导读:本文包含了重组绿脓杆菌外毒素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:杆菌,毒素,剂量,激素,疟原虫,铜绿,细胞。
重组绿脓杆菌外毒素论文文献综述
岑丹维,宋易玲,张婵琼,毛珊珊,叶晓鲜[1]（2017）在《绿脓杆菌外毒素PE38KDEL重组蛋白原核表达及多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的:通过原核表达系统制备绿脓杆菌外毒素(PE)PE38KDEL重组蛋白,并制备特异性兔免疫血清多克隆抗体。方法:选择PE部分基因(PE38),并将C端609-613位的氨基酸REDLK突变为KDEL,通过原核密码子优化(http://www.jcat.de)后全基因合成,经Hind III和Xho I酶切位点克隆至p ET32a(+)原核表达载体,构建p ET32a(+)/PE38KDEL重组质粒,将测序正确的重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)感受态细菌中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组PE38KDEL蛋白,经Ni-NTA亲和层析法制备纯化蛋白,采用SDS-PAGE电泳和Western blot法进行鉴定。进一步将PE38KDEL纯化蛋白免疫日本大耳白兔制备PE38KDEL特异性多克隆抗体,并采集免疫前后血清,用ELISA法检测免疫后的抗体反应和效价。结果:成功构建了p ET32a(+)/PE38KDEL重组质粒。在原核表达系统中该质粒成功表达并获得纯化的PE38KDEL蛋白。SDSPAGE电泳显示蛋白分子质量约为57 k Da,与预计理论值大小相符合。Western blot法检测结果显示,在分子质量约57 k Da处出现单一条带。通过免疫大耳白兔成功获得PE38KDEL特异性多克隆抗体,抗体效价高达1:60 000。结论:PE38KDEL蛋白可诱导兔产生特异性多克隆血清抗体,且该抗体效价高、特异性强,为进一步研究基于PE38KDEL毒素的生物学和免疫学等功能奠定了基础。(本文来源于《温州医科大学学报》期刊2017年01期）
周爱萍,杜春霞,刘鹏,孙永琨,吴广谋[2]（2011）在《重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白Ⅰ期人体耐受性临床研究》一文中研究指出目的:考察人体对冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(lyophilizedrecombinant human luteinizing hormone releasing hormone-exotoxin of pseudomonas aeruginosa fusion protein,简称LHRH-PE40)的耐受性、最大耐受剂量(MTD)和药代动力学特点,以及人体对LHRH-PE40产生抗体的规律,并初步观察LHRH-PE40的抗肿瘤活性。方法:LHRH-PE40经静脉输注给药。单次给药试验共10例患者接受单剂LHRH-PE40治疗,剂量范围为220～1 110μg.m-2。每日给药试验14例患者接受LHRH-PE40输注每日1次,连用14 d,剂量范围120～600μg.m-2;隔日给药试验共7例患者接受LHRH-PE40输注隔日1次,共14次,剂量为600和700μg.m-2。结果:每日给药方法的MTD为400μg.m-2,剂量限制性毒性为乏力、食欲下降和肾功能损害。肾功能损害为一过性和可逆的。隔日给药方法的MTD为600μg.m-2。在MTD剂量时,LHRH-PE40的一般不良反应包括乏力、食欲下降、疼痛、发热、头疼头晕、过敏反应、恶心/呕吐、胃黏膜炎、手足麻木和心悸,大多为1/2度。对肝功能影响较小,对血液学无抑制作用。机体存在对LHRH-PE40的基础抗体,滴度23～25,治疗后抗体滴度可上升至210～212。1例卵巢癌患者CA125下降了620 U.mL-1。结论:在MTD剂量时,LHRH-PE40的不良反应温和可控。对卵巢癌可能有一定的抗肿瘤活性,值得进一步研究。Ib和Ⅱ期研究中应考察抗体对疗效和药代动力学的影响。(本文来源于《中国新药杂志》期刊2011年17期）
钱锋[3]（2011）在《不同的化学连接剂偶联恶性疟原虫Pfs25抗原和绿脓杆菌重组去毒外毒素rEPA》一文中研究指出目的偶联恶性疟原虫Pfs25抗原和绿脓杆菌重组去毒外毒素rEPA,并测试不同化学连接剂的偶联效果。方法用化学连接剂NAHT(DL-N-acetylhomocysteine thiolactone)在Pfs25蛋白上加自由巯基,化学连接剂Sulfo-EMCS、EMCH、SBAP和Sulfo-SIAB分别修饰载体蛋白rEPA,通过巯基化的Pfs25和经化学基团修饰的rEPA在一定条件下反应,形成Pfs25与rEPA的偶联蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测偶联结果。结果成功地将Pfs25偶联到rEPA上,构建了偶联蛋白Pfs25-rEPA。对于蛋白的化学基团修饰,伯胺基与NHS(N-hydroxysuccinimide)酯之间的反应效率要高于以EDC为桥联剂的羧基与酰肼基之间的反应;对于偶联反应,马来酰亚胺基与巯基之间的反应效率要高于卤素乙酰基与巯基之间的反应。结论各化学连接剂都能将Pfs25偶联到rEPA上,但偶联效率各不相同,并形成不同样式的偶联蛋白。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2011年04期）
史新昌,韩春梅,李响,刘兰,丁有学[4]（2010）在《绿脓杆菌外毒素A功能片段重组蛋白GP38质控方法和质量标准的建立》一文中研究指出目的建立人性腺激素释放激素类似物—绿脓杆菌外毒素A功能片段重组蛋白GP38的质控方法和质量标准。方法采用HeLa细胞/结晶紫比色法测定GP38蛋白的生物学活性,并进行精密性和回收率验证;反相高效液相色潽法(RP-HPLC)测定其纯度,用自编CPM软件进行肽图比较分析;其他检测项目按《中国药典》叁部(2005版)规定进行。结果GP38蛋白生物学活性测定方法经验证,原液试验内变异系数(CV)为10%,试验间CV值为20%;成品试验内CV值为12%,试验间CV值为21%。用该法对GP38蛋白原液和成品进行检测,其生物学活性分别为(3736±483)和(1777±260)U/ml。原液经RP-HPLC分析,纯度为(97.1±0.2)%,符合其质量标准大于95.0%的规定。用自编CPM软件分析肽图结果显示,相同酶切条件重复检测的相似度大于0.99,不相同次酶切、相同条件重复检测的相似度大于0.90。其他各项检测结果均符合《中国药典》叁部(2005版)的相关要求。结论所建立的质控方法和质量标准可用于GP38蛋白产品的常规检定。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2010年04期）
张国利,何畅,吴广谋,岳玉环,朱平[5]（2007）在《冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白与不同细胞受体结合竞争试验》一文中研究指出目的为了验证重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(LHRH-PE40)对癌细胞的靶向性,对LHRH-PE40进行125I标记,并进行了与多种细胞受体结合试验和竞争试验。为该药物的导向治疗提供可靠的依据。方法利用体外细胞培养方法将人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo,人T细胞淋巴瘤Hut102,人白血病细胞系Jurket,狗肾细胞系DK 5种细胞系,分别大量培养至单层,收获细胞,破碎,制备细胞膜。同时制备鼠肺组织的细胞膜进行试验。利用125I标记的LHRH-PE40与不同细胞膜进行放射性配基结合分析,以及与LHRH竞争结合分析。确定这些细胞表面有无LHRH受体,并用Scatchard作图方法计算出其亲和常数及最大结合量。结果小鼠肺组织细胞膜、人T细胞淋巴瘤Hut102、人白血病细胞系Jurket、狗肾细胞系DK未见配基-受体特异性结合及竞争结果;而人胃癌细胞系BGC-823,人结肠癌细胞系Lovo与LHRH-PE40的结合竞争符合特异性配基-受体结合、竞争特性。其中LHRH-PE40与Lovo细胞的Kd=10.6±2.33 nmol/L,Bmax=345±7.59 pmol/mg;与BGC-823细胞的Kd=37.82±1.42nmol/L,Bmax=475±17.86 pmol/mg。结论受试的6种细胞膜蛋白中正常细胞(鼠肺、狗肾)和两种肿瘤细胞(Jurket、Hut102)表面无LHRH受体表达。而结肠癌和胃癌肿瘤细胞表面存在LHRH受体的表达。另外本试验还证实了重组毒素LHRH-PE40保留了天然LHRH与其受体结合的高亲和力。(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2007年05期）
李爱学,杨秀荣[6]（2005）在《表面等离子体共振和电化学方法研究重组绿脓杆菌外毒素A与DNA和模拟生物膜的相互作用》一文中研究指出近年来,许多含有两亲序列结构、在脂膜融合及干扰过程中发挥重要作用的蛋白和多肽被用来构建融合蛋白作为转基因载体用于细胞的转染实验中。绿脓杆菌外毒素A就是这样一类膜活性多肽,它是绿脓杆菌分泌的一种主要的致病因子,由一条含有613个氨基酸的多肽组成,包括细胞识别区、跨膜区、毒性区叁个部分。这种毒素通过受体介导的内吞作用进入细胞,并由胞内体内化,在胞内体的酸性环境下,毒素跨膜部分的构像发生改变并插入到胞内体的膜中,最终它的毒性部分被转运到胞浆中发挥毒性作用。(本文来源于《中国蛋白质组学第叁届学术大会论文摘要》期刊2005-07-01）
燕翔,丁强,张元芳,徐永华[7]（2004）在《重组转化生长因子α-绿脓杆菌外毒素融合蛋白对人膀胱癌细胞生长的抑制作用》一文中研究指出目的探讨重组转化生长因子α绿脓杆菌外毒素融合蛋白(TP40)对膀胱癌细胞生长的抑制作用。方法采用蛋白印迹(Westernblot)法检测人膀胱癌T24细胞表皮生长因子受体(EGFR)的表达。用浓度为5～1000μg/L的TP40处理T24细胞,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞生长24、48、72和96h时的生长情况。氚胸腺嘧啶核苷([3H]TdR)掺入法检测TP40对T24细胞蛋白质合成的抑制作用。用浓度为1～7500μg/L的表皮生长因子(EGF)竞争拮抗TP40的细胞毒作用。结果T24细胞表达EGFR强阳性。浓度为5、50、100、250、500、750和1000μg/L的TP40处理T24细胞96h,细胞生长抑制率分别为10%、19%、27%、41%、47%、53%和61%。用750μg/L的TP40处理T24细胞24、48、72和96h,[3H]TdR掺入率分别为80%,69%,48%和51%。浓度为1～7500μg/L的EGF对TP40有竞争抑制作用。结论人膀胱癌T24细胞能高水平地表达EGFR;重组TP40对T24细胞的生长具有剂量、时间依赖性抑制作用,该作用是通过EGFR进行的。(本文来源于《中华外科杂志》期刊2004年23期）
孙云霞,李莉莉,孙衍庆,张雪琳,左从林[8]（2004）在《冻干绿脓杆菌外毒素A-促黄体激素释放激素重组毒素注射剂单次静脉注射给予食蟹猴的毒性试验》一文中研究指出目的:研究单次给药供试品后,动物出现的毒性反应,了解药物对动物的致死剂量,最大耐受量。方法:食蟹猴单次给药剂量分别为1500、2250、3375μg/kg,给药后进行一般生理指标的观察、体重、体温、心电图检查,实验室检查指标包括血常规、血凝、血生化指标检查,中毒死亡动物进行病理组织学检查等。结果:本试验条件下,LHRH-PE40单次静脉注射给予食蟹猴,最大耐受量为2250μg/kg,致死剂量为3755μg/kg。动物的中毒表现主要为食量减少、体重减轻、精神抑制、心率减慢,QT间期延长等。实验室检查发现动物药后白细胞计数增多,血清ALT、AST、CR、BUN升高;病理组织学检查显示动物主要病理改变为肾小管弥漫性变性坏死、肝细胞变性坏死。(本文来源于《中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议论文摘要汇编》期刊2004-06-30）
马霄,田霖,张庶民,雷殿良[9]（2003）在《应用Vero细胞法测定重组减毒绿脓杆菌外毒素A的残余毒力》一文中研究指出绿脓杆菌外毒素A(ETA)有ADP -核糖基转移酶的活性 ,在真核细胞中通过催化ADP -核糖基团从NAD+转移到EF 2 (延长因子 2 ) ,使蛋白质合成终止 ,致细胞死亡 ,其作用机制、机理与白喉毒素相同。本文应用Vero细胞法测定了绿脓杆菌外毒素A的毒性 ,发现Vero细胞对绿脓杆菌外毒素A的敏感度高达 3.0× 10 -5mg/ml,且精密度高 ,准确性好 ,是一种有效、可行的绿脓杆菌外毒素毒力的测定方法。对 3批经基因工程减毒后样品的残余毒力进行了测定 ,发现样品基本无细胞毒性 ,毒力比原毒素低 2× 10 15倍(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2003年04期）
万忠海,王景林,江禹,刘晓明,何畅[10]（2002）在《绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白基因重组与鉴定》一文中研究指出为了获得高表达量重组绿脓杆菌外毒素 A(PEA)受体结合区蛋白 ,以用作免疫原 ,从含有目的片段 (10 0 0 bp)的 p ET- 2 0 (b) +B1 0 质粒切下目的片段 ,以正确阅读框架插入含有 T7lac启动子的 p ET- 2 8c(+) DNA中 ,构建了p ET- 2 8c(+) B1 0 质粒。用该质粒转化大肠杆菌 BL2 1 (DE3 )、BL2 1 (DE3 ) p L y S,经 IPTG诱导 ,BL2 1 (DE3 ) p L y S能高效表达目的蛋白。 SDS- PAGE、Western blot分析证实 ,该蛋白即是所需的蛋白 ,该重组蛋白占菌体总蛋白的 5 8%。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2002年06期）
重组绿脓杆菌外毒素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:考察人体对冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白(lyophilizedrecombinant human luteinizing hormone releasing hormone-exotoxin of pseudomonas aeruginosa fusion protein,简称LHRH-PE40)的耐受性、最大耐受剂量(MTD)和药代动力学特点,以及人体对LHRH-PE40产生抗体的规律,并初步观察LHRH-PE40的抗肿瘤活性。方法:LHRH-PE40经静脉输注给药。单次给药试验共10例患者接受单剂LHRH-PE40治疗,剂量范围为220～1 110μg.m-2。每日给药试验14例患者接受LHRH-PE40输注每日1次,连用14 d,剂量范围120～600μg.m-2;隔日给药试验共7例患者接受LHRH-PE40输注隔日1次,共14次,剂量为600和700μg.m-2。结果:每日给药方法的MTD为400μg.m-2,剂量限制性毒性为乏力、食欲下降和肾功能损害。肾功能损害为一过性和可逆的。隔日给药方法的MTD为600μg.m-2。在MTD剂量时,LHRH-PE40的一般不良反应包括乏力、食欲下降、疼痛、发热、头疼头晕、过敏反应、恶心/呕吐、胃黏膜炎、手足麻木和心悸,大多为1/2度。对肝功能影响较小,对血液学无抑制作用。机体存在对LHRH-PE40的基础抗体,滴度23～25,治疗后抗体滴度可上升至210～212。1例卵巢癌患者CA125下降了620 U.mL-1。结论:在MTD剂量时,LHRH-PE40的不良反应温和可控。对卵巢癌可能有一定的抗肿瘤活性,值得进一步研究。Ib和Ⅱ期研究中应考察抗体对疗效和药代动力学的影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组绿脓杆菌外毒素论文参考文献
[1].岑丹维,宋易玲,张婵琼,毛珊珊,叶晓鲜.绿脓杆菌外毒素PE38KDEL重组蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J].温州医科大学学报.2017
[2].周爱萍,杜春霞,刘鹏,孙永琨,吴广谋.重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白Ⅰ期人体耐受性临床研究[J].中国新药杂志.2011
[3].钱锋.不同的化学连接剂偶联恶性疟原虫Pfs25抗原和绿脓杆菌重组去毒外毒素rEPA[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2011
[4].史新昌,韩春梅,李响,刘兰,丁有学.绿脓杆菌外毒素A功能片段重组蛋白GP38质控方法和质量标准的建立[J].中国生物制品学杂志.2010
[5].张国利,何畅,吴广谋,岳玉环,朱平.冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白与不同细胞受体结合竞争试验[J].中国实验诊断学.2007
[6].李爱学,杨秀荣.表面等离子体共振和电化学方法研究重组绿脓杆菌外毒素A与DNA和模拟生物膜的相互作用[C].中国蛋白质组学第叁届学术大会论文摘要.2005
[7].燕翔,丁强,张元芳,徐永华.重组转化生长因子α-绿脓杆菌外毒素融合蛋白对人膀胱癌细胞生长的抑制作用[J].中华外科杂志.2004
[8].孙云霞,李莉莉,孙衍庆,张雪琳,左从林.冻干绿脓杆菌外毒素A-促黄体激素释放激素重组毒素注射剂单次静脉注射给予食蟹猴的毒性试验[C].中国药理学会毒理专业委员会第十次学术会议论文摘要汇编.2004
[9].马霄,田霖,张庶民,雷殿良.应用Vero细胞法测定重组减毒绿脓杆菌外毒素A的残余毒力[J].微生物学免疫学进展.2003
[10].万忠海,王景林,江禹,刘晓明,何畅.绿脓杆菌外毒素A受体结合区蛋白基因重组与鉴定[J].中国兽医学报.2002
论文知识图
