1黑龙江省齐齐哈尔市建华医院口腔科161000；2黑龙江齐齐哈尔医学院附属第三医院口腔科161000
摘要：目的：探讨维生素D受体FokⅠ基因与儿童氟牙症的相关性。方法：在2017年5月到2018年5月，调查齐齐哈尔市5个高氟饮水区的自然村的儿童，其中，中、重度氟牙症80名儿童为试验组，健康儿童为对照组，在空腹状态下进行抽血，化验并分析维生素D受体FokⅠ基因多态性。结果：氟牙症儿童FF基因型分布频率高于健康儿童，ff基因型分布频率低于健康儿童。结论：维生素D受体FokⅠ基因与氟牙症有相关性。
关键词：氟牙症；FokⅠ基因；关系研究；
氟是人体中所必需的一种微量元素，人体中少量的氟元素可有效预防龋齿，但人体长时间摄入高氟可在体内形成并蓄积氟化物，从而对机体造成损伤。氟斑牙，也叫氟牙症，是其主要表现病症之一，可能导致牙釉质出现白垩、缺损以及着色变化，严重者可出现全部牙齿缺损，甚至出现氟中毒而导致死亡。而在高氟饮水区域，水中氟元素过量是导致地方性氟中毒的主要因素。齐齐哈尔市位于东北松嫩平原，具有较为复杂的地貌特征，某些区域地下水的氟含量过高，导致了齐齐哈尔市的一些区域成为了典型的高氟饮水中毒病区。控制氟元素的来源，降低氟化物的摄入，是预防地方性氟中毒的主要办法。
维生素D受体，也叫VDR，有着包括调节细胞分化和增殖，免疫调节功能，维持体内血清磷和钙的稳定，调节钙磷代谢等，而与1.25二羟基维生素D3结合，可改变VDR的转录效率。VDR与多种疾病的发生特别是骨疾病与有相关性[1-2]，本研究通过研究分析维生素D受体FokⅠ基因多态性，探讨与儿童氟斑牙之间的关系，为以后氟牙症的研究和精准医疗奠定基础。
1资料和方法
1.1一般资料
依据齐齐哈尔市疾病预防控制中心提供的《黑龙江省饮用水源高氟调查结果》，确定齐齐哈尔市5个自然村为高氟饮水区，并将该5个自然村作为调查点，检测水中氟化物。根据Dean法对150名儿童进行诊断，其中，轻度、中度及重度氟斑牙记为阳性，正常及可疑记为氟斑牙阴性，选取中度及重度氟牙症儿童60例为实验组，健康儿童60例为对照组，两组对象年龄、病情的严重程度、体质指数、性别等经统计学分析发现差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。
1.2方法
1.2.1要求提取空腹静脉血的标本，并按照说明书的要求提取基因组的DNA
1.2.2引物查询与设计
通过检索维生素D受体基因的资料，从美国国家生物技术信息中心内genebank中得到维生素受体基因的DNA序列。FokⅠ位点引物序列：上游5'ACTGACTCTGGCTCTGAC3'，下游5'CACCTTGCTTCTTCTCCC3'，预期产物片段246bp。PCR扩增反应体系为50μL。
PCR扩增条件为：94℃预变性5min，循环条件为94℃50s，55℃50s，72℃60s，循环5次，然后94℃50s，60℃50s，72℃60s，循环25次，72℃末端延伸7min。加入PCR产物，混匀，反应产物经凝胶电泳，染色，借助紫外灯来观察产生的反应，并根据电泳条带数和位置，来判断胶原基因类型
1.2.3PCR产物的纯化使用普通DNA纯化试剂盒。
1.2.4通过随机抽取10%的样本重复以上内容，从而使结果更具可信。
1.2.5统计分析方法
两组儿童VDR基因多态性分析采用Hardy-Weinberg平衡检验，计量资料用x±s表示，组间比较使用t检验，两组基因型频率分布的比较使用卡方检验。所有数据使用SPSS24.0软件进行统计分析，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1两组儿童FokⅠ位点基因型分布
两组儿童FokⅠ位点的基因型分布符合Hardy-Weinberg定律，说明具有遗传学代表性，见表1。
3讨论
氟牙症是由于外界环境中氟进入人体过多，从而引起牙釉质出现白垩、缺损以及着色变化等表现的疾病，近几年来，随着基因多态性的研究不断增多，人们对疾病的发病机制的研究也进入了新的领域，国外学者Vieira[3]等研究发现遗传因素对氟牙症的影响，国内学者黄辉[4]等研究了COLIA2基因多态性在氟牙发生发展中的作用，刘静波[5]等研究发现FokⅠ基因多态性与肺癌有相关关系。国外学者发现FokⅠ基因多态性可以解释白血病的遗传易感性，还有学者认为会影响到白血病细胞的分化[6]。因此氟牙症乃至其他疾病与基因之间的关系得到了学者的关注。
1，25-（OH）2D3能通过维生素D受体介导，发挥多种功能，如控制细胞增殖和分化，维持体内血清磷和钙的稳定，调控免疫应答、调节钙磷代谢维持体内矿物质平衡等。同时维生素D受体的转录效率可以因与1，25-（OH）2D3的结合受到影响。VDR与多种疾病的发生特别是骨疾病与有相关性，Morriason[7]等通过研究发现维生素D受体基因多态性与骨密度之间有密切的联系，而牙齿的形成与骨骼的形成类似，钙、磷等多种离子参与了其矿化过程，而VDR能够维持机体钙磷平衡，因此本研究探讨维生素D受体FokⅠ基因多态性和氟牙症之间的关系。
研究中，我们获得了关于健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因FokⅠ的分布特点，发现两组儿童FokⅠ多态性分布差异有统计学意义（P<0.05）。因此我们能够推断健康儿童和氟牙症儿童维生素D受体基因分布有差异，即与氟牙症之间有关联。进一步分析发现在氟牙症儿童和健康儿童中，FF基因型和ff基因型分布均存在显著差异，Ff基因型不存在显著差异，因此FF基因型和ff基因型和氟牙症的发生有相关性，提示可以通过检测FF基因性和ff基因型来对氟牙症高危人群进行筛选。通过对维生素D受体FokⅠ基因多态性和氟牙症发病之间的关系分析发现，携带FF基因型的儿童发生氟牙症的风险OR值为增高，等位基因中，F基因型的儿童发生氟牙症的风险增高，即F基因型也许是氟牙症的易感基因之一。
通过上述研究，我们可以看出维生素D受体FokⅠ基因与氟牙症之间有相关性，因此可以通过检测FF基因型和ff基因型来筛选出氟牙症高危人群，这将对于氟牙症的防治发挥重要作用，因此本研究不仅有临床价值，如果能在未来推广使用，也会获得良好的社会效益。
参考文献：
[1]韩金龙，王龙，祖源，等.维生素D受体基因BsmⅠ、ApaⅠ和TaqⅠ位点多态性与中国男性骨密度相关性的Meta分析[J].解放军医学院学报，2015，36（11）：1122-1126.
[2]李媛媛，崔凌凌，李鑫德，等.中国汉族男性原发性痛风与维生素D受体基因rs2228570多态性的遗传易感性研究[J].中华内分泌代谢杂志，2015，31（4）：894-897.
[3]VieiraAP，HanocockR，EggertssonH，ela1．Toothqualityindentalfluomsisgeneticandenvironmentalfactors[J]．CalcifTissueInt，2005，76（1）：17—25．
[4]黄辉，贾新梅，巴月，等．COLlA2基因多态性与儿童氟斑牙关系[J]．中国公共卫生，2007，23（4）：445-447．
[5]刘静波，侯燕燕，齐曦明，等.维生素D受体基因多态性与肺腺癌易感性的关系[J].河北医药，2014，36（12）：1780-1782.
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[7]MorrisonNA，QiJC，TokitaA，ela1.PredictionofbonedensityfromvitaminDReceptoralleles[J]．Nature，1994，367（6460）：284-287．