h时的尿液中分子探针的放化纯，以监测分子探针体内稳定性。研究脂质体介导与非介导的分子探针在EGFR高表达的SKOV3细胞及EGFR低表达的MDA-MB-435S细胞的摄取以及滞留情况，以了解探针的药代动力学。取32只SKOV3细胞荷瘤裸鼠，利用随机数字表法分为2组，每组16只。各组分别注射脂质体介导及非介导99Tcm-EGFR-PNA。取16只MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠，尾静脉注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA。在各组内按随机数字表法分别于注药后1、2、4、6h各取4只动物模型，眼静脉取血后，颈椎脱臼处死，取各脏器分别测定其放射性计数并称重，测定3个标准源的放射性计数，计算每克组织中放射性计数与标准源（3个标准源均值）的比值即%ID/g以及肿瘤与肌肉组织的%ID/g比值(tumor to muscle, T/M)。比较各时间点脂质体介导对分子探针在动物模型体内分布的影响。取10只SKOV3细胞荷瘤裸鼠，利用随机数字表法分为2组，每组5只。各组分别注射脂质体介导及非介导的99Tcm-EGFR-PNA。取5只MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠，尾静脉注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA。均于注药后1、2、4、6、8、10h行静态显像，观察各组内随时间变化肿瘤部位放射性浓聚的变化，利用感兴趣区技术测定肿瘤部位放射性计数与对侧正常部位同等区域放射性计数的比值（target to nontarget ratio, T/NT），并比较3组间显像的差异。所有实验数据均采用SAS9.1统计学软件进行统计学分析，实验数据以均数±标准差表示，对数据进行两样本t检验（或t'检验）或Wilcoxon秩和检验，以P<0.05为差异有统计学意义。结果：经RP-HPLC法检测，脂质体介导及非介导的99Tcm-EGFR-PNA放射及紫外峰几乎均为单峰，放射峰保留时间分别为19min、12.5min，6h内标记率分别为（95.17±0.55）%(n=6)、（98.75±1.09）%(n=6)，均较高，满足体内显像要求，无需进一步纯化。于37℃水浴条件下，在生理盐水及人新鲜血清中各孵育1、2、4、6、12和24h，6h内分子探针放射化学纯度均在90%以上，且放射峰位置较稳定，未见漂移。RP-HPLC鉴定注射了脂质体介导或非介导分子探针的荷瘤裸鼠的尿液，其放射峰出现时间点均以标记物走样时的保留时间点为主，主峰前出现一小代谢物峰，但并非游离99TcmO-4。尿液中脂质体介导及非介导的分子探针的放化纯分别为89.3%和90.0%。脂质体介导明显提高了EGFR高表达的SKOV3细胞对分子探针的摄取率（t′=47.11-58.67，Z=2.80，均P <0.05），最高可达8.8倍。加入脂质体后细胞对反义探针的摄取高峰时间由不加脂质体时的6h延迟至12h。EGFR高表达的SKOV3细胞对脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA的细胞摄取率明显高于MDA-MB-435S细胞对其摄取率（t=20.54-30.16，t′=9.45，Z=2.80，均P﹤0.05）。脂质体介导后人卵巢癌SKOV3细胞对反义探针滞留率增加（t′=7.25-11.55，Z=2.80，均P<0.05）。体内生物分布实验显示，在EGFR高表达SKOV3细胞荷瘤模型组，探针主要分布在肿瘤、肝脏、肾脏，肿瘤组织放射性计数明显高于瘤体对侧肌肉组织的放射性计数，并且随时间延长，逐渐增加。脂质体介导可以明显提高不同时刻T/M值（t=11.24, t′=3.96-11.94,均P<0.05）。并且注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA后SKOV3细胞荷瘤裸鼠各时间点的T/M值明显高于MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠的T/M值（t=9.69，11.84，t′=6.2，6.23，均P<0.05）。体内显像实验显示，SKOV3细胞荷瘤裸鼠注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA1h后肿瘤组织即有明显放射性核素浓聚，随时间延长浓聚程度增加，6h达摄取高峰，之后放射性核素浓聚程度轻度减低。SKOV3细胞荷瘤裸鼠非脂质体介导组，注药后1h肿瘤部位出现轻度摄取,6h达摄取高峰，之后放射性核素浓聚程度快速减低。并且脂质体介导可以明显增加各时间点T/NT值（t=3.96，t′=12.65-14.69，Z=2.83-5.29，均P<0.05）。MDA-MB-435S细胞荷瘤裸鼠注射脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA后，在显像时间内肿瘤部位无明显放射性核素浓聚。结论：脂质体介导99Tcm-EGFR-PNA标记率高，体内外稳定性好，能够被EGFR高表达的细胞特异性摄取，可用于EGFR高表达肿瘤体内特异性显像。脂质体可以明显促进99Tcm-EGFR-PNA进入细胞，提高EGFR高表达肿瘤的显像效果，有助于肿瘤基因显像的诊断。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反义显像论文参考文献
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