导读:本文包含了真核表达系统论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,基因,蛋白,病毒,抗体,疫苗,密码子。
真核表达系统论文文献综述
王燕,王宇暄,刘亚敏,张桂强,苏文洲[1]（2018）在《利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立》一文中研究指出目的构建类E1A细胞分化抑制因子3(EID3)真核表达载体,并转染人乳腺癌细胞(MCF-7),建立Tet-on诱导表达的目的基因EID3的稳定转染细胞系。方法应用PCR技术,得到目的基因EID3的c DNA,通过双酶切、胶回收方法纯化目的片段EID3。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体p LVuTight-Puro,经菌落酶切、电泳以及测序鉴定。将真核表达质粒p LVu-Tight-Puro-EID3和p LVX-Tet-On Advanced Vector转染MCF-7细胞,分别通过G418和嘌呤霉素选择培养,建立由四环素(doxycycline,DOX)诱导表达的稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测目的基因EID3在DOX诱导下mRNA以及蛋白的表达。结果成功构建了p LVu-Tight-Puro-EID3表达质粒,并建立了由DOX诱导表达的稳定转染细胞系,可在DOX诱导下稳定表达EID3基因的mRNA及蛋白。结论人EID3稳定表达细胞系为研究EID3基因在肿瘤辐射敏感性及药物敏感性的作用提供实验基础。(本文来源于《广东医学》期刊2018年18期）
柴立丽,安芳兰,万玉林,武发菊,孙玉霞[2]（2018）在《口蹄疫亚单位疫苗真核表达系统简述》一文中研究指出目前,防治口蹄疫最有效的方式是接种灭活疫苗,但该疫苗免疫周期短,且存在一定安全隐患,生产和研制新型口蹄疫疫苗尤显重要。亚单位疫苗是利用基因工程技术生产保护性抗原来诱导机体产生免疫反应,由于不含病毒DNA,不会使动物发病,安全性极高,具有良好的应用前景。研制亚单位疫苗,首先要构建携带编码目的蛋白基因的表达载体,然后将构建好的载体导入合适的宿主细胞来表达,需要一个由表达载体和宿主细胞组成的完整表达系统。目前所用表达系统主要有原核系统以及酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞、植物生物反应器等真核系统,其中真核表达系统具有翻译后的加工修饰体系,表达的外源蛋白更接近于天然蛋白质而被广泛应用。本文就常用表达FMDV结构蛋白和非结构蛋白的真核表达系统、FMD亚单位疫苗研究进展进行综述。(本文来源于《中兽医医药杂志》期刊2018年04期）
盛佳璐,宗乾坤,喻飞,王浩,吕利群[3]（2018）在《利用原核及真核表达系统体外表达草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒外突VP56蛋白的研究》一文中研究指出草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒是当前引起我国草鱼出血病的主要流行毒株,VP56是其外层衣壳上的唯一突起蛋白并有可能在病毒入侵阶段发挥核心作用,但该蛋白的具体功能尚不清楚。为了探讨VP56的生物学功能,分别利用大肠杆菌原核表达系统和杆状病毒真核表达系统研究了VP56的体外表达特性。首先从GCRVJX02W株的细胞感染混合物中抽提总RNA,并通过RT-PCR方法获得目的基因VP56,分别克隆至pGEX-4T-3及pFastBacHTA载体上,将质粒pGEX-4T-3-VP56转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后,成功表达融合蛋白GST-VP56,大小为83ku,以包涵体形式存在;蛋白经纯化后免疫老鼠,制备了VP56的多克隆抗体,可以和rVP56产生特异性免疫结合。将pFastBacHTA-VP56转化至DH10Bac,成功转座后,提取重组杆粒DNA并鉴定且测序正确后转染SF9昆虫细胞。结果表明,自转染96h起,转染杆粒的细胞生长停滞,不断裂解。Westernblot结果显示,细胞表达重组蛋白His-VP56,大小约为62ku,为可溶蛋白。本研究利用原核表达系统和真核表达系统体外表达了VP56蛋白,制备了抗VP56多克隆抗体,为深入研究VP56蛋白在病毒入侵时的生物学功能奠定了基础。(本文来源于《上海海洋大学学报》期刊2018年04期）
张钰[4]（2018）在《rhAm原核/真核表达系统的构建及其生物学活性研究》一文中研究指出目的:临床上牙周疾病治疗的终极目标在于恢复牙周组织原有的结构和功能—即牙周组织再生,形成牙周新附着。尽管从猪的牙胚中提取的釉基质蛋白(Enamel matrix proteins,EMPs)已经用于了被病变破坏的牙周组织的修复,实现牙周组织的功能性重建,但商品化的EMPs仍存在获取来源限制,获取方法耗时耗力等诸多问题。近年来,有研究者们提出釉原蛋白(amelogenin,Am)是EMPs促进牙周组织再生的主要活性成分,有望代替EMPs用于牙周组织再生。因此,本实验通过基因工程技术构建原核和真核表达系统,分别在E.coli WK6、毕赤酵母GS115以及HEK 293F中表达并纯化出rhAm,将hPDLFs与HS-5作为靶细胞,初步探究不同来源的rhAm对其生物学特性的影响,为rhAm后续开发应用奠定实验基础。方法:(1)利用基因克隆方法获取hAm-His基因,插入pET-22b载体,构建编码hAm-His重组蛋白的原核表达质粒pET-22b-Am-His。借助电转化技术将表达质粒导入大肠杆菌WK6中进行诱导表达,目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western Blotting对其进行鉴定。(2)利用基因克隆方法获取hAm-His基因,插入pCMV载体/pPIC9K载体,构建编码hAm-His重组蛋白的真核表达质粒pCMV-Am-His/pPIC9K-Am-His。借助瞬时基因转染技术将重组质粒pCMV-Am-His导入HEK 293F细胞,借助电转化技术将重组质粒pPIC9K-Am-His导入毕赤酵母GS115菌株。目的蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,通过SDS-PAGE和Western Blotting检测对其进行鉴定。(3)用MTT检测,划痕实验,ALP检测试剂盒以及Western Blotting检测等方法比较不同来源的rhAm对hPDLFs和HS-5增殖、迁移、粘附以及细胞中ALP水平的影响和对HS-5中成骨分化标志物蛋白表达的影响。结果:(1)通过SDS-PAGE和Western Blotting检测的鉴定,在E.coli WK6及HEK293F细胞中获得了分子量约25kDa的rhAm。(2)大肠杆菌表达系统与哺乳动物细胞表达系统所表达的rhAm均能显着促进hPDLFs和HS-5的增殖、迁移、粘附和细胞内ALP水平的上调,还能促进HS-5中I型胶原、RunX2的表达,且二者的作用效果无显着性差异。结论:大肠杆菌表达系统与哺乳动物细胞表达系统所表达的rhAm都具有生物活性,且它们的生物活性相似。(本文来源于《暨南大学》期刊2018-06-30）
边叶雨[5]（2018）在《Y3抗病毒蛋白真核表达系统构建和诱导抗病机制的分析》一文中研究指出植物在受到某些外界物理、化学或者生物等因素侵袭时会产生一种系统获得性抗性(SAR),使植物能够抵抗病原微生物的侵染。Y3蛋白是从食用菌毛头鬼伞(Coprinus comatus Muell.ex Fr.)中提取的一种碱性糖蛋白,对心叶烟枯斑寄主上的烟草花叶病毒(TMV)的侵染抑制率高达83.0%,可以较强的抑制烟草花叶病毒的复制。据前期试验表明Y3蛋白可以与TMV外壳蛋白(CP)结合互作,从而降低病毒的侵染率。同时,我们也推测对烟草花叶病毒如此高的抑制作用,可能不仅是通过这种途径抑制烟草花叶病毒,有可能类似于紫茉莉抗病毒蛋白(MAP)一样,可以诱导烟草本身产生系统抗性,从而抵抗TMV的侵染。本文以毕赤酵母真核表达系统为研究系统,克隆获得了Y3蛋白基因并与真核表达载体连接,成功实现了Y3蛋白的真核表达。并以烟草和TMV为研究对象,研究真核表达的Y3蛋白对烟草花叶病毒(TMV)的系统诱导抗性,测定了一些烟草抗病防御酶的活性;利用实时荧光定量PCR技术研究了Y3蛋白系统诱导抗病性的信号传导途径,其结果如下:1.通过将Y3蛋白基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC-9k中,构建了Y3蛋白真核表达载体,电击转化至毕赤酵母GS115,Y3蛋白得到表达,经试验验证得出1.0%的甲醇诱导获得的Y3蛋白表达量最高。2.将真核表达的Y3蛋白分别喷施感病前后的烟草和健康烟草,除过氧化物酶(Peroxidase,POD)外,多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)、苯丙氨酸解氨酶(Phenylanlanine ammonialyase,PAL)、几丁质酶(Chitinase)和β-1,3葡聚糖酶(β-1,3 glucanase)等抗病防御酶的活性相对对照组均有不同程度的增强。初步证明Y3蛋白可能诱导产生系统抗病性。3.实时荧光定量PCR技术检测发现,Y3蛋白喷洒烟草叶片后,系统获得抗病性标志基因酸性病程相关基因1(Acid pathogenesis-related gene 1,PR1-a)和碱性病程相关基因1(Basic pathogenesis-related gene 1,PR1-b)上调,水杨酸信号传导途径关键基因病程相关基因非表达子1(Nonexpressor of pathogenesis-related gene 1,NPR1)上调,水杨酸合成关键酶基因苯丙氨酸解氨酶基因(Phenylalanine ammonia lyase gene,PAL)上调。进一步证明Y3蛋白是通过启动烟草的水杨酸信号传导途径诱导烟草产生系统获得性抗性,使烟草产生了抗病防卫反应。该研究丰富了蛋白诱导剂与植物互作理论,为进一步揭示蛋白类诱导剂植物系统获得性抗性及机制的研究奠定了基础。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-06-02）
续丹丹,温赛,王凤寰,刘怀然,韩煦[6]（2016）在《柞蚕溶菌酶真核表达系统的构建及重组蛋白纯化分析》一文中研究指出利用甲醇营养型毕赤酵母对柞蚕溶菌酶进行高效重组表达。首先根据毕赤酵母密码子偏爱性对柞蚕溶菌酶成熟肽基因进行密码子优化,将优化后的基因序列ApLyz克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA中,构建重组表达载体pPICZαA-ApLyz。重组载体经电转化整合入毕赤酵母菌株GS115基因组中,并利用高质量浓度Zeocin(500μg/mL)抗性平板筛选得到高拷贝转化子。摇瓶发酵显示,甲醇诱导72 h后,高拷贝菌株发酵液中溶菌酶活性为450 U/mL(313 U/mg总蛋白),酶活约为单拷贝菌株的3.1倍。纯化后的重组柞蚕溶菌酶分子质量约14 kDa,酶活为3 870 U/mL,比酶活为20 262 U/mg。酶学性质分析显示,重组柞蚕溶菌酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为4.5,具有较好的热稳定性。(本文来源于《饲料研究》期刊2016年10期）
王善辉,薛忠,李云龙,成子强[7]（2016）在《新城疫病毒Clone 30株辅助表达系统的构建及真核表达》一文中研究指出为研究新城疫病毒NP、P和L蛋白作用机理和新城疫病毒反向遗传操作系统,构建新城疫病毒Clone 30株NP、P和L基因的真核表达载体。根据Gen Bank中新城疫病毒Clone 30株的全长序列(Y18898.1),设计3对特异性引物,用RT-PCR法扩增出新城疫病毒Clone 30株的NP、P和L基因,将其克隆到真核载体pCI-neo上。通过酶切和测序验证克隆正确,得到重组质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L,瞬时转染到BHK-21细胞中。经RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光试验分别检测NP、P和L蛋白在BHK-21细胞中的表达。结果表明,重组质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L构建成功,为后期新城疫病毒反向遗传操作系统的构建奠定了基础。(本文来源于《中国家禽》期刊2016年08期）
张冬辉[8]（2015）在《中华鼢鼠卵透明带3真核表达系统的构建及其免疫不育的研究》一文中研究指出中华鼢鼠(Myospalax fontanierii)属仓鼠科、鼢鼠亚科动物,是我国北方旱作区鼠类的优势种,其数量多、分布广,对我国林业、牧业、农业等发展造成严重威胁和巨大的经济损失。目前的防治方法主要还是捕杀、物理隔离、药剂趋避、药剂毒杀等,虽然在控制鼢鼠种群数量和减少林木受害等起到一定作用,但其面临着工作量大,效果不明显,专一性差,种群恢复快、经济成本高和存在环境安全等多种问题。因此迫切需要一种能够满足安全经济、专一性强,持续久且简单易行的防治新方法,而免疫不育技术的出现为防治中华鼢鼠提供了新的思路。免疫不育是将具有一定免疫活性的物质直接或间接导入生物体内,形成有效抗原并产生免疫反应,破坏靶标生物自身生殖系统,从而达到降低其生育率的目的,在免疫不育的研究过程中,靶标抗原的选择一直是工作的重点,科研工作者在动物卵透明带有关方面已做了大量研究实验,并且已经证实了卵透明带3(ZP3)在免疫不育中发挥的关键性作用,因此获得中华鼢鼠卵透明带3(mZP3)基因并将其连接到真核表达载体上,制备成基因疫苗来进行防治成为研究的重点,本研究即通过构建重组载体并体外表达目的mZP3蛋白,并进行基因疫苗免疫小鼠的探索性试验来为免疫不育疫苗的研制奠定基础。本研究以中华鼢鼠mZP3为目的基因,以此构建EGFP-mZP3真核表达载体,经双酶切和测序正确后,体外转染CHO细胞,通过试验优化转染方案,通过荧光观察蛋白表达情况并在基因水平和蛋白质水平上分别进行RT-PCR和WB的检测,结果表明所构建的重组质粒成功在CHO细胞中得到表达,这为免疫不育疫苗的研制提供可能。为排除GFP蛋白对目的蛋白的免疫效价的影响,重新构建了重组载体pcDNA3.1-mZP3,为提高其表达的效率,在目的基因序列前面加入了Kozak序列,为方便后期的检测,在其序列末端添加了6个His标签,由于His属于小分子物质并不会对目的蛋白的生化性质和结构产生影响,因此不会影响其免疫效价。经测序无误后进行体外转染CHO细胞并进行RT-PCR和WB检测目的蛋白的表达情况,经检测目的蛋白成功在体外得到表达,为探究其作为不育DNA疫苗的可能性,大量制备重组质粒进行小鼠免疫试验,分别在免疫后14、28、42 d后采集小鼠血清进行Elisa检测抗体反应情况,同时在免疫后将小鼠合笼进行抗生育实验,结果分析表明,在小鼠体内成功检测到IgG抗体,小鼠的生育率也有所下降,这为以后DNA免疫不育疫苗的研制提供了可能和奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
黎明,张晓霞,赵嘉庆,杨延辉,赵巍[9]（2014）在《细粒棘球蚴95抗原在真核昆虫表达系统中表达、纯化及免疫原性初步分析》一文中研究指出目的采用真核昆虫表达系统表达细粒棘球蚴95(Eg95)抗原,探讨其免疫原性。方法从GeneBank获取Eg95基因序列(序列编号:EU595937.1),合成开放读码框(CDS)全长基因;利用杆状病毒表达系统Bac-to-Bac symtem在昆虫细胞中表达目的基因Eg95,亲和层析纯化,Western blot鉴定;对Balb/c小鼠分别免疫接种重组昆虫表达目的蛋白Eg95(简称eu rEg95)、原核重组表达Eg95(简称pro rEg95)、阴性对照PBS,制备免疫血清,间接法ELISA对各组特异性IgG抗体进行分析。结果合成Eg95基因CDS全长471 bp,经测序与理论完全一致;Western blot证实目的蛋白通过重组杆状病毒在昆虫细胞内实现可溶性表达;ELISA结果表明:eu rEg95能够诱导产生原头蚴特异性IgG抗体,抗体水平高于pro rEg95组(P<0.05)。结论利用昆虫杆状病毒表达系统成功表达出具有良好免疫原性的Eg95抗原,为优化细粒棘球蚴疫苗奠定基础。(本文来源于《宁夏医科大学学报》期刊2014年09期）
张晶,付洁,宋海峰[10]（2014）在《真核表达系统的抗体库技术研究进展》一文中研究指出单克隆抗体(mAb)药物研制经历了鼠源性、人鼠嵌合、人源化改造以及全人源这4个阶段,其中全人源抗体因其免疫原性最低而得到相对广泛的应用。全人源抗体的制备主要包括转基因鼠技术和抗体库技术,在抗体库技术中主要包括基于原核表达系统的噬菌体技术和基于真核表达系统的核糖体技术、酵母技术以及哺乳动物细胞技术。本文主要综述了近些年来基于真核表达系统的抗体库技术的研究发展。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2014年08期）
真核表达系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目前,防治口蹄疫最有效的方式是接种灭活疫苗,但该疫苗免疫周期短,且存在一定安全隐患,生产和研制新型口蹄疫疫苗尤显重要。亚单位疫苗是利用基因工程技术生产保护性抗原来诱导机体产生免疫反应,由于不含病毒DNA,不会使动物发病,安全性极高,具有良好的应用前景。研制亚单位疫苗,首先要构建携带编码目的蛋白基因的表达载体,然后将构建好的载体导入合适的宿主细胞来表达,需要一个由表达载体和宿主细胞组成的完整表达系统。目前所用表达系统主要有原核系统以及酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞、植物生物反应器等真核系统,其中真核表达系统具有翻译后的加工修饰体系,表达的外源蛋白更接近于天然蛋白质而被广泛应用。本文就常用表达FMDV结构蛋白和非结构蛋白的真核表达系统、FMD亚单位疫苗研究进展进行综述。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
真核表达系统论文参考文献
[1].王燕,王宇暄,刘亚敏,张桂强,苏文洲.利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立[J].广东医学.2018
[2].柴立丽,安芳兰,万玉林,武发菊,孙玉霞.口蹄疫亚单位疫苗真核表达系统简述[J].中兽医医药杂志.2018
[3].盛佳璐,宗乾坤,喻飞,王浩,吕利群.利用原核及真核表达系统体外表达草鱼Ⅱ型呼肠孤病毒外突VP56蛋白的研究[J].上海海洋大学学报.2018
[4].张钰.rhAm原核/真核表达系统的构建及其生物学活性研究[D].暨南大学.2018
[5].边叶雨.Y3抗病毒蛋白真核表达系统构建和诱导抗病机制的分析[D].南昌大学.2018
[6].续丹丹,温赛,王凤寰,刘怀然,韩煦.柞蚕溶菌酶真核表达系统的构建及重组蛋白纯化分析[J].饲料研究.2016
[7].王善辉,薛忠,李云龙,成子强.新城疫病毒Clone30株辅助表达系统的构建及真核表达[J].中国家禽.2016
[8].张冬辉.中华鼢鼠卵透明带3真核表达系统的构建及其免疫不育的研究[D].西北农林科技大学.2015
[9].黎明,张晓霞,赵嘉庆,杨延辉,赵巍.细粒棘球蚴95抗原在真核昆虫表达系统中表达、纯化及免疫原性初步分析[J].宁夏医科大学学报.2014
[10].张晶,付洁,宋海峰.真核表达系统的抗体库技术研究进展[J].细胞与分子免疫学杂志.2014
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