烟草甲clip丝氨酸蛋白酶基因的克隆及其对外源激素和免疫胁迫的表达响应（英文）

论文摘要

【目的】作为细胞外信号级联通路的重要组成部分,含有clip结构域的丝氨酸蛋白酶（clipdomain serine proteases,CLIPs）在昆虫发育和先天免疫过程中起着重要作用。本研究旨在克隆烟草甲Lasioderma serricorne CLIP基因,解析其在烟草甲不同发育阶段和幼虫不同组织中的表达模式,分析其在外源激素20-羟基蜕皮酮（20E）和免疫胁迫后的表达特征,为进一步研究其生理功能奠定基础。【方法】采用RT-PCR技术克隆获得烟草甲两个CLIPs基因（LsCLIP1和LsCLIP2）全长cDNA序列,并利用生物信息学软件预测其编码蛋白的结构和特征,利用MEGA 6. 06构建昆虫CLIPs系统发育树;利用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）研究这两个基因在不同发育阶段[低龄幼虫（卵孵化后24 h内）、高龄幼虫（4龄以上）、蛹（化蛹后48 h以上）、早期成虫（化蛹后24 h内）和晚期成虫（化蛹后7 d）]、5龄幼虫不同组织（表皮、脂肪体、肠道和剩余组织）中以及注射20E（120 ng/幼虫）和来源于大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的肽聚糖（0. 2μL）后4龄幼虫中的表达模式。【结果】克隆获得烟草甲LsCLIP1和LsCLIP2基因的cDNA全序列,其开放阅读框长度均为1 194 bp,编码397个氨基酸。序列分析显示,其氨基酸序列各自具有一个clip结构域和胰蛋白酶结构域。系统发育分析表明,CLIP1和CLIP2都属于subfamily C CLIPs。qPCR结果表明,Ls CLIP1和Ls CLIP2基因在所检测的各发育阶段和幼虫各组织中均有表达,分别尤以蛹期和表皮中表达量最高;经20E和肽聚糖诱导后,烟草甲幼虫体内LsCLIP1和LsCLIP2基因的表达量明显提高。【结论】推测Ls CLIP1和LsCLIP2可能参与了烟草甲的蜕皮发育和对免疫胁迫的应激响应。本研究将为后续研究昆虫CLIPs的分子调控提供参考。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈春旭,许抗抗,杨洪,赵凤,严毅,胡大鸣,杨文佳

关键词: 烟草甲,丝氨酸蛋白酶,羟基蜕皮甾酮,免疫胁迫,表达模式

来源: 昆虫学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 贵州大学昆虫研究所贵州山地农业病虫害重点实验室,贵阳学院生物与环境工程学院贵州省山地珍稀动物与经济昆虫重点实验室,贵州大学烟草学院,贵州中烟工业有限责任公司

基金: 贵州中烟工业有限责任公司计划项目(2017-25),国家自然科学基金项目(31501649),贵州省高等学校科技拔尖人才计划(2017083),贵州省区域一流培育学科(生态学)(201785)

分类号: Q78;Q966

DOI: 10.16380/j.kcxb.2019.05.002

页码: 535-546

总页数: 12

文件大小: 2880K

下载量: 108

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