Zbtb1基因在小鼠淋巴细胞发育分化过程的作用研究

Zbtb1基因在小鼠淋巴细胞发育分化过程的作用研究

论文摘要

BTB-ZF(Broad complex,tramtrack,and Bric a brac-zinc finger)转录因子家族对免疫细胞发育的谱系决定发挥了至关重要的作用。该家族的成员之一Zbtb1对T细胞发育非常重要,它也同时可以部分影响B细胞与NK细胞的发育。Zbtb1基因在BTB结构域上的一个点突变(即ScanT突变体),或Zbtb1基因的缺失都会导致小鼠T细胞几乎完全消失。IL-7是一个对维持胸腺细胞生存与T细胞正常发育至关重要的因子,其受体α链可以与Zbtb1基因在T细胞发育过程中相互作用。本研究的目的是探究Zbtb1基因在小鼠淋巴细胞发育分化过程中的作用,主要包括两部分:第一,Zbtb1基因促进小鼠淋巴细胞发育并抑制髓系细胞产生;第二,小鼠T细胞发育过程中Zbtb1基因与IL-7Rα相互作用的机制。现将研究内容总结如下:1.本研究以Zbtb1基因野生型和突变型(ScanT)小鼠为研究材料,采用流式细胞术和RT-qPCR等方法得出以下实验结果:Zbtb1野生型造血干细胞在OP9/OPDL1系统中可分化为淋巴细胞(B/T细胞),ScanT小鼠的造血干细胞在体外淋巴细胞诱导条件下,发育为髓系细胞;在体外髓系细胞诱导条件下将野生型造血干细胞(LSK)中过表达Zbtb1基因可抑制LSK向髓系细胞分化。综上得出,Zbtb1基因可以促进淋巴细胞发育,并抑制LSK向髓系细胞的分化。2.本研究以Zbtb1基因野生型和突变型(ScanT)小鼠为研究材料,明确Zbtb1缺失在小鼠T细胞发育过程中对IL-7Rα表达的影响。在体外和体内条件下阐明过表达Zbtb1对IL-7Rα表达的影响。研究结果表明在体外D1细胞系中,IL-7饥饿过夜后,Zbtb1的表达达到峰值,但在IL-7再刺激时,Zbtb1的表达在4h后达到最低水平;从D1细胞培养液中撤销IL-7饥饿过夜,再用不同浓度的IL-7进行再刺激,分析刺激后不同时间细胞表面IL-7Rα的水平得出Zbtb1过表达可在亚适宜IL-7浓度下调IL-7Rα的表达。动物实验中,我们将Zbtb1基因在hCD2-Zbtb1转基因小鼠D2系中过表达,在体内水平检测Zbtb1过表达在T细胞中对IL-7Rα表达的影响。综上得出,Zbtb1和IL-7Rα信号在T细胞发育过程中可以相互调节,相互抑制。

论文目录

  • 项目资金资助
  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 引言
  •   1 BTB-ZF家族的研究进展
  •     1.1 BTB-ZF的概念和结构
  •     1.2 BTB-ZF的生理功能
  •   2 Zbtb1基因的研究进展
  •   3 淋巴细胞的发育和功能
  •     3.1 T淋巴细胞的发育
  •     3.2 B淋巴细胞的发育和功能
  •     3.3 NK细胞的介绍
  •   4 髓系细胞的发育和功能
  •     4.1 树突状细胞
  •     4.2 巨噬细胞
  •     4.3 粒细胞
  •   5 IL-7信号通路对T细胞发育的影响
  •   6 本研究的目的及意义
  • 第二章 Zbtb1基因促进小鼠淋巴细胞发育并抑制髓系细胞产生
  •   1 材料
  •     1.1 主要仪器
  •     1.2 主要试剂
  •     1.3 细胞与动物
  •   2 方法
  •     2.1 OP9/OP9-DL1细胞培养
  •     2.2 细胞分选与流式细胞术
  •     2.3 逆转录病毒包装与转导
  •     2.4 改良吉姆萨(Giemsa)染色
  •     2.5 RNA提取和实时定量PCR
  •   3 结果与分析
  •     3.1 在淋巴细胞诱导条件下ScanT造血干细胞优先分化为髓系细胞
  •     3.2 过表达Zbtb1基因可使ScanT造血干细胞在T细胞诱导条件下恢复T细胞的早期发育
  •     3.3 过表达Bcl2基因可使ScanT造血干细胞在体外部分恢复T细胞的早期发育
  •     3.4 造血干细胞向髓系细胞体外分化系统的建立
  •     3.5 过表达Zbtb1基因对造血干细胞向髓系细胞的体外分化的影响
  •     3.6 淋巴细胞分化条件下Zbtb1基因的突变可上调Csf1r的表达
  •   4 讨论
  • 第三章 T细胞发育过程中Zbtb1基因表达与IL-7Rα信号转导的相互抑制作用
  •   1 材料
  •     1.1 主要试剂及试剂
  •     1.2 动物及细胞
  •   2 方法
  •     2.1 细胞培养
  •     2.2 流式细胞术和细胞分选
  •     2.3 RT-qPCR技术
  •     2.4 逆转录病毒包装与转导
  •     2.5 不同浓度时间条件下,IL-7对于D1细胞系的刺激
  •     2.6 Western Blot分析
  •   3 结果
  •     3.1 IL-7Rα信号通路对Zbtb1表达的影响
  •     3.2 IL-7Rα信号通路在小鼠体内对Zbtb1表达的影响
  •     3.3 建立逆转录病毒转导D1细胞系
  •     3.4 过表达Zbtb1对IL-7Rα表达的影响
  •     3.5 Zbtb1在体内T细胞发育过程中对IL-7Rα的影响
  •     3.6 Zbtb1基因在hCD2-Zbtb1转基因小鼠D2系中过表达
  •     3.7 野生型和hCD2-Zbtb1转基因小鼠CD4SP和CD8SP胸腺细胞表面IL-7Rα的表达的检测
  •     3.8 野生型和Zbtb1转基因小鼠CD4SP和CD8SP TCRβhi小鼠脾细胞表面IL-7Rα的表达的检测
  •   4 讨论
  • 第四章 全文结论
  • 参考文献
  • 附录 英文缩写一览表
  • 作者简介
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 薛宇佳

    导师: 蔡葵蒸,曹欣

    关键词: 基因,小鼠,淋巴细胞,髓系细胞

    来源: 西北民族大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 西北民族大学

    基金: 国家自然基金项目,Zbtb1基因在T细胞发育过程中调控IL-7Rα表达的功能和机制研究,项目编号:81760287,国家自然基金项目,PLZF基因影响先天样T淋巴细胞胸腺滞留的功能和机制研究,编号:31700763,甘肃省青年科技基金计划,Zbtb1基因调控小鼠造血干细胞向淋巴细胞分化的机制研究,编号:17JR5RA277

    分类号: R392;Q344

    DOI: 10.27408/d.cnki.gxmzc.2019.000247

    总页数: 77

    文件大小: 3919K

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