导读:本文包含了心肌细胞原代培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:心肌,细胞,乌头,表观,凋亡,基因治疗,小鼠。
心肌细胞原代培养论文文献综述
邝美丹,陈海霞,廖静,何汶俊,陈奕霖[1]（2019）在《新生大鼠右心室心肌细胞的原代培养及鉴定》一文中研究指出目的:建立一种简便、重复性好的新生大鼠右心室心肌细胞原代培养方法,为右心疾病及肺循环右心相关研究提供可靠的细胞工具。方法:采用出生1～3 d无特定病原体级,SD新生大鼠12只,无菌操作开胸取心脏后,在体视显微镜下分离右心室,用胰蛋白酶与Ⅱ型胶原酶联合消化法消化右心室心肌组织,差速贴壁法纯化右心室心肌细胞。用0.4%台盼蓝染色检测右心室心肌细胞存活率,在倒置显微镜下观察右心室心肌细胞的生长特点并记录细胞搏动频率。利用cTnT对右心室心肌细胞进行免疫荧光染色鉴定细胞纯度。结果:采用胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶联合消化右心室心肌组织及差速贴壁法分离所得右心室心肌细胞存活率为(94.96±2.13)%。培养的心肌细胞24 h大部分贴壁并伸出伪足,少数细胞出现自发性搏动;48 h后细胞基本全部贴壁,伪足延长,出现局部同步化搏动;72 h后细胞伪足继续延长并形成细胞簇,搏动基本同步化;96 h后细胞连接成片,呈现完全同步化搏动,搏动频率为(121.2±10.7)次/min。用cTnT染色培养的细胞纯度达(96.71±2.66)%。结论:体视显微镜下分离右心室结合复合酶消化法能成功培养出纯度高、功能较好的新生SD大鼠右心室心肌细胞。(本文来源于《心肺血管病杂志》期刊2019年09期）
王佳南,林建安,杜苗苗[2]（2018）在《乳鼠心肌细胞原代培养方法的再改良》一文中研究指出目的探求优化的原代培养乳鼠心肌细胞方法。方法 2017年6月1日—2017年6月2日选取泉州市医学高等专科学校提供6只出生24 h内Wistar乳鼠,采用2种不同消化心肌组织的方法,对照组予0.125%胰酶+0.05%I型胶原酶+0.1%Ⅱ型胶原酶逐次消化心肌组织;试验组予0.05%I型胶原酶+0.1%Ⅱ型胶原酶消化数次后再单予0.125%胰酶快速消化心肌组织;比较两组取得的心肌细胞数量以及存活率,免疫荧光测肌钙蛋白鉴定纯度。结果 2种方法均得到心肌细胞数量多[对照组(103.3±4.4),试验组(105.8±5.0)],差异无统计学意义(t=-0.911,P=0.384);细胞即刻存活率试验组明显高于对照组,试验组达91.87%,对照组即刻存活率仅68.07%,差异有统计学意义(χ~2=81.0,P=0.025)。试验组存活率明显高于对照组。结论再改良方法提取心肌细胞,可获得存活率高、活力好的心肌细胞。(本文来源于《中外医疗》期刊2018年33期）
王晓霞,刘天龙,刘晶,刘小玲,张勇[3]（2018）在《黄芪甲苷对D-半乳糖诱导原代培养心肌细胞凋亡的保护作用及机制研究》一文中研究指出目的:研究黄芪甲苷对D-半乳糖(D-gal)诱导原代培养心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法:分离和培养Wistar乳鼠原代心肌细胞,将细胞分为正常对照组(无血清DMEM高糖培养基)、D-gal组(含5 g/L D-gal的无血清DMEM高糖培养基)和黄芪甲苷低、中、高质量浓度组(分别先以含25、50、100μg/m L黄芪甲苷的无血清DMEM高糖培养基培养1 h,然后换为含有相应质量浓度黄芪甲苷和5 g/L D-gal的无血清DMEM高糖培养基)。采用CCK-8法检测培养48 h后细胞活性,分别采用Hoechst染色法(培养24 h)和流式细胞术(培养48 h)考察细胞凋亡情况,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测培养24 h后细胞中凋亡相关因子(Bcl-2、Bax、Caspase-3)和心房钠尿肽(ANP)m RNA表达水平。结果:与正常对照组比较,D-gal组细胞的活性以及细胞中Bcl-2 m RNA水平、Bcl-2/Bax比值降低,细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3、ANP m RNA水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与D-gal组比较,黄芪甲苷各浓度组细胞的活性以及细胞中Bcl-2 m RNA水平、Bcl-2/Bax比值均升高,细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3、ANP m RNA水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且具有一定浓度依赖性。结论:黄芪甲苷对D-gal诱导的原代心肌细胞凋亡具有一定的保护作用,其机制可能与升高细胞中Bcl-2/Bax比值和下调细胞中Caspase-3、ANP m RNA的表达有关。(本文来源于《中国药房》期刊2018年09期）
马艳霞,郭政[4]（2017）在《去甲肾上腺素对原代培养大鼠心肌细胞的凋亡率及相关蛋白的影响》一文中研究指出目的观察去甲肾上腺素(NE)对体外培养的原代新生大鼠心肌细胞凋亡率及相关凋亡蛋白的影响。方法选用出生1-3 d的SD大鼠建立原代培养新生大鼠心肌细胞模型。将培养72 h的心肌细胞随机分为对照组(未使用任何药物)与不同浓度NE组(分别采用10~(-8),10~(-7),10~(-6),10~(-5),10~(-4)mol/L NE),每组3孔(n=3)。加药后3 h采用流式细胞术测定心肌细胞凋亡率;采用Western blot检测Cry AB及Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax比值的变化。结果与对照组比较,10~(-8),10~(-7),10~(-6),10~(-5),10~(-4)mol/L NE作用下心肌细胞凋亡率均出现显着升高(均P<0.05);Cry AB表达下降(均P<0.05),Bcl-2表达下降(除10-8mol/L组外均P<0.05)、Bax表达升高(除10-7mol/L组外均P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(均P<0.05)。结论去甲肾上腺素可能通过降低Cry AB、Bcl-2表达,升高Bax表达,降低Bcl-2/Bax比值,诱导体外原代培养大鼠心肌细胞的凋亡率增加。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2017年12期）
赵勇,刘晓伟,林治宇,马雷,徐振宇[5]（2017）在《新生SD大鼠心肌细胞的原代培养》一文中研究指出目的:探讨乳鼠原代心肌细胞的培养方法,简便稳定地获得高存活率和纯度的心肌细胞。方法:无菌条件下取1~3d内新生SD大鼠的心室肌组织,首先用胰蛋白酶消化心肌组织一次,再用I型胶原酶短时多次消化,然后应用差速贴壁分离法和化学试剂抑制法纯化心肌细胞。对心肌细胞进行形态学观察、存活率检测和免疫荧光鉴定。结果:台盼蓝染色检测心肌细胞存活率在95%以上。培养24h后的心肌细胞已贴壁生长,呈梭形及多边形,有自发性搏动,48h后细胞伪足相互交织成网,进而形成细胞簇,呈现同步性搏动。免疫荧光鉴定心肌细胞纯度达96%。结论:此种方法能够可靠地获得较高存活率和纯度的原代乳鼠心肌细胞。(本文来源于《黑龙江医药科学》期刊2017年06期）
秦士贞[6]（2017）在《锰对原代培养鸡胚心肌细胞的抗热应激效应及其分子机制研究》一文中研究指出本论文以原代培养肉鸡鸡胚心肌细胞为模型进行了五个体外试验,研究锰对鸡胚心肌细胞的抗热应激效应及其分子机制,为缓解热应激对肉鸡等家禽的负面影响提供系统、深入的科学理论依据。试验一:构建原代鸡胚心肌细胞模型并测定心肌细胞持续活力。运用细胞培养技术、通过显微镜观察细胞形态以及经免疫组化鉴定心肌细胞,成功构建了原代鸡胚心肌细胞模型。通过测定细胞培养液中的酶活力,间接评价鸡胚心肌细胞活力,为后续试验提供活力较好且稳定的细胞模型奠定基础。模型构建方面,鸡胚心肌组织用0.12%胶原酶II 37℃消化8 min,800 r/min离心5 min分离细胞,收集细胞并用培养液重悬,经2次差速贴壁纯化后的心肌细胞接种在6孔培养板上,并在40℃、95%空气和5%CO2条件下培养。培养的原代鸡胚心肌细胞生长快速、活跃,培养24 h后可观察到心肌细胞有明显的自律性搏动,72 h后达到95%的汇合,可作为研究鸡胚心肌细胞体外模型。心肌细胞持续活力测定方面,细胞培养液中的肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷草转氨酶(AST)酶活均受到培养时间的影响(P<0.05)。CK和LDH酶活有着相似的趋势,在第6天酶活最低,之后逐渐升高。AST酶活随培养时间的延长而增加且在第9天达到最大。心肌细胞的活力可持续6天,之后酶活随培养时间的延长而降低。试验二:研究热应激对原代培养鸡胚心肌细胞的影响,旨在确定原代培养鸡胚心肌细胞受到热应激影响的最佳时间点。采用2×5两因子完全随机设计。试验设2个培养温度(40℃常温和44℃高温)和5个作用时间(1、2、4、6和8 h),共10个处理,每个处理6个重复。在高温条件下,鸡胚心肌细胞培养液中CK、LDH和AST的酶活性显着(P<0.05)升高,表明心肌细胞结构的完整性发生了改变。在高温条件下,与常温相比,高温极显着的(P<0.05)上调了心肌细胞HSF1、HSF2 mRNA、HSP70和HSP90基因表达。心肌细胞中HSP70和HSP90 mRNA的表达先升高、后降低,且分别在2 h和4 h时达到最大。HSP70和HSP90蛋白表达随热应激时间的延长而升高。面对高温热应激,心肌细胞HSP70和HSP90 mRNA比其相应的蛋白表达反应更灵敏。以上结果表明,HSP70和HSP90基因在体外培养原代鸡胚心肌细胞内的表达对热应激敏感,在鸡胚心肌细胞对抗或缓解热应激损伤中发挥重要作用。最后,热应激处理2 h和4 h为心肌细胞最佳热应激持续时间点,为后续试验四热应激处理时间点提供了试验依据。试验叁:研究锰水平对原代培养鸡胚心肌细胞mnsod活性及其基因表达的影响,旨在确定原代培养鸡胚心肌细胞最佳锰加添水平及孵育时间。采用5×3两因子完全随机试验设计,设5个锰添加水平(0、0.5、1、2和4mm氯化锰形态的锰)与3个锰孵育时间(12、24和48h),共15个处理,每个处理6个重复。锰水平和孵育时间对鸡胚心肌细胞mnsod酶活有极显着的互作效应(p<0.05)。在12h时,锰水平对mnsod酶活性没有影响(p>0.05),而在24h和48h时,与对照组和0.5mmmn相比,1mmmn显着提高了mnsod酶活性(p<0.05)。mnsodmrna表达水平上,锰和孵育时间均提高了mnsodmrna基因的表达(p<0.05)。与对照组相比,添加1mm锰显着(p<0.05)提高了心肌细胞mnsodmrna表达。与作用12h相比,作用24和48h均上调了(p<0.05)mnsodmrna基因的表达。以上结果表明,在鸡胚心肌细胞中,锰诱导的mnsod基因表达的调控可能发生在转录和翻译后水平,或者通过修饰合成的mrna和蛋白的稳定性而发挥作用。结合上述结果,选取1mm锰添加水平并孵育48h,为试验四心肌细胞锰处理浓度和孵育时间提供了试验依据。试验四:研究锰对原代培养鸡胚心肌细胞的抗氧化性能及热休克蛋白/因子的影响,以揭示锰对鸡胚心肌细胞的抗热应激效应及其分子机制。试验采用2×3×2叁因子完全随机设计。设2个鸡胚心肌细胞培养温度(40℃常温和44℃高温)、3个锰处理(不添加锰、添加1.0mm氯化锰形态的锰以及1.0mm中等络合强度有机锰形态的锰)与2个热应激处理时间点(2h与4h),共12个处理,每个处理6个重复。高温热应激显着提高了(p<0.05)心肌细胞mnsod酶活,mnsod、hsp70、hsp90、hsf1、hsf2和hsf3mrna表达,hsp70蛋白表达,表明热应激引起了心肌细胞氧化损伤。与对照组相比,细胞培养液中加无机锰和有机锰均提高了(p<0.05)心肌细胞mnsod酶活性,且有机锰显着的(p<0.05)高于无机锰。在mnsod基因表达方面,锰源与培养温度有极显着(p<0.05)的互作效应。在常温条件下,无机锰和有机锰均提高了(p<0.05)心肌细胞mnsod基因表达。在高温热应激条件下,与对照组和无机锰组相比,有机锰显着的(p<0.05)上调了心肌细胞mnsodmrna表达。加锰特别是有机锰显着的(p<0.05)增加了mnsod蛋白表达。锰源与培养温度的交互作用显着的(p<0.05)影响了hsp70基因的表达和hsp90mrna表达。在常温条件下,锰对hsp70基因表达和hsp90mrna表达无影响(p>0.05)。在高温热应激条件下,无机锰和有机锰均下调了(p<0.05)hsp70和hsp90mrna表达,且有机锰的下调程度显着(P<0.05)高于无机锰。不论无机锰还是有机锰均降低了(P<0.05)HSP70蛋白表达。然而,加锰显着地提高了(P<0.05)HSP90蛋白表达。以上结果表明,细胞培养液中加锰特别是中等络合强度有机锰可提高心肌细胞抗氧化能力,降低热应激引起的氧化损伤。试验五:研究锰对原代培养鸡胚心肌细胞表观遗传的影响。试验设计同试验四。加无机锰和有机锰均降低了(P<0.05)心肌细胞MnSOD和HSP70启动子区DNA甲基化水平,可能与其MnSOD mRNA高表达有关。高温组上调了(P<0.05)心肌细胞gga-miR-34c-5p,gga-miR-29c-3p表达,下调了(P<0.05)gga-miR-10a-5p,gga-miR-10b-5p,gga-miR-125b-5p表达。无机锰和有机锰均上调了(P<0.05)心肌细胞ggamiR-142-5p,gga-miR-34b-5p,gga-miR-34c-5p,gga-miR-29c-3p,gga-mi R-10a-5p,gga-miR-10b-5p,gga-mi R-125b-5p表达。以上结果表明,锰可通过修饰特定基因启动子区DNA甲基化程度以及相应的miRNA表达以调控靶基因的表达及其相关通路来缓解高温应激造成的氧化损伤。综上所述,本研究发现心肌细胞培养液中加锰、特别是中等络合强度有机锰,可提高心肌细胞抗氧化能力,有效缓解热应激引起的氧化损伤,而且锰可引起心肌细胞特定基因启动子区DNA甲基化和miRNA表观遗传变化,并调控相应的功能基因。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2017-06-01）
张燕[7]（2016）在《基于pcDNA 3.1(+)/VEGF_(121)转染干预体外原代培养心肌细胞的机制探讨以及7T MRI多技术联合量化重组质粒转染SD大鼠心梗模型的实验研究》一文中研究指出冠状动脉闭塞引起相应供血的心肌严重缺血坏死称之心肌梗死(Myocardial infarction,MI),其主要机制体现在心肌细胞凋亡,成纤维细胞增殖以及血管内皮细胞损伤等异常改变,其中心肌细胞凋亡在MI过程中发挥重要作用;当对应供血的心肌缺血区域称为危险区(Area at risk,AAR),心梗后心肌如未及时恢复血供,可导致心肌由心内膜下向心外膜下发展,最终导致心肌细胞大量丧失,形成不可逆的心肌梗死区,称之为心梗核心区(myocardial infarction core,MIC),最终发生心力衰竭。因此,寻找心肌梗死的关键机制以及如何安全、准确地早期评估及有效治疗缺血性心肌病,仍是目前迫切需要解决的难题。近年来基因治疗缺血性心肌病逐渐成为热点。VEGF是一种具有内皮细胞特性的有丝分裂原,既往研究主要集中在在其"治疗性血管新生"的作用,治疗方式主要蛋白治疗及基因治疗;而心肌细胞凋亡在MI进程中发挥重要作用,其内在影响机制仍有待阐述。选择合适的治疗手段及干预途径很重要,心脏作为重要特殊脏器,如何检测病理生理变化及干预疗效亦重要。心脏MR已经成为评价心脏结构及功能的无创检查的"金标准",其MR多技术联合成像,Cine-MRI可提供心脏功能检测,T2-mapping以及Late Gadoinium Enhancement(LGE)技术联合应用基本可较准确地反应坏死心肌面积危险区AAR及梗死核心区,可提供心脏形态、功能、活性、及血流动力学等全方位信息。本研究基于pcDNA 3.1(+)/VEGF121转染干预体外原代培养心肌细胞的机制探讨以及7T MRI多技术联合量化重组质粒转染SD大鼠心梗模型的实验研究,分为叁个部分:第一部分pcDNA 3.1(+)/VEGF121转染体外培养的原代心肌细胞的表达及作用机制研究目的:pcDNA3.1(+)/VEGF121转染体外培养的原代心肌细胞活性验证,以及干预缺氧心肌细胞凋亡模型的内在机制探讨。方法:MTT法确定pcDNA3.1(+)/VEGF121时效及量效关系,以Wester-blot明确其转染心肌细胞后VEGF蛋白表达。实验分为6组,以工具药CdC12(钙离子通道抑制剂)、NPS2390(CaSR受体抑制剂)以及Calpeptin(钙蛋白酶抑制剂)干预。以MTT法和LDH检测心肌细胞损伤,TUNEL、ANNEXINV-FITC/PI染色计数和caspase-3活性检测分析心肌细胞凋亡,Western-blot分析CaSR、calpain、AIF及tBid蛋白表达。MTT法验证其对成纤维细胞的增殖影响。结果:转染组心肌细胞VEGF表达增高,较模型组显着降低caspase-3活性,可不同程度减低CaSR、calpain、AIF及tBid的蛋白表达。NPS2390(CaSR受体抑制剂)以及Calpeptin(钙蛋白酶抑制剂)干预组caspase-3活性降低,下调calpain和tBid、AIF的蛋白表达量,CdCl2(钙离子通道抑制剂)结果无明显抑制作用。MTT法成纤维细胞的研究结果细胞增殖降低。结论:pcDNA3.1(+)/VEGF121转染细胞成功,可逆转缺氧心肌细胞凋亡,对成纤维细胞有抑制增殖的作用。其干预心肌细胞凋亡机制可能是通过降低CaSR激活,降低calpain活性,减少其从线粒体释放到细胞浆,即通过CaSR抑制内途径线粒体内钙依赖性蛋白酶通路,而不依赖Ca~(2+)通道,为整体动物模型的干预奠定理论基础。第二部分Sprague-Dawley大鼠心梗模型制备及7TMR多技术联合评价心梗模型中心肌缺血及活性的运用研究目的:建立SD大鼠心梗模型以及运用7T MR多技术联合评价心肌缺血及判断心肌活性的实验研究。方法:20只雄性SD大鼠随机分为2组:心梗模型组(开胸结扎SD大鼠左前降支),假手术组(仅开胸不结扎)。联合运用心脏电影Cine-MR、T2-mapping以及延迟增强扫描(LGE)等多技术分析心肌信号强度变化,定量评估心梗危险区(area at risk,AAR),梗死核心区(myocardiaum infarction core,MIC)以及可挽救心肌(salvageable myocardial zone,SMZ),结束CMR观察后取心脏组织观察心脏大体解剖,与病理组织学检查(包括TTC、HE染色)结果进行对照。结果:Cine-MRI测量心脏平均舒张期末期容枳,假手术组与模型组有显着统计学差异,成功建模。T2-mapping、LGE序列定量检测AAR以及MIC,对比组织学有良好的相关性,同时T2-mapping还可定量心梗区T2值定量定性心肌出血。心梗后AAR与MIC之差的SMZ结果显示与组织学对比具有良好相关性。结论:7T MR多技术联合成像可准确界定心肌梗死不同区域,图像质量好,评价准确可靠,SMZ可作为反映心肌活性的重要指标,为动物水平pcDNA 3.1(+)/VEGF121转染模型的疗效评价及机制探讨奠定良好的基础。第叁部分基于7T MRI多技术联合评价pcDNA3.1(+)/VEGF121质粒转染SD大鼠心梗模型的实验研究目的:建立pcDNA3.1(+)/VEGF121转染SD大鼠心梗模型以及7TMR多技术联合评价pcDNA 3.1(+)/VEGF121质粒转染心梗模型的实验研究。方法:24只雄性SD大鼠随机分为2组:VEGF干预组(通过改良冠状动脉灌注法),心梗模型对照组。运用心脏电影Cine-MR、T2-mapping以及延迟增强扫描(LGE)序列于24h,48h,72h,7天不同时间点分析其信号强度变化,观察定量心梗危险区(area at risk,AAR),梗死核心区(myocardiaum infarction core)以及可挽救心肌(salvageable myocardial zone,SMZ)的对比模型组的演变过程。结束CMR对比取材心脏大体解剖,并与病理检查(包括TTC、HE、Masson染色以及免疫组化)结果进行对照。结果:Cine-MRI显示pcDNA3.1(+)/VEGF121重组质粒转染组对比心梗模型组,舒张末期容积增高,心梗核心区MIC以及可挽救心肌SMZ明显减低,同时MIC、SMZ以及心梗危险区AAR均呈现递减趋势;第7天组间AAR以及T2值组间无统计学差异。Westem-blot结果显示,质粒转染组VEGF蛋白表达升高,CaSR及caspase-3蛋白表达降低。结论:pcDNA3.1(+)/VEGF121通过冠状动脉灌注转染有效。7T CMR序列可无创定量评价质粒转染疗效,但水肿后期采用T2值以及AAR评价心梗需要慎重。同时转染组发挥心肌保护作用的途径可能与抑制心肌细胞凋亡,血管内皮细胞增殖、抑制胶原增生等机制密切相关。(本文来源于《中国人民解放军医学院》期刊2016-05-11）
吴丹,冯健,莫显刚,刘应才[8]（2016）在《改良的乳小鼠心肌细胞原代培养方法》一文中研究指出目的建立一种稳定而快速的乳小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法用多聚赖氨酸预包被处理培养皿,采用两步法(0.25%胰酶4℃过夜,0.5 mg/m L-1.0 mg/m L II型胶原酶+5 mg/m L白蛋白的胶原消化液37℃短时多次消化),通过差速贴壁70 min+5-溴脱氧尿嘧啶的使用来纯化心肌细胞。倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态变化,台盼蓝染色法检测细胞存活率,α-actinin特异性免疫荧光染色鉴定心肌细胞并计算纯度。结果心肌细胞形态良好,自发搏动,细胞成活率可达到98%,纯度可达到95%。结论本方法培养的心肌细胞存活率高,纯度高,是一种理想的心肌细胞原代培养方法。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2016年04期）
张雪,赵炳祥,宋玉琴,杨雨婷,董艳红[9]（2015）在《乌头碱配伍人参皂苷Rb_1对原代培养心肌细胞能量代谢的影响》一文中研究指出目的:探讨乌头碱配伍人参皂苷Rb1对心肌细胞能量代谢的影响。方法:采用胰蛋白酶消化和差速贴壁法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、0.2%乌头碱组、0.1%乌头碱组、人参皂苷Rb1组、乌头碱配伍人参皂苷Rb1组(1?1、1?2、2?1),给药作用1 h,检测心肌细胞的细胞活力和体内糖原、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶以及细胞乳酸脱氢酶的含量。结果:0.2%乌头碱能够明显降低心肌细胞活力,增加乳酸脱氢酶含量,降低细胞内糖原、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶含量;1×10-6 mol·L-1或2×10-6 mol·L-1浓度的人参皂苷Rb1配伍乌头碱,可明显对抗0.2%乌头碱对心肌细胞的毒性。结论:人参皂苷Rb1可降低乌头碱心肌细胞毒性,其作用机制可能与对抗细胞能量代谢有关。(本文来源于《世界科学技术-中医药现代化》期刊2015年09期）
马爱翠,严建燕,潘琦,陈颖,李雷[10]（2015）在《SD乳鼠心肌细胞原代培养方法的改良》一文中研究指出目的探讨更为简便的新生SD大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度。方法采用含0.1%胰蛋白酶和0.1%胶原酶Ⅱ的混合消化液(v/v,1:1)分离消化出生2d的SD乳鼠心脏组织3次,当组织液由红转白呈半透明状态时终止消化,离心收集细胞,细胞悬液培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,放置CO_2培养箱培养2h后,采用差速贴壁分离技术,贴壁2h后分离纯化心肌细胞;48h后在培养液中加入终浓度为0.1 mmol/L的5-溴脱氧尿核苷(Brdu)抑制成纤维细胞的增殖;3d后换成含10%胎牛血清的DMEM培养基继续培养。常规倒置相差显微镜下观察心肌细胞形态学变化和搏动情况,用台盼蓝染色法检测心肌细胞的存活率,用免疫组织化学染色法检测贴壁生长5d的心肌细胞纯度。结果未贴壁前心肌细胞为圆形或椭圆形,培养24h后多数细胞贴壁伸出伪足,变为梭形、叁角形,或不规则的多边形、星形等形态,72h后见同心圆放射状细胞簇,个别细胞出现跳动,单个梭形或多边形细胞搏动明显,细胞互相交织成网状,邻近细胞搏动呈现同步化,搏动次数约35-70次/min,至第7d搏动率开始减少;用台盼蓝染色法检测心肌细胞的成活率大于95%;培养5d的细胞经免疫组织化学染色法测定,用抗大鼠α-横纹肌肌动蛋白单克隆抗体鉴定心肌细胞纯度,可见胞浆呈棕黄色染色,胞核呈蓝紫色,染色呈阳性,成纤维细胞因不含肌动蛋白而胞质不着色,染色呈阴性,心肌细胞阳性率达95%以上。结论应用优化的心肌细胞分离和纯化方法,可获得高活力和高纯度的原代心肌细胞,是一种可靠的心肌细胞培养方法。(本文来源于《2015年（第五届）药物毒理学年会论文集》期刊2015-06-30）
心肌细胞原代培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探求优化的原代培养乳鼠心肌细胞方法。方法 2017年6月1日—2017年6月2日选取泉州市医学高等专科学校提供6只出生24 h内Wistar乳鼠,采用2种不同消化心肌组织的方法,对照组予0.125%胰酶+0.05%I型胶原酶+0.1%Ⅱ型胶原酶逐次消化心肌组织;试验组予0.05%I型胶原酶+0.1%Ⅱ型胶原酶消化数次后再单予0.125%胰酶快速消化心肌组织;比较两组取得的心肌细胞数量以及存活率,免疫荧光测肌钙蛋白鉴定纯度。结果 2种方法均得到心肌细胞数量多[对照组(103.3±4.4),试验组(105.8±5.0)],差异无统计学意义(t=-0.911,P=0.384);细胞即刻存活率试验组明显高于对照组,试验组达91.87%,对照组即刻存活率仅68.07%,差异有统计学意义(χ~2=81.0,P=0.025)。试验组存活率明显高于对照组。结论再改良方法提取心肌细胞,可获得存活率高、活力好的心肌细胞。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
心肌细胞原代培养论文参考文献
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