导读:本文包含了双顺反子真核表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:顺反子,蛋白,转染,荧光,载体,基因,因子。
双顺反子真核表达载体论文文献综述
续宗耀,王英振,张海宁,吕成昱,周峰[1]（2013）在《人胰岛素样生长因子-1真核双顺反子表达载体pIRSES2-EGFP-hIGF-1的构建与鉴定(英文)》一文中研究指出目的:利用基因工程原理构建人胰岛素样生长因子1(hIGF-1)全长基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,并观察其在人胚肾293细胞中的表达。方法:应用PCR方法从人肝细胞文库中提取人hIGF-1全长cDNA序列,克隆入T-pMD18载体中,经测序证实序列正确后,利用XhoI/EcoRI进行双酶切并定向插入真核表达载体pIRES2-EGFP中,利用双酶切、电泳和PCR进行鉴定证实插入片段的正确性。应用高效转染试剂X-treme GENE HP DNA Transfection reagent介导真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1转染人胚肾细胞(HEK293),转染后利用倒置荧光显微镜与RT-PCR观察目的基因在靶细胞中的表达。结果:经酶切和测序证实重组质粒载体构建正确,转染后48小时可观察到绿色荧光的表达,RT-PCR结果证实转染pIRES2-EGFP-hIGF-1后可有hIGF-1基因靶细胞中表达。结论:成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-1,目的基因与标记基因可同时在靶细胞中表达,为后续研究奠定基础。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2013年15期）
朱剑,许期年,王秀云,左剑玲,周岱[2]（2012）在《脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDH1R132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段,并在5'末端引入3×Flag标签;通过PCR介导的定点突变法,以pCMV-sports6-hIDH1为模板,扩增hIDH1R132H基因片段,并在3'末端引入3×Flag标签;通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3.1(+)骨架;转化大肠杆菌后挑取阳性克隆,提取质粒进行PCR检测及基因序列测定。结果 PCR检测7个菌落中有6个阳性克隆,DNA测序发现引入了hIDH1基因。结论成功构建了双顺反子真核表达载体pcDNA3.1(+)-hIDH1R132H/3×Flag/IRES/EGFP,为研究人胶质瘤组织中R132H突变的作用机制奠定了基础。(本文来源于《山东医药》期刊2012年26期）
宋丽萍,楼莎,朱敦皖,刘兰霞,张海玲[3]（2011）在《组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达》一文中研究指出目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达。(本文来源于《生物医学工程与临床》期刊2011年02期）
王建强,张海宁,丁昌荣,王英振[4]（2010）在《双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2的构建及鉴定(英文)》一文中研究指出背景:骨形态发生蛋白等因子及以其为中心构建的支架或载体已经广泛应用于实验研究中,并逐渐应用于临床,然而,治疗效果的示踪方法为实验提出了挑战。增强型绿色荧光蛋白基因的发现和应用解决了这一难题。目的:构建双顺反子真核表达载体PIRES2-增强型绿色荧光蛋白-人骨形态发生蛋白2,检测其表达情况。方法:利用RT-PCR方法从人骨肉瘤组织中提取人骨形态发生蛋白2基因,使之与PMD18-T载体连接,经酶切回收后,与目的载体pIRES2-增强型绿色荧光蛋白连接。用PCR技术及基因测序鉴定构建结果。然后将构建好的载体转染人胚肾293细胞,通过荧光显微镜及Western blot技术观测其表达。结果与结论:实验成功扩增了人骨形态发生蛋白2基因并构建了pIRES2-增强型绿色荧光蛋白-人骨形态发生蛋白2载体,将pIRES2-EGFP-hBMP-2用脂质体转染入人胚肾293细胞后48h,荧光显微镜观察约30%细胞发出绿色荧光,Western blot结果发现在Mr46×106处有一特异性骨形态发生蛋白条带,表明所构建载体中靶基因能成功表达。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2010年24期）
王建强[5]（2010）在《双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2的构建及鉴定》一文中研究指出目的：构建双顺反子真核表达载体PIRES2-EGFP-hBMP-2,检测其表达。方法：利用RT-PCR方法从人骨肉瘤组织中提取人骨形态发生蛋白hBMP-2基因,通过序列分析正确后,使之与PMD18-T载体连接,转化大肠杆菌JM109,选择阳性克隆载体,进行扩增,提取质粒。经酶切回收后,与目的载体pIRES2-EGFP连接。用PCR技术及基因序列分析技术鉴定构建结果。然后将构建好的载体转染HEK293,通过荧光显微镜及Western blot技术观测其表达。结果：成功扩增了hBMP-2基因,基因片段长度为1102bp; pIRES2-EGFP-hBMP-2质粒构建成功,转染HEK293细胞后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光；提取的总蛋白行Western blot检测,可观察到hBMP-2基因所表达蛋白的显影条带。结论：重组HEK293细胞能成功表达EGFP及hBMP-2基因,并为pIRES2-EGFP-hBMP-2载体转染骨髓基质干细胞及应用于软骨及骨缺损治疗提供了前提基础。(本文来源于《青岛大学》期刊2010-04-22）
苗素平,苗素生,扈廷茂,刘明秋[6]（2009）在《真核生物多顺反子表达载体的构建及在Hela细胞中的表达》一文中研究指出利用DNA重组技术将抗肿瘤血管生成的内皮抑素基因endostatin插入含有FHIT(抗肿瘤人脆性组氨酸叁联体基因)和EGFP的pIRES2-FHIT-EGFP载体中构建了真核多顺反子表达载体pES-IRES-FHIT-IRES-EGFP,用脂质体法转染Hela细胞后,用G418筛选出稳定转染的细胞.经RT-PCR、RT-PCR southern blot、northern blot和免疫细胞化学分析,结果证明单顺反子和叁顺反子在RNA水平都得到表达.在蛋白表达水平上,荧光观察和免疫细胞化学分析结果显示Endostatin、FHIT和EGFP在Hela细胞中均得到表达,为基因药物和肿瘤多基因治疗奠定了基础.(本文来源于《内蒙古大学学报(自然科学版)》期刊2009年01期）
曹叁杰,邓飞,杨恒,黄小波,文心田[7]（2008）在《真核双顺反子表达载体pcDNA3.1AB的构建与表达》一文中研究指出为了构建由双CMV启动子调控的真核双顺反子表达载体pcDNA3.1AB,首先在pcDNA3.1(+)的基础上,构建出pcDNA3.1A和pcDNA3.1B,然后通过PCR方法扩增pcDNA3.1A上含PCMV-MCS-BGHpolyA表达单元的片段,再定向克隆入pcDNA3.1B,最后得到载体pcDNA3.1AB。将DsRed与EGFP基因插入pcDNA3.1AB,分别构建pcDNA-DsRed、pcD-NA-EGFP和pcDNA-DsRed-EGFP真核表达质粒,并转染COS-7细胞瞬时表达。用荧光显微镜进行检测,结果表明,双价质粒pcDNA-DsRed-EGFP能同时表达红色和绿色荧光蛋白基因,两基因表达强度无显着差异,且双价与单价质粒相比荧光蛋白表达强度相当。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2008年06期）
徐逸,朱舟,吴轲,曾宁,田学俾[8]（2008）在《NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析》一文中研究指出目的构建并鉴定携带核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)特异性启动子的Flag-p27和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)双顺反子真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),观察其表达。方法采用基因工程技术,经过多步亚克隆后完成能同时表达p27和EGFP基因的NF-κB特异性启动子双转基因真核表达载体。转染体外培养的经H2O2干预的HUVEs,观察EGFP的表达,并通过免疫荧光细胞化学技术观察p27基因的表达。结果经酶切鉴定和测序鉴定,成功地构建真核表达载体pNF-κB-IRES2-EGFP-p27,转染经H2O2干预的HUVEs后,可见部分细胞有EG-FP的表达,并且在EGFP阳性的细胞中p27基因的表达水平明显增高,而未经H2O2处理的对照组转染pNF-κB-IRES2-EGFP-p27后无EGFP的表达。结论NF-κB启动子能够特异性地激活p27基因的表达。EGFP基因可以指示p27基因的表达情况。由NF-κB特异性启动子启动的p27和EGFP双顺反子真核表达载体的构建为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功(chronic graft dysfunction,CGD)之间的关系,并为进一步寻找慢性移植物失功的基因治疗途径奠定基础。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2008年06期）
苗素平,苗素生,刘明秋,扈廷茂[9]（2008）在《真核生物多顺反子表达载体的构建及在Hela细胞中的表达》一文中研究指出肿瘤是当今影响人类健康的主要疾病之一。目前发现许多抗肿瘤相关基因产物有较好的治疗效果,但是面对肿瘤的复杂性,依靠单一基因效果并不理想,因此利用多基因共表达已成为治疗肿瘤的一个趋势。多基因共表达有多种形式,本研究利用 DNA 重组技术将抗肿瘤血管生成的内皮抑素基因 endostatin、抗肿瘤人脆性组氨酸叁联体基因 FHIT、绿色荧光蛋白基因 EGFP 及核糖体进入序列 IRES 构建了真核多顺反子表达载体 pES-IRES-FHIT-IRES-EGFP。用脂质体法转染 Hela 细胞后,用 G418筛选出稳定转染的细胞。RT-PCR、RT-PCR southern blot、 northern blot 分析,结果证明单顺反子和叁顺反子在 RNA 水平都得到表达。在蛋白表达水平上,荧光观察和免疫细胞化学分析结果显示 E6FP、Endostatin 和 FHIT 在 Hela 细胞中均得到表达。本研究所构建的真核表达载体中的叁个外源基因,在 RNA 水平上以叁顺反子形式得以表达。EGFP 位于最后,将此细胞与转染有单顺反子 pIRES2-EGFP 的细胞进行比较,荧光强度无明显差别,说明 EGFP 的位置对它的表达未造成明显影响。转染细胞中两种蛋白均有表达, 但是二者的表达是否平衡,需进一步研究。本研究为基因药物和肿瘤多基因治疗提供实验依据,具有重要的理论意义。(本文来源于《中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）》期刊2008-10-01）
苗军,刘春蓉,黄鸿超,夏群,石可松[10]（2008）在《构建含双顺反子绿色荧光蛋白标记人骨诱导形成蛋白2真核表达载体(英文)》一文中研究指出背景:腺病毒虽可携带骨诱导形成蛋白2基因转染靶细胞促进其分泌诱导形成蛋白2,但容易出现一些免疫应答反应,以质粒为载体的转染实验应具有良好的前景。目的:验证构建绿色荧光蛋白标记的人骨诱导形成蛋白2真核表达载体的可行性。设计:单一样本观察。单位:天津医院。材料:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室(国家级)完成。含完整hBMP2基因片段的pcDNA3.1/CT-人骨诱导形成蛋白2质粒由李曦铭博士惠赠。双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS为Invivogen公司产品,Zeo购自Invivogen公司。pTA2-TEasy为鼎国生物技术有限公司产品,限制性内切酶BamHI和NheI、T4DNA连接酶(晶美生物工程有限公司),PCR上下游引物合成及测序(北京奥科生物技术有限责任公司)。方法:以重组质粒pcDNA3.1/CT-人骨诱导形成蛋白2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法亚克隆出人骨诱导形成蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-人骨诱导形成蛋白2。主要观察指标:采用PCR法鉴定人骨诱导形成蛋白2序列,同时进行酶切及测序鉴定人骨诱导形成蛋白2是否克隆入pTA2-人骨诱导形成蛋白2重组质粒及真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS中。结果:PCR获得长度约1216bp的目的片段,经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的BMP2cDNA序列(NM-001200)100%匹配。结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白标记人骨诱导形成蛋白2真核表达载体。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2008年20期）
双顺反子真核表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的以pcDNA3.1(+)为骨架,构建并鉴定人脑胶质瘤组织中含R132H突变的人源异柠檬酸脱氢酶1基因(hIDH1R132H)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)序列的双顺反子真核表达载体。方法以内部核糖体进入位点(IRES)/EGFP片段为模板,扩增出IRES/EGFP片段,并在5'末端引入3×Flag标签;通过PCR介导的定点突变法,以pCMV-sports6-hIDH1为模板,扩增hIDH1R132H基因片段,并在3'末端引入3×Flag标签;通过PCR连接两种产物后经双酶切定向克隆入pcDNA3.1(+)骨架;转化大肠杆菌后挑取阳性克隆,提取质粒进行PCR检测及基因序列测定。结果 PCR检测7个菌落中有6个阳性克隆,DNA测序发现引入了hIDH1基因。结论成功构建了双顺反子真核表达载体pcDNA3.1(+)-hIDH1R132H/3×Flag/IRES/EGFP,为研究人胶质瘤组织中R132H突变的作用机制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
双顺反子真核表达载体论文参考文献
[1].续宗耀,王英振,张海宁,吕成昱,周峰.人胰岛素样生长因子-1真核双顺反子表达载体pIRSES2-EGFP-hIGF-1的构建与鉴定(英文)[J].现代生物医学进展.2013
[2].朱剑,许期年,王秀云,左剑玲,周岱.脑胶质瘤组织中R132H突变型hIDH1基因双顺反子真核表达载体的构建及鉴定[J].山东医药.2012
[3].宋丽萍,楼莎,朱敦皖,刘兰霞,张海玲.组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH3T3细胞中表达[J].生物医学工程与临床.2011
[4].王建强,张海宁,丁昌荣,王英振.双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2的构建及鉴定(英文)[J].中国组织工程研究与临床康复.2010
[5].王建强.双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2的构建及鉴定[D].青岛大学.2010
[6].苗素平,苗素生,扈廷茂,刘明秋.真核生物多顺反子表达载体的构建及在Hela细胞中的表达[J].内蒙古大学学报(自然科学版).2009
[7].曹叁杰,邓飞,杨恒,黄小波,文心田.真核双顺反子表达载体pcDNA3.1AB的构建与表达[J].农业生物技术学报.2008
[8].徐逸,朱舟,吴轲,曾宁,田学俾.NF-κB启动子调控的pNF-κB-IRES2-EGFP-p27双顺反子真核表达载体的构建及表达分析[J].华中科技大学学报(医学版).2008
[9].苗素平,苗素生,刘明秋,扈廷茂.真核生物多顺反子表达载体的构建及在Hela细胞中的表达[C].中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编（2004-2008）.2008
[10].苗军,刘春蓉,黄鸿超,夏群,石可松.构建含双顺反子绿色荧光蛋白标记人骨诱导形成蛋白2真核表达载体(英文)[J].中国组织工程研究与临床康复.2008
论文知识图
