孙战胜[1]2004年在《重组人血清白蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达》文中研究表明人血清白蛋白是一种在医学上应用广泛，需求量大的蛋白质药物。而目前血浆提取生产的方式难以满足市场的要求，用基因工程方法生产人血清白蛋白无疑具有巨大的商业价值。由于巴斯德毕赤酵母表达系统自身的许多优点，使得其在表达外源蛋白中具有十分大的优势。本文的工作是用巴斯德毕赤酵母（Pichia Pastoris）构建并筛选分泌重组人血清白蛋白(rHSA)基因工程高产菌株，并对其发酵纯化条件进行初步研究。在构建高产人血清白蛋白的基因工程菌时，采用了分泌型表达质粒pPIC9K构建成质粒pPIC9K-hsa。构建的质粒经线性化后电转化整合进入毕赤酵母GS115染色体AOX1基因中，通过MD/MM平板筛选出his+Muts型菌株。在此基础上，用G418平板筛选出高拷贝表达子。BMGY/BMMY摇瓶培养对不同的拷贝子进行筛选，发现随着拷贝子的增加表达量增加。其中菌株GS115-rHSA-8表达量最高。免疫印迹检测所表达的rHSA具有免疫原性。采用工业基础盐培养基，用摇瓶对发酵条件进行了实验研究。结果表明，组氨酸的加入量为0.15g/L时，蛋白表达量增加57.1%；加入0.10%体积比油酸时，蛋白量可增加43.4%；甲醇浓度控制在0.5％体积比左右时可以获得高产量，甲醇的加量超过1%体积比时，会
鲜军[2]2014年在《TMP融合蛋白在毕赤酵母中的中试发酵研究》文中研究表明目前我国原发性血小板减少性紫癜(ITP)、继发性血小板减少性紫癜和化疗及骨髓移植等引起的血小板减少症正在逐年增加。传统治疗方法有输注血小板、激素治疗等,但这些治疗方法在,临床中出现了免疫反应、二次传染等副作用,这给患者造成了身体伤害。TPO(促血小板生成素)是一种巨核细胞和血小板生成的主要调节因子。1994年,TPO分子被发现、克隆,并且开始进行临床开发,TPO基因药物由于在I、II期临床试验中发现给药后可产生与内源性TPO起交叉反应的中和性抗体,导致持久性血小板减少,在美国已停止进行临床试验。TMP(TPO模拟肽)是由14个氨基酸构成的TPO肽类模拟物,与TPO基因无序列同源性。研究表明TMP能够与TPO竞争性结合在c-mpl上有效促进血小板生成,TMP二聚体具有与促血小板生成素(TPO)同样的功效,而且在人体内不会诱导产生与内源性TPO起交叉反应的中和性抗体。但是TMP存在半衰期短的缺点,无法在体内有效发挥促进血小板生成的功效。本论文以实验室构建的毕赤酵母HSA-TMP工程菌株为发酵菌株,在20 L发酵罐中对中试表达HSA-TMP融合蛋白的发酵条件进行了研究。通过研究工程酵母生长曲线,基础盐发酵培养基对酵母生长的影响以及不同诱导条件对目的蛋白表达量的影响,得出了较佳的中试发酵条件:在发酵罐中,培养温度为29℃,诱导温度为27℃,pH=5的条件下,通过对发酵罐各个参数的精细调节,在溶氧不低于20%的条件下,酵母菌在培养约36 h后(即甘油耗尽1h后)结束生物量积累阶段,进入甲醇诱导表达阶段;经过约96 h的发酵,菌体湿重可达到500 g/L左右,此时目的蛋白HSA-TMP的表达量为1 g/L,且生物学活性最佳。本研究得到了利用毕赤酵母中试发酵生产HSA-TMP融合蛋白的初步条件,为利用毕赤酵母表达系统生产第二代促血小板生成素提供了有价值的数据。
孙慧碧[3]2008年在《人血清白蛋白/人白介素-11在毕赤酵母中的克隆与表达》文中研究说明人白介素-11(Interleukin-11,IL-11)在体内由PU-34细胞产生,具丝裂原活性、能支持IL-6依赖的浆细胞瘤细胞系T1165生长。最基本的功能在于造血调控作用,在体外对不同阶段的巨核细胞和血小板生成都具有特异的促进作用。体内注射hIL-11可显着刺激巨核细胞集落(CFU-MK)生长和增加血小板计数,还具有促进消化道上皮损伤恢复、调节脂肪细胞分化等多种生物活性。但是天然的白介素-11在在体内的半衰期较短,为了达到延长其在体内的半衰期,本研究采用了把白介素-11和人血清白蛋白以无连接肽的方式融合。取人胎肺成纤维细胞,以DMEM刺激培养,提取总RNA,通过反转录得到编码人白介素-11的cDNA,克隆到T载体pMD19-Simple上,构建含有IL-11编码基因的重组质粒pMD19/IL-11,DNA序列测定结果证明插入序列与IL-11编码序列完全一致。分别以pMD19/IL-11和含有编码HSA编码基因的重组质粒pBlue/HSA为模板,利用重迭PCR的办法,扩增得到HSA-IL-11融合基因,连接到载体上得到重组质粒pBlue/HI;对pBlue/HI和穿梭质粒pPIC9K分别用EcoRⅠ/NotⅠ进行双酶切,将HSA-IL-11融合基因克隆到表达质粒pPIC9K中构建重组表达质粒pPHI11;经测序验证,所得到的表达载体中目的片段碱基序列和预期一致,读框正确。将SalⅠ线性化的pPHI11电转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,通过组氨酸缺陷型标记和G418抗性筛选,得到抗0.75 mg/mL的G418的毕赤酵母转化子,经过PCR验证,转化子中含有HSA-IL-11融合基因。BMGY种子培养基培养细胞,经离心收集后,于BMMY诱导表达培养基在30℃,200 r/min条件下,以甲醇为唯一碳源诱导3 d,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,重组子表达出相应分子量的目标蛋白,HSA及IL-11抗体的Western-blot免疫杂交实验检测结果表明,融合蛋白中含有HSA和IL-11,说明HSA-IL-11融合蛋白得以表达。定量测定结果表明,融合蛋白在诱导上清液中的表达量约为120 mg/L。对重组菌在摇瓶转速、诱导甲醇浓度、诱导时间、诱导pH、诱导温度等条件下进行优化,得到的诱导条件为:诱导温度30℃,甲醇浓度5%,pH6,诱导细胞密度O.D.600=60,在上述优化条件下HSA-IL-11的表达量为198 mg/L。B9-11/MTT法检测诱导上清液生物学活性的结果表明,融合蛋白HSA-IL-11可以有效刺激B9-11细胞增殖,其IL-11生物学活性约为6.2×104 U/mg。
刘彦丽[4]2003年在《巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人血清白蛋白的研究》文中认为人血清白蛋白是血浆中最丰富的蛋白质成分,约占血浆总蛋白的60%,在人体内具有维持血液渗透压和携带血液中多种配基与组织进行交换等生理功能。临床医疗中用于手术输血和危重病人补液,治疗创伤休克、发烧、水肿和大出血,且能增强人体抵抗力,是重要的临床药物。本文对毕赤酵母(Pichia pastoris)发酵生产重组人血清白蛋白(rHSA)的高密度培养条件及离子交换层析初步分离rHSA粗品进行了研究。对毕赤酵母发酵生产人血清白蛋白生长期培养条件的初步考察可以确定选用YPD作为种子培养基,装液量50ml/500ml叁角瓶,甘油浓度4%,(NH4)2SO4 浓度10g/L,PTM1浓度4ml/L,第一阶段结束后不离心直接流加甲醇诱导。在全合成培养基的基础上考察了诱导过程中添加(NH4)2SO4、微量元素PTM1、油酸、甲醇加量及pH等因素对重组人血清白蛋白表达的影响,发现PTM1能显着提高白蛋白的表达,每12小时补加2-6ml/L甲醇的PTM1蛋白表达量最大。诱导期硫酸铵浓度维持在3g/L左右蛋白表达量最大,高于3g/L抑制蛋白表达。酸性环境不利于蛋白表达,诱导过程维持pH6.0左右最佳。甲醇最佳诱导浓度为10ml/L。添加0.05%的油酸可有效提高蛋白表达。可以此作为发酵罐上发酵培养流加成分的参考。过高浓度的甲醇会抑制毕赤酵母细胞的生长,影响重组人血清白蛋白的表达,因此,提高外源蛋白表达量的关键是通过合适的策略控制发酵罐上甲醇的流加。在此比较了几种流加策略对白蛋白表达的影
龙娟[5]2008年在《人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达》文中研究表明胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种肠促胰岛素,它作为人体内功能性多肽,是迄今能诱导胰岛素分泌的最强物质,可以促进胰岛素基因转录和胰岛素分泌,提高受体对胰岛素的敏感性,消除胰岛素抵抗引发的各种并发症,其最显着的功能是促进胰岛β-细胞功能再生,防止胰岛凋亡,明显改善糖尿病人的血糖水平。如前所述,GLP-1能通过刺激胰岛β细胞的增殖和新生,使β细胞数量增加,对Ⅱ型糖尿病的治疗具有重要的意义。但GLP-1在体内被二肽基肽酶(dipeptidy1 proteaseⅣ,DPP-Ⅳ)水解后,形成无活性的GLP-1(9-36)NH_2,成为胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1receptor,GLP-1R)的体内天然拮抗剂,因此它在体内的半衰期不足5分钟。其短的体内半衰期决定了只有频繁、反复地给药才能取得令人满意的疗效,这一点极大地限制了GLP-1的临床应用。而且化学合成hGLP-1不仅成本高,而且合成产率低,不利于产业化规模生产。为此,本论文构建了人胰高血糖素样肽hGLP-1的突变体基因~2Gly-hGLP-1,并使之与人血清白蛋白HSA进行融合,由于大肠杆菌和哺乳动物细胞表达系统具有明显的缺陷,因此本课题选用比较成熟的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达系统,使~2Gly-hGLP-1-HSA融合基因在毕赤酵母中获得高表达,并对纯化条件进行摸索,同时对纯化后的~2Gly-hGLP-1-HSA融合基因的生物学活性进行了鉴定,为今后长效GLP-1的研究与产业化发展奠定基础。本研究通过人工合成和PCR相结合的方法获得人胰高血糖素样肽-1突变体基因片段~2Gly-hGLP-1,同时获得了~2Gly-hGLP-1和白蛋白的融合基因~2Gly-hGLP-1-HSA(~2Gly-hGLP-1的C端与HSA的N端通过甘氨酸五肽(GGGGG)接头作为连接肽),构建了能在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达的重组表达载体(pPIC9/~2Gly-hGLP-1-HSA),通过电击转化到巴斯德毕赤酵母(GS115)中并进行诱导表达,筛选得到的高表达菌株经5L发酵罐发酵培养,分离纯化后,目的蛋白纯度可达到95%以上,浓度为为1.24g/L。通过动物实验证实了在毕赤酵母中分泌表达的重组蛋白~2Gly-hGLP-1-HSA具有控制血糖的生物活性。现将主要研究结果总结如下:1.通过人工和PCR相结合的方法得到了~2Gly-hGLP-1基因,确定了所用的PCR条件为:94℃变性5min,65℃退火5min,72℃延伸10mm,2个循环。一步PCR得到目的基因为90bp。2.通过已经得到的~2Gly-hGLP-1基因和白蛋白基因进行融合,确定了PCR条件为:94℃变性30s,50℃退火30s,72℃延伸2min,共进行30个循环,最后72℃延伸10min,获得的融合基因长度为1884bp。3.得到的~2Gly-hGLP-1-HSA基因经过EcoRI+XhoI双酶切,连接到pPIC9载体后在大肠杆菌DH5α进行克隆,并且菌落PCR和测序结果表明目的基因已经连接到载体中。4.制备了巴斯德毕赤酵母(GS115)感受态细胞,重组表达载体(pPIC9/~2Gly-hGLP-1-HSA)通过电击转化到感受态细胞中,电转化参数为电压2.0KV,电击时间4.5ms,通过MD平板筛选得到工程菌株。5.确定了工程菌诱导的起始时间和收获时间:工程菌株接种于BMGY培养基中,当菌液OD_(600)=1左右时,添加0.5%的无水甲醇进行诱导,每12h补加0.5%甲醇,经过10%SDS-PAGE电泳检测,结果表明有目的蛋白条带(~2Gly-hGLP-1-HSA融合蛋白为69.5kD),并且在摇瓶条件下,随着诱导时间延长,目的蛋白表达量有累积趋势,并且在诱导84小时内,没有出现目的蛋白降解的情况。6.在5L发酵罐进行了多批次的发酵培养实验,基本摸清了各项控制参数,获得了稳定高效的表达,5升发酵罐上的表达量超过了100mg/L。7.初步确定了~2Gly-hGLP-1-HSA融合蛋白的纯化工艺:发酵产物离心取上清,依次通过阳离子交换柱SP Sepharose F.F,疏水层析Phenyl Sepharose HP,阴离子交换柱Source 30 Q和分子筛Superdex 75纯化,取各步洗脱液做10%SDS-PAGE电泳分析。结果表明经纯化后样品中的杂蛋白明显减少,目的蛋白纯度可达到95%以上,并用Lowry法测定纯化后~2Gly-hGLP-1-HSA融合蛋白的浓度为1.24g/L。8.对昆明小鼠的糖耐量实验表明,皮下注射3.5mg/Kg纯化后的融合蛋白~2Gly-hGLP-1-HSA后20min即可显着地抑制血糖升高的趋势(P＜0.05),整个过程中血糖的升高程度明显比对照组(皮下注射等体积的生理盐水)缓利,说明~2Gly-hGLP-1-HSA融合蛋白具有降血糖活性。
孔静静[6]2009年在《重组毕赤酵母产HSA-CP融合蛋白的发酵与提取》文中认为前胰岛素C肽(CP)可抑制糖尿病并发症,但因在体内半衰期短,故将其与人血清白蛋白基因(HSA)融合,以延长CP药物在体内的半衰期。该融合基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达,获得人血清白蛋白-前胰岛素C肽融合蛋白,简称HSA-CP融合蛋白。针对含有HSA-CP融合基因的巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris /HSA-CP)在BSM培养基培养过程中,产HSA-CP融合蛋白量低、易被蛋白酶降解从而导致发酵液中目的蛋白不易被分离纯化等问题,本论文开展了如下研究:对Pichia pastoris /HSA-CP在摇瓶和发酵罐中的发酵条件进行了优化,提高了HSA-CP融合蛋白产量。摇瓶培养条件下,2%浓度的甘油可使菌体细胞干重达10.64g/L,10g/L浓度的甲醇诱导72h得到52.97 mg/L的HSA-CP融合蛋白;7L发酵罐中对Pichia pastoris /HSA-CP进行低密度培养,细胞干重最终为56.43 g/L,目的蛋白产量达368.45mg/L;高密度培养时HSA-CP融合蛋白在发酵液中含量达到707.3mg/L,细胞干重最终为143.09 g/L。探索了减缓蛋白酶降解HSA-CP融合蛋白的方法。发现发酵液中存在内切型蛋白酶对HSA-CP融合蛋白的降解作用,将目的蛋白降解成更小的蛋白片段。加入硫酸铵基本不会减弱蛋白酶对目的蛋白的降解;酪蛋白水解物能减缓蛋白酶对HSA-CP融合蛋白的降解;控制诱导温度在26℃,摇瓶发酵液中蛋白酶活由30℃时的330.9 U/ml降至231.4 U/ml,诱导时在添加1.5%浓度的酪蛋白水解物维持26℃诱导温度的条件下,低密度发酵时蛋白酶活由511.4 U/ml降至442.2 U/ml,而上述方法对高密度发酵影响较小。确定了发酵液中的HSA-CP融合蛋白分离纯化的主要步骤。超滤浓缩20倍,浓缩液中的HSA-CP融合蛋白含量可达7.04g/L,回收率为82.8%。DEAE Sepharose F.F.阴离子交换层析优于Sephadex G-75凝胶过滤纯化HSA-CP融合蛋白的效果,分离得到的目的蛋白经过SDS-PAGE凝胶电泳,获得单一条带,分子量与理论值相符,产品达到电泳纯。Western-blot分析鉴定显示为HSA和CP的融合体。
张琦[7]2009年在《人β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白的高产菌株筛选及制备工艺》文中认为β干扰素具有抗病毒、抗增殖和免疫调节作用,广泛用于病毒性感染、恶性肿瘤、以及自身免疫性疾病的治疗或实验性治疗。但由于该药物前体在人体内半衰期较短,极大影响了其成药性,给临床应用带来很多的不便。针对以上问题,本研究室从构建融合蛋白的角度出发作出了一系列相关的工作。本文利用研究室已构建的IFNβ-HSA融合基因使其在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中得到了较高水平的表达,建立了一套实验室级的发酵、纯化工艺,达到了融合蛋白纯品批生产量200 mg的水平,为该融合蛋白药物的临床前研究奠定了基础。选用毕赤酵母GS115为宿主,利用营养缺陷型、抗生素G418和免疫斑点法的组合筛选得到的转化子产量高达180 mg/L。经Western Blot实验验证,表达出的融合蛋白在结构上符合我们的要求。经过对菌株的摇瓶表达条件优化,利用有机培养基,接种、培养至36 h后转入pH6.0、甲醇浓度2%、诱导浓缩比3:1的条件下诱导表达,可得到218 mg/L的表达量。在5 L发酵罐的放大试验中,当发酵至100 h时菌浓和产量均达到最高值,菌浓A600为350,表达量为500 mg/L。经过对于融合蛋白IFNβ-HSA的初步纯化条件的摸索,对其吸附、解吸附行为的规律有了进一步的了解。进而制定了新的纯化工艺,经过超滤浓缩、染料亲和层析、镍离子螯合亲和层析、阴离子交换层析几步分离得到了纯度大于95%的目的蛋白纯品,总回收率达到17%。
杨楠[8]2014年在《重组人血清白蛋白在组成型毕赤酵母中重组表达及中试工艺研究》文中研究说明人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA）主要生理功能为运输功能和维持内环境相对稳定，具有抗凝血、清除自由基、维持血液正常的渗透压等功能。目前临床治疗中应用的HSA均来自人血浆提取，由于人血浆来源有限，产量远远不能满足市场需求。随着基因工程技术的发展，已有日本Mitsubishi TanabePharma公司、英国DELTA公司和华北制药致力于研究并推动酵母重组表达药用HSA的产业化进程。现有技术多采用毕赤酵母表达系统，通过甲醇控制醇氧化酶启动子（pAOX1）诱导表达重组人血清白蛋白（Recombinant Human SerumAlbumin，rHSA）。考虑到rHSA的临床治疗用量，生产中发酵规模至少为30000L，甲醇用量十分巨大，储藏和应用均非常困难，严重影响发酵生产的安全性。基于以上问题，本论文研究利用叁磷酸甘油脱氢酶启动子（pGAP）的毕赤酵母表达系统重组表达rHSA，在发酵过程中仅使用甘油一种碳源，生产工艺简单且缩短了发酵周期，具体研究内容简述如下：本论文根据HSA的氨基酸序列及毕赤酵母对密码子的偏好性，将HSA基因进行了密码子优化，重组到pGAPZaA表达载体，用电转化法将目的基因导入X-33酵母基因组中，经Zeocin抗性培养基和PCR鉴定筛选出成功整合到酵母基因组的工程菌，菌株在摇瓶中培养，经SDS-PAGE和wsetern blot鉴定了rHSA的表达。菌株在发酵罐上进行培养，研究X-33组成型表达rHSA菌株发酵的最适发酵条件。将培养基的pH值分别调节至4.0、5.0和6.0，培养72h，测定表达量可知，pH=6.0的发酵罐rHSA表达量最高，因此，pH=6.0是X-33组成型表达rHSA菌株的最佳发酵pH值。研究了补充氮源的最佳方式，分别向四个发酵罐中补加无菌水、（NH4）2SO4、（NH4）H2PO4和H3PO4，培养72h，测定蛋白表达量可知，补加（NH4）H2PO4的菌株表达量最高，因此（NH4）H2PO4是X-33组成型表达rHSA菌株氮源最佳的选择。通过对rHSA发酵的中试工艺进行了初步的探索，为组成型X-33毕赤酵母菌表达的rHSA应用于工业生产打下基础。
陈思[9]2007年在《毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白和几种豆科植物有机硒含量的比较》文中研究说明硒(Selenium)是生物体必需的微量元素，具有抑制癌症、延缓衰老等作用，含硒药物的开发已成为一个研究热点。人血清白蛋白(HSA)也具有很高的药用价值，但是安全性限制了血源HSA的广泛应用。本文根据加入亚硒酸钠后酵母便可以产生硒代氨基酸的思路，把转基因毕赤酵母在含硒基质中培养，以期得到营养价值高、毒性小、利于吸收利用的硒代重组蛋白质。将能够成功表达重组人血清白蛋白(rHSA)的巴斯德毕赤酵母培养至诱导期后，流加亚硒酸钠，对照发酵液不加入亚硒酸钠，通过对比相同菌株在两组培养基中表达的rHSA的含硒量，判断硒能否以硒代氨基酸(SeMet，SeCys)的形式存在于重组蛋白质中。发酵液经热处理、超滤、离子交换和丙酮沉淀等步骤后，进行Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳、X射线能量色散谱(EDX)和原子吸收分析。结果表明，加硒发酵液样品中硒元素的质量分数比对照多23.2％，硒与蛋白质的质量比为0.0069，高于对照发酵液近35倍，初步证明无机硒可以被毕赤酵母同化，转化为硒代氨基酸，并形成硒代重组蛋白质。豆科植物的蛋白质含量高，营养丰富，有很好的保健功效，是对无机硒进行生物有机化的理想载体，具有较强的生物富集能力。本文通过对不同品种豆科植物的硒含量进行了比较发现，来自低硒地区的9号芸豆、10号奶花豆的蛋白富硒能力比较好，10号尤其明显；来自高硒地区的1号大豆中硒含量也较高，而且大豆蛋白的营养价值高于其它豆科植物蛋白；最终确定豆科植物蛋白的提取方法为：浸泡、研磨、过滤制浆、离心、丙酮沉淀、蛋白烘干。
段清芬[10]2007年在《毕赤酵母PMR1的分子克隆及其无义突变株的构建》文中认为巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统由于其高表达、高稳定和高分泌特性，越来越广泛地被应用于多种外源蛋白表达及目的蛋白功能的研究。但外源蛋白在分泌表达过程中，易受酵母内源性蛋白酶的作用而发生降解，导致目的蛋白表达量降低。同时，利用其表达一些人源性蛋白分子和细胞因子时，产物糖基化水平仍偏高。PMR1(Plasma membrane ATPase related 1)广泛存在于各真核生物体中，编码一种新P型钙／锰离子泵，定位于高尔基体膜上。它是调节细胞内钙离子浓度的重要蛋白质之一，同时也直接影响细胞生长及蛋白分泌。研究显示，一些物种的PMR1无义突变株可显着提高外源蛋白表达量，同时也可明显降低其外链糖基化水平。本研究通过构建PMR1无义突变株来提高外源蛋白的表达量，同时降低其外链糖基化水平。首先通过CODEHOP PCR和反向PCR技术分离克隆得到毕赤酵母PMR1，然后构建打靶质粒转化毕赤酵母GS115野生菌株，经基因同源重组得到PMR1无义突变菌株，再利用报告蛋白HSA、HSA-IFN-α-2b、HSA-GHRH和GA分别进行诱导表达，对无义突变株进行评价。结果显示，PMR1无义突变株缺陷菌株生长受EGTA显着抑制，但可通过添加外源钙离子得到缓解。同时，与野生菌株相比，对于糖基化位点少的外源蛋白，毕赤酵母PMR1无义突变菌株外源蛋白表达量明显降低，但在培养基中添加钙离子后产量明显提高。糖基化程度高的蛋白GA在工程菌中表达可明显提高产量，添加钙离子后则恢复至野生菌株表达水平。在考察低溶氧条件下外源蛋白表达过程中发现，GS115野生菌株外源蛋白表达量随溶氧下降而明显降低，而工程菌中外源蛋白表达量无显着变化，故有望将工程菌应用于工业化发酵培养，以期解决野生菌株处于缺氧状态下外源蛋白表达无法达到最佳状态问题。
参考文献：
[1]. 重组人血清白蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达[D]. 孙战胜. 北京化工大学. 2004
[2]. TMP融合蛋白在毕赤酵母中的中试发酵研究[D]. 鲜军. 兰州大学. 2014
[3]. 人血清白蛋白/人白介素-11在毕赤酵母中的克隆与表达[D]. 孙慧碧. 江南大学. 2008
[4]. 巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人血清白蛋白的研究[D]. 刘彦丽. 北京化工大学. 2003
[5]. 人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达[D]. 龙娟. 西南大学. 2008
[6]. 重组毕赤酵母产HSA-CP融合蛋白的发酵与提取[D]. 孔静静. 江南大学. 2009
[7]. 人β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白的高产菌株筛选及制备工艺[D]. 张琦. 江南大学. 2009
[8]. 重组人血清白蛋白在组成型毕赤酵母中重组表达及中试工艺研究[D]. 杨楠. 吉林大学. 2014
[9]. 毕赤酵母表达硒代重组人血清白蛋白和几种豆科植物有机硒含量的比较[D]. 陈思. 北京化工大学. 2007
[10]. 毕赤酵母PMR1的分子克隆及其无义突变株的构建[D]. 段清芬. 沈阳药科大学. 2007
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