树鼩原代皮肤成纤维细胞的分离培养技术

树鼩原代皮肤成纤维细胞的分离培养技术

论文摘要

建立稳定的树鼩(Tupaiabelangeri)皮肤成纤维细胞的体外培养体系,可为有关此类细胞的实验和疾病树鼩细胞模型提供技术支持。取树鼩大腿内侧皮肤用组织块贴壁法和胶原酶Ⅰ消化法分离皮肤细胞,胰蛋白酶差别消化法纯化细胞;用MEM(10%FBS)完全培养基和含低血清生长添加物(LSGS)的培养基培养细胞;免疫荧光和蛋白印迹法鉴定细胞,并测定细胞的生长、冻存和复苏特性。经树鼩皮肤细胞分离效果比较,胶原酶消化法比组织块贴壁法更适合用于树鼩原代皮肤细胞分离;对分离及冻存复苏后细胞生长状况观察比较发现,添加了LSGS的MEM培养基更利于细胞存活、生长;细胞形态观察、免疫荧光和蛋白印迹检测鉴定所分离的细胞为树鼩皮肤成纤维细胞。成功建立了树鼩原代皮肤细胞的分离、纯化方法,并优化了该细胞的培养条件。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 树鼩原代皮肤的分离
  •   1.2 树鼩原代皮肤细胞的分离
  •     1.2.1 组织块贴壁法分离树鼩皮肤细胞
  •     1.2.2 胶原酶消化法分离树鼩皮肤细胞
  •   1.3 树鼩原代皮肤细胞培养条件的比较
  •   1.4 树鼩原代皮肤细胞的胰酶消化纯化
  •   1.5 树鼩原代皮肤细胞的冻存复苏
  •   1.6 树鼩原代皮肤细胞的形态鉴定
  •     1.6.1 Western blot检测树鼩皮肤细胞波形蛋白表达
  •     1.6.2 免疫荧光检测树鼩皮肤细胞波形蛋白和角蛋白的表达
  • 2 结果
  •   2.1 树鼩原代皮肤细胞不同分离方式培养效果
  •   2.2 树鼩原代皮肤细胞的冻存复苏
  •   2.3 树鼩原代皮肤细胞培养条件的优化
  •   2.4 树鼩原代皮肤细胞的鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 白剑,焦玲帅,杨铭,王武,代解杰,夏雪山

    关键词: 树鼩,原代皮肤成纤维细胞,分离,培养,鉴定

    来源: 动物学杂志 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学

    单位: 昆明理工大学生命科学与技术学院,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩标准化研究与疾病动物模型省创新团队

    基金: 国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B01)

    分类号: Q813.11

    DOI: 10.13859/j.cjz.201901010

    页码: 76-86

    总页数: 11

    文件大小: 14034K

    下载量: 203

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