导读:本文包含了丝蛋白基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,蛋白,蛛丝,细毛羊,毛囊,蜘蛛,转染。
丝蛋白基因论文文献综述
赵晓明,刘云垒,毛钰霞,沈卫德,许雅香[1]（2017）在《用保幼激素和蜕皮激素处理离体培养家蚕丝腺对丝蛋白基因表达的影响》一文中研究指出蜕皮激素(20E)和保幼激素(JH)具有共同调控家蚕丝蛋白合成的作用。将家蚕5龄第3天幼虫的中部和后部丝腺置于含不同浓度20E或JH的培养基中进行离体培养,于培养不同时间通过定量PCR检测丝素蛋白基因及丝胶蛋白基因的表达变化。结果表明,蜕皮激素处理对丝蛋白基因表达的影响,因激素使用剂量和作用时间不同而异;保幼激素处理会抑制丝蛋白基因的表达,尤其对丝素蛋白重链基因Bmfib-H的表达抑制作用更为明显,50 ng/m L JH处理48 h后Bmfib-H的表达水平下调1倍左右;蜕皮激素和保幼激素共同处理比单一激素处理更有助于丝蛋白基因的表达,但用保幼激素先处理丝腺24 h后再用蜕皮激素和保幼激素共同处理,会显着抑制丝素蛋白轻链基因Bmfib-L的表达。试验在排除蚕体内源激素干扰的条件下,从转录水平初步分析了保幼激素和蜕皮激素对家蚕丝蛋白基因表达的调控机制。(本文来源于《蚕业科学》期刊2017年03期）
王娟,马桂兰,王家敏,乔自林[2]（2017）在《蛛丝蛋白基因重组表达研究进展》一文中研究指出蛛丝是一种具有特殊蛋白序列结构和超强收缩性能的天然蛋白纤维,有独特力学性能和实用价值的高性能生物材料。本文概述了蛛丝蛋白的理化性能、力学性能、分子基础和基因重组表达的研究进展。(本文来源于《甘肃畜牧兽医》期刊2017年03期）
安铁洙,李昊,王春生,王子竹,宋红卫[3]（2016）在《转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选》一文中研究指出为了建立绵羊被毛特异表达蜘蛛拖丝蛋白基因的方法,研究利用前期工作获得的绵羊高硫角蛋白结合蛋白基因B2C启动子和人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体(2S),构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,进行线性化后,采用脂质体法转染进绵羊成纤维细胞并经G418筛选获得转基因阳性细胞,再进行PCR检测和冷冻复苏后进行生物学特性检测。结果表明:成功构建真核表达载体pc DNA3.1-B2C-2S,将其整合入转基因阳性细胞的基因组中;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,其细胞形态仍保持成纤维细胞的梭形形态,且在续培养中呈现正常细胞相近的"S"型生长曲线。说明试验成功获得转pc DNA3.1-B2C-2S绵羊成纤维细胞株。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2016年07期）
王瑞瑶,闫涛,朱和平,周欢敏[4]（2015）在《可定点整合的无筛选标记拟蛛丝蛋白基因表达载体的构建与鉴定》一文中研究指出为了构建可定点整合的无筛选标记的拟蛛丝蛋白基因表达载体,试验以p EGFP-N1为骨架载体,并采用PCR技术分别添加Loxp和att B片段,利用无缝克隆法将拟蛛丝蛋白基因(2s)连入质粒,经过转化、阳性克隆筛选、酶切及DNA测序鉴定。结果表明:PCR产物及酶切片段大小符合预期结果,测序结果与相应寡核苷酸序列一致。说明试验成功构建了可定点整合的无筛选标记拟蛛丝蛋白基因表达载体p EGFP-N1-2s,可用于无筛选标记的转基因供体细胞的构建。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2015年13期）
王瑞瑶[5]（2015）在《定点整合的无筛选标记转拟蛛丝蛋白基因绵羊细胞系的建立》一文中研究指出转基因动物是现代生物研究的重要材料。然而,获得转基因的动物中都会留有转基因筛选的抗生素和荧光标记基因,因此存在生物安全以及环境安全方而的危害。传统转基因技术的基因片段随机插入,可能会引起受体物种重要基因表达异常,或者导致外源基因的表达沉默。本实验通过phiC31整合酶介导基因的定点整合,Cre/Loxp重组酶系统删除筛选标记基因的方法消除安全隐患,为培育无筛选标记基因的转拟蛛丝蛋白基因2S克隆绵羊奠定基础。主要结果概括如下：1.以pEGFP-N1为骨架载体,成功构建了含有attB序列和两个同向Loxp序列的定点整合可删除筛选标记的真核表达载体pEGFP-N1 - 2S。2.pEGFP-N1-2S质粒在phiC31整合酶mRNA的介导下,共转染绵羊胎儿皮肤成纤维细胞,建立了定点整合转拟蛛丝蛋白基因2S的绵羊细胞系。3.成功诱导Cre穿膜肽,将定点整合绵羊细胞系中的筛选标记基因切除,建立了定点整合无筛选标记的转拟蛛丝蛋白基因2S绵羊细胞系。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2015-06-01）
王海涛,孟凡华,房君,周欢敏[6]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞株的筛选》一文中研究指出试验旨在获得具有毛囊表达特性的转蜘蛛牵丝蛋白基因细胞株。根据GenBank上发表的棒络新妇属蜘蛛的cDNA片段合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体S,加倍后连入pEGFP-N1框架载体以构建真核表达载体pK-2S,转染新疆美利奴细毛羊皮肤成纤维细胞后筛选单克隆,并通过PCR在DNA、RNA水平检测阳性克隆。基因合成后测序结果显示序列正确,酶切得到正确目的条带,筛选出阳性克隆并且可以在基因组及cDNA上扩增出目的片段。本研究成功将蜘蛛牵丝蛋白基因转入新疆美利奴细毛羊细胞,并在RNA水平表达,为培育毛囊特异表达蜘蛛牵丝蛋白基因并具有更高机械性能羊毛的新型细毛羊品种奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2014年06期）
王海涛[7]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞系的建立》一文中研究指出蜘蛛丝是自然界具有最优异力学性能的生物纤维,主要成分为蛛丝蛋白,但是难以大量生产或收集。利用基因工程手段可实现蛛丝蛋白基因转入异源宿主中并表达。本实验通过脂质体转染法将蜘蛛牵丝蛋白基因真核表达载体pK-2S转入美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中,筛选稳定转入蛛丝蛋白基因的细胞株,通过DNA,RNA水平的检测初步鉴定基因是否转入细胞并表达,为培育能生产含有蛛丝蛋白羊毛的绵羊新品种奠定基础。主要结果如下：1.以已发表的棒络新妇蛛cDNA片段为模板,人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S),并获得二聚体(2S)。2.建立了新疆美利奴细毛羊胎儿成纤维细胞系,细胞形态观察显示细胞形态良好,生长曲线表明细胞增殖状态较好,核型分析正常。3.克隆了绵羊毛囊特异性表达启动子Kap6.1,构建表达载体pKap-EGFP并转入细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中并表达绿色荧光蛋白,表明启动子具有表达活性。4.以pEGFP-N1为框架,将2S与绵羊毛囊特异性启动子Kap6.1相连,构建毛囊特异表达载体pK-2S。5.质粒pK-2S线性化后,转染新疆美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞,并通过600μg/mL G418筛选单克隆。提取单克隆基因组进行PCR验证,表明了部分克隆转入蛛丝蛋白基因,对部分阳性克隆提取细胞总RNA进行RT-PCR,并以cDNA为模板进行PCR验证,表明蛛丝蛋白在RNA水平表达。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
房君[8]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出蜘蛛牵丝因其优异的机械性能越来越多地作为材料应用于医疗、建筑等领域。但天然蛛丝产量低,利用原核生物反应器生产重组蛛丝是目前人工获得大量蛛丝的有效手段。本研究用拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)和二聚体(2S)分别构建了原核表达载体pGEX-S和pGEX-2S,转化大肠杆菌并诱导其表达,用产量多的重组蛋白为抗原,免疫小白鼠以制备抗血清。通过此方法可以探索建立适宜的重组蛛丝原核表达体系,也为检测其在真核表达提供材料。主要研究结果如下：1.拟蜘蛛牵丝蛋白基因序列的合成：根据棒络新妇蛛的cDNA片段人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S),并构建了二聚体(2S)。2.原核表达载体的构建：基因单体(S)合成后与克隆载体pUC57相连,得到重组质粒pUC57-S再通过酶切、连接、转化等合成二聚体(2S)；分别将S和2S片段与表达载体pGEX-2T相连,获得可用于原核表达的重组质粒pGEX-S和pGEX-2S。3.重组蛋白的表达和纯化：将重组质粒pGEX-S和pGEX-2S转化入表达型感受态细胞BL21中,并对菌株的表达条件进行了摸索,发现0.8mmol/l的IPTG诱导4小时为最好。提取总蛋白进行Western Blot,发现S-GST的表达量明显高于2S-GST。利用亲和层析法纯化重组蛋白S-GST,用于多克隆抗体的制备。4.拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)多克隆抗体的制备：取适量纯化后S-GST重组蛋白与佐剂混合乳化,利用皮下多点注射的方法免疫8只CD I小白鼠,免疫结束后经ELISA检测,发现其中的两只小鼠的抗血清浓度较高,可用于后续实验。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
高晋芳[9]（2014）在《转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊重组胚的构建、移植及转基因羊的鉴定》一文中研究指出蜘蛛牵丝是由蜘蛛体内一对主壶腹腺合成的天然蛋白质纤维,被誉为“生物钢”,具有广泛的应用前景。本研究主要目的是通过体细胞核移植手段制备被毛表达蛛丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊,有效改善羊毛品质,对提高细毛羊毛纤维的商业价值具有非常重要的意义。本文采用体细胞核移植技术,以转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞为核供体,去核卵母细胞为受体,制备转基因克隆重组胚716枚,取发育到桑葚期的胚胎进行RT-PCR检测显示外源基因已表达；胚胎移植受体羊44只,受孕12只,出生7只。对出生的转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊在DNA、RNA水平进行检测,结果表明目的基因成功整合到细毛羊宿主基因组中并得以表达；检测转基因和非转基因细毛羊羊毛纤维韧性,结果表明,转基因细毛羊羊毛的拉力及拉伸度均高于非转基因细毛羊。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
薛娜[10]（2014）在《八聚体蛛丝蛋白基因毛囊特异性表达载体的构建及其转基因研究》一文中研究指出蜘蛛丝具有质量轻、强度高及韧性大等优越特性,由于其开发利用难度大,因此借助生物工程技术生产蛛丝原材料成为首选方法。八聚体蛛丝蛋白基因是由人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因的核心序列S连接成的八聚体(Spidroinl8,8S),为了进一步探究8S基因的功能及特性,本实验构建了毛囊细胞中特异性表达8S基因的载体,并转染了小鼠表皮细胞和绒山羊胎儿成纤维细胞,验证了启动子的表达能力；通过转染小鼠胚胎干细胞获得阳性克隆,为嵌合体小鼠的制备奠定基础,并运用原核注射方法,制备了8s转基因小鼠,为研究8S对毛发特性的影响提供了研究基础。1.8S基因毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP的构建通过PCR扩增出PolyA片段,连接到载体pMD19T-8S上构成中间克隆载体pMD19T-8S-PolyA。分别用Kpn Ⅰ和Sal Ⅰ(?)其与带有毛囊特异性启动子的载体pCDsR-KAP6-1-IGFⅠ双酶切后,重组成8S基因的毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP,经酶切鉴定与测序分析,结果与预期设计相符。2.8S基因毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP的细胞转染及鉴定在脂质体的介导下,将毛囊特异性表达载体pCDsR-K8SP分别转染入小鼠表皮细胞和绒山羊胎儿成纤维细胞中,经双重筛选获得阳性克隆。对转基因细胞基因组进行PCR特异性扩增检测,结果表明外源目的基因8S已稳定整合到转基因细胞基因组中。提取筛选得到的转基因小鼠表皮细胞及绒山羊胎儿成纤维细胞的总RNA,进行反转录PCR检测,结果表明外源基因8S在这两种转基因细胞中均呈现表达阳性。3.8S转基因小鼠胚胎干细胞的获得及转基因小鼠的制备通过转染小鼠胚胎干细胞,获得了外源基因8S已稳定整合到转基因细胞基因组中的阳性克隆,为下一步制备嵌合体小鼠奠定基础。同时使用载体pCDsR-K8SP对小鼠受精卵进行原核注射,获得67只待检原代小鼠,经PCR鉴定,共检测出6只8S转基因阳性小鼠,阳性得率为8.96%。本实验中8S转基因小鼠的制备及初步鉴定,为进一步研究人工合成蛛丝蛋白的特性以及利用生物工程方法开发蛛丝新型材料提供了研究基础。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2014-04-01）
丝蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
蛛丝是一种具有特殊蛋白序列结构和超强收缩性能的天然蛋白纤维,有独特力学性能和实用价值的高性能生物材料。本文概述了蛛丝蛋白的理化性能、力学性能、分子基础和基因重组表达的研究进展。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
丝蛋白基因论文参考文献
[1].赵晓明,刘云垒,毛钰霞,沈卫德,许雅香.用保幼激素和蜕皮激素处理离体培养家蚕丝腺对丝蛋白基因表达的影响[J].蚕业科学.2017
[2].王娟,马桂兰,王家敏,乔自林.蛛丝蛋白基因重组表达研究进展[J].甘肃畜牧兽医.2017
[3].安铁洙,李昊,王春生,王子竹,宋红卫.转B2C/拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选[J].黑龙江畜牧兽医.2016
[4].王瑞瑶,闫涛,朱和平,周欢敏.可定点整合的无筛选标记拟蛛丝蛋白基因表达载体的构建与鉴定[J].黑龙江畜牧兽医.2015
[5].王瑞瑶.定点整合的无筛选标记转拟蛛丝蛋白基因绵羊细胞系的建立[D].内蒙古农业大学.2015
[6].王海涛,孟凡华,房君,周欢敏.拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞株的筛选[J].中国畜牧兽医.2014
[7].王海涛.拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞系的建立[D].内蒙古农业大学.2014
[8].房君.拟蜘蛛牵丝蛋白基因的原核表达及多克隆抗体制备[D].内蒙古农业大学.2014
[9].高晋芳.转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊重组胚的构建、移植及转基因羊的鉴定[D].内蒙古农业大学.2014
[10].薛娜.八聚体蛛丝蛋白基因毛囊特异性表达载体的构建及其转基因研究[D].内蒙古大学.2014
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