导读:本文包含了锤头状论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:锤头,鞭毛虫,丙酮酸,激酶,滴虫,阴道,原虫。
锤头状论文文献综述
陈玉琪,周翔[1]（2016）在《基于锤头状核酶结构的miRNA-221海绵表达载体的构建及其性能研究》一文中研究指出miRNA海绵是一条含若干个miRNA靶定位点的mRNA,可像海绵一样吸附miRNA,使其无法与天然靶点结合,因此它是高效的miRNA抑制剂。但由于miRNA与靶点的相互作用是只依赖种子区域(miRNA的第2-8位),因此特异性不高。而且并不清楚miRNA海绵能否降解吸附的miRNA。因此,我们首次设计了一种基于锤头状核酶技术的,即可特异性吸附又能降解miRNA的基因沉默策略。锤头状核酶是具有催化功能的RNA小分子,可降解剪切含有GUC位点RNA序列。基于这种特点,我们找到了miR-221(第10-12位点为GUC),并构建了基于锤头状核酶结构的miRNA-221海绵表达载体(Fig.1A),可在体内表达出含有4个miRNA结合位点的mRNA,希望它可以增强miRNA海绵的特异性,并降解吸附的miRNA。实验结果表明,与突变载体(核酶区域无活性)相比,我们的方法成功将肝癌细胞中miRNA-221的量抑制了10%。(本文来源于《中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十八分会：化学生物学》期刊2016-07-01）
刘畅[2]（2013）在《阴道毛滴虫病毒载体介导的锤头状核酶对Rab11C基因表达的影响》一文中研究指出阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis, Donne1837）是寄生在人体阴道和泌尿道的鞭毛虫，主要引起滴虫性阴道炎和尿道炎。阴道毛滴虫病是全球性最广泛流行的非病毒性性转播疾病之一，每年大约有1.7亿人感染此病。尽管阴道毛滴虫感染率较高，但是关于阴道毛滴虫的致病机制、免疫原性、毒理等方面的报道较少。阴道毛滴虫病毒（Trichomonas vaginalis virus，TVV）属原虫病毒，专性寄生于阴道毛滴虫体内。阴道毛滴虫病毒与阴道毛滴虫的致病性、毒力、抗药性等有一定关系。阴道毛滴虫病毒载体的成功构建使外源基因的导入得以实现，为蛋白质功能研究提供了新方法。本课题组已利用iTRAQ技术，比较分析阴道毛滴虫携病毒株滋养体与无病毒株滋养体的差异蛋白，找到了差异蛋白Rab11C蛋白。Rab11是Ras小分子GTP酶超家族的成员，目前研究证实Ras GTP酶作为重要调节因子，调节对阴道毛滴虫的致病过程中的形态变化起着至关重要的作用的G蛋白。嵌合型锤头状核酶的构建及其对Rab11C基因体外转录体切割本试验用肝浸汤培养基对阴道毛滴虫携病毒及无病毒株进行体外纯培养。将包含Rab11C的锤头状核酶插入到阴道毛滴虫病毒载体中，构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS。体外试验表明pNME/RL和pNME/RS体外转录体对Rab11C体外转录体起到有效切割，切割效率分别为82.12%和80.20%，而作为对照的pNME/RA对Rab11C基因体外转录体的切割效率仅为32.69%，为进行体内试验提供了理论基础。核酶对Rab11C基因表达抑制及对阴道毛滴虫病毒和虫体本身的影响将锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS经电穿孔的方法转染到阴道毛滴虫体内，荧光定量PCR检测在体内pNME/RL和pNME/RS对Rab11C基因切割效率分别可达到82%和73%。通过显微镜观察及虫体计数的方法检测其对虫体的影响，对虫体计数显示，阴道毛滴虫滋养体在转染后，转染虫体的数量少于对照组虫体数，显微镜观察显示转染后虫体变形，活力减退，表明Rab11C基因对虫体的生长、形态有一定影响。通过荧光定量PCR检测其对阴道毛滴虫病毒基因表达的影响，在转染后21d内，阴道毛滴虫病毒表达量有所下调。本试验成功构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS，探讨Rab11C基因对阴道毛滴虫病毒以及虫体本身的影响，为阴道毛滴虫病毒载体在阴道毛滴虫分子生物学等领域的研究奠定了基础，为诊断及防治阴道毛滴虫病提供了新的方向。(本文来源于《吉林大学》期刊2013-06-01）
魏超君,卢思奇,曹利静,田喜凤[3]（2011）在《蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建》一文中研究指出目的构建蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素(α-8 giardin)特异性锤头状核酶-GCV重组载体。方法采用RNA draw软件对蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素基因序列(GenBank登录号为AY781323)的二级结构进行模拟分析,按照G∶C比例和锤头状核酶设计原则,选取合适的核酶切割靶点,设计特异性锤头状核酶(H8)序列,并将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,获得α-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体(pGCV634/H8/1423)。将载体线性化体外转录产物电击转染至贾第虫滋养体细胞内。提取转染后24 h的各组虫体总RNA,并以其为模板采用RT-PCR验证转染效果及对靶mRNA的切割效果。结果成功设计、合成了蓝氏贾第鞭毛虫α-8贾第素mRNA锤头状核酶序列(H8),将其与犬贾第虫病毒载体(GCV)连接,成功构建了pGCV634/H8/1423;RT-PCR实验结果表明,重组载体pGCV634/H8/1423转染贾第虫细胞后24 h可检测到核酶RNA的存在,并实现了对α-8贾第素mRNA高效、特异的切割作用。结论构建的pGCV634/H8/1423能有效转染至贾第虫细胞内,并在其细胞内对α-8贾第素基因的mRNA具有高效、特异的切割作用。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2011年05期）
冯宪敏,曹利静,王凤云,张西臣,卢思奇[4]（2010）在《特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制》一文中研究指出目的应用特异性锤头状核酶技术研究蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase)mRNA的表达抑制。方法用电击转染的方法将含有针对贾第虫丙酮酸激酶mRNA的核酶pGCV-PKH载体导入蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞内(A组),同时设单纯电击转染滋养体(B组)和正常培养滋养体(C组)为对照。转染后24、48、72和96h收集各组虫体,计算滋养体浓度,绘制虫体生长曲线。提取虫体总RNA,分别采用RT-PCR和实时PCR方法检测转染后各组各时间段(24、48、72和96h)核酶mRNA和丙酮酸激酶mRNA相对含量的变化,用紫外分光光度法检测丙酮酸激酶活性。结果虫体生长曲线显示,转染96h,A组虫体的生长受到明显抑制。RT-PCR检测结果表明,A组在转染后24h即可在贾第虫滋养体细胞内检测到核酶RNA,其水平可持续至转染后96h。A组在电击转染后24和48h,丙酮酸激酶mRNA的表达量分别下降至C组的5%(5.00±0.17)和8%(8.00±0.19),相应的酶活性下降至C组的32%(32.00±0.64)和38%(38.00±0.65)。结论特异性锤头状核酶显着抑制了蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2010年04期）
曹利静,冯宪敏,魏超君,王凤云,张西臣[5]（2010）在《蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建》一文中研究指出目的构建蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)特异性锤头状核酶-犬贾第虫病毒(Giardia canis virus,GCV)重组载体。方法采用RNAdraw软件分析贾第虫编码丙酮酸激酶的基因序列,并设计特异性反义锤头状核酶(PKH)序列,将其与犬贾第虫病毒(GCV)连接,构建重组载体pGCV-PKH。将重组载体线性化体外转录产物,分别进行贾第虫细胞外、细胞内目的mRNA切割实验,采用荧光显微镜观察转染后24h的各组虫体。采用实时PCR对切割产物进行相对定量分析。结果构建了载有蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶的犬贾第虫病毒重组载体pGCV-PKH。细胞内切割实验结果表明,荧光显微镜下只有pGCV-GFP转染组虫体显示绿色荧光,pGCV-PKH转染组丙酮酸激酶mRNA的相对含量约为正常对照组的33.14%。细胞外切割实验结果表明,该组载体能在细胞外有效切割丙酮酸激酶mRNA,在设定条件下,其切割效率为58.5%。结论重组载体pGCV-PKH能有效转染蓝氏贾第鞭毛虫细胞,并能在其细胞内外对丙酮酸激酶mRNA进行有效切割。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2010年02期）
彭慧霞,尉春艳,陈和琼,吴静[6]（2010）在《MMP9特异性锤头状真核表达载体的构建及其对子宫内膜异位症细胞侵袭力的抑制作用》一文中研究指出目的:构建针对MMP9基因的特异性锤头状核酶真核表达载体,探讨其对子宫内膜异位细胞侵袭力的抑制作用。方法:运用计算机软件人工设计并合成核酶基因,将核酶基因克隆到真核表达载体peDNA3.1中,阳性重组子由BamHI和EcoR I酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定证实。将重组质粒转染入子宫内膜异位细胞中,transwell小室法检测重组质粒对子宫内膜异位细胞侵袭力的抑制作用。结果:经酶切电泳证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3.1的BamHI和EcoR I酶切位点之间,命名为pcDNA3.1-RZ。Western blot显示转染核酶的靶细胞中MMP9蛋白的表达显着下降;transwell小室法显示pcDNA3.1-RZ可明显抑制子宫内膜异位细胞的侵袭力。结论:pcDNA3.1-RZ能明显抑制子宫内膜异位细胞的侵袭性生长,这种作用可能与MMP9蛋白的表达下调有关。(本文来源于《陕西医学杂志》期刊2010年02期）
张韦华,谢青,姜山,俞红,臧国庆[7]（2009）在《抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内的切割活性研究》一文中研究指出目的研究抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内对靶基因的切割活性。方法构建含抗Cas-pase-7锤头状核酶的真核表达质粒pRz333。将其转染原代肝细胞后,用TNF-α和放线菌素D上调细胞内Caspase-7 mRNA的表达。RT-PCR和免疫印迹法检测Caspase-7mRNA和蛋白酶原的表达。用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果与诱导组相比,核酶组肝细胞内Caspase-7 mRNA的表达降低了29.34%;Caspase-7蛋白酶原含量下降了32.12%;细胞凋亡率减低了11.75%。结论抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内能够特异性切割靶基因,使目的基因的mRNA和蛋白质表达下调,并能够减少肝细胞凋亡。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2009年20期）
魏超君,田喜凤,王凤云,张西臣,卢思奇[8]（2009）在《蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定》一文中研究指出蓝氏贾第鞭毛虫的细胞骨架与虫体运动、增殖和致病力密切相关。贾第素(giardin)是该虫特有的细胞骨架蛋白,种类繁多,功能复杂。其中alpha(α)贾第素家族中的重要成员α-8giardin的细胞定位和功能尚不清楚。本文拟采用核酶技术干扰其基因表达,观测干扰前后该贾第素在细胞内分布情况并推测其功能。依据登录于Gen Bank的贾(本文来源于《中国动物学会寄生虫学专业委员会第十二次全国学术会议暨第叁次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集》期刊2009-10-23）
吴开杰,贺大林[9]（2009）在《锤头状核酶靶向抑制HGF/SF的受体c-Met表达可降低前列腺癌细胞的体外侵袭和转移》一文中研究指出背景肝细胞生长因子/扩散因子(HGF/SF)通过激活其酪氨酸激酶受体c-Met,可引发如侵袭和转移等一系列生物学活性。研究已发现,在前列腺癌的发生和进展过程中c-Met过表达。本研究旨在通过转染锤头状核酶抑制人c-Met的表达,来观察其对前列腺癌细胞体外(本文来源于《现代泌尿外科杂志》期刊2009年01期）
樊丽,许景伟,邹宇[10]（2008）在《人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定》一文中研究指出目的设计并合成人TERT特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。含有核酶靶基因hTERTcDNA保守序列的T载体pMD18-T-hTERT的构建。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(+)中,重组子由BamH I和EcoR I酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序。RT-PCR法扩增目的基因cDNA保守序列,与pMD-18进行T-A连接,重组子经菌液PCR及测序鉴定。结果RZ人工合成后与pcDNA 3.1(+)连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3.1(+)的BamH I和EcoR I位点之间,命名为pcDNA 3.1-RZ。220bp的hTERT基因cDNA保守序列准确克隆于pMD18-T,命名为pMD18-T-hTERT。结论成功合成hTERT特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的pMD18-T-hTERT载体。(本文来源于《齐齐哈尔医学院学报》期刊2008年21期）
锤头状论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis, Donne1837）是寄生在人体阴道和泌尿道的鞭毛虫，主要引起滴虫性阴道炎和尿道炎。阴道毛滴虫病是全球性最广泛流行的非病毒性性转播疾病之一，每年大约有1.7亿人感染此病。尽管阴道毛滴虫感染率较高，但是关于阴道毛滴虫的致病机制、免疫原性、毒理等方面的报道较少。阴道毛滴虫病毒（Trichomonas vaginalis virus，TVV）属原虫病毒，专性寄生于阴道毛滴虫体内。阴道毛滴虫病毒与阴道毛滴虫的致病性、毒力、抗药性等有一定关系。阴道毛滴虫病毒载体的成功构建使外源基因的导入得以实现，为蛋白质功能研究提供了新方法。本课题组已利用iTRAQ技术，比较分析阴道毛滴虫携病毒株滋养体与无病毒株滋养体的差异蛋白，找到了差异蛋白Rab11C蛋白。Rab11是Ras小分子GTP酶超家族的成员，目前研究证实Ras GTP酶作为重要调节因子，调节对阴道毛滴虫的致病过程中的形态变化起着至关重要的作用的G蛋白。嵌合型锤头状核酶的构建及其对Rab11C基因体外转录体切割本试验用肝浸汤培养基对阴道毛滴虫携病毒及无病毒株进行体外纯培养。将包含Rab11C的锤头状核酶插入到阴道毛滴虫病毒载体中，构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS。体外试验表明pNME/RL和pNME/RS体外转录体对Rab11C体外转录体起到有效切割，切割效率分别为82.12%和80.20%，而作为对照的pNME/RA对Rab11C基因体外转录体的切割效率仅为32.69%，为进行体内试验提供了理论基础。核酶对Rab11C基因表达抑制及对阴道毛滴虫病毒和虫体本身的影响将锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS经电穿孔的方法转染到阴道毛滴虫体内，荧光定量PCR检测在体内pNME/RL和pNME/RS对Rab11C基因切割效率分别可达到82%和73%。通过显微镜观察及虫体计数的方法检测其对虫体的影响，对虫体计数显示，阴道毛滴虫滋养体在转染后，转染虫体的数量少于对照组虫体数，显微镜观察显示转染后虫体变形，活力减退，表明Rab11C基因对虫体的生长、形态有一定影响。通过荧光定量PCR检测其对阴道毛滴虫病毒基因表达的影响，在转染后21d内，阴道毛滴虫病毒表达量有所下调。本试验成功构建了阴道毛滴虫病毒载体介导的嵌合型锤头状核酶pNME/RL和pNME/RS，探讨Rab11C基因对阴道毛滴虫病毒以及虫体本身的影响，为阴道毛滴虫病毒载体在阴道毛滴虫分子生物学等领域的研究奠定了基础，为诊断及防治阴道毛滴虫病提供了新的方向。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
锤头状论文参考文献
[1].陈玉琪,周翔.基于锤头状核酶结构的miRNA-221海绵表达载体的构建及其性能研究[C].中国化学会第30届学术年会摘要集-第二十八分会：化学生物学.2016
[2].刘畅.阴道毛滴虫病毒载体介导的锤头状核酶对Rab11C基因表达的影响[D].吉林大学.2013
[3].魏超君,卢思奇,曹利静,田喜凤.蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2011
[4].冯宪敏,曹利静,王凤云,张西臣,卢思奇.特异性锤头状核酶对蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶mRNA的表达抑制[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2010
[5].曹利静,冯宪敏,魏超君,王凤云,张西臣.蓝氏贾第鞭毛虫丙酮酸激酶特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2010
[6].彭慧霞,尉春艳,陈和琼,吴静.MMP9特异性锤头状真核表达载体的构建及其对子宫内膜异位症细胞侵袭力的抑制作用[J].陕西医学杂志.2010
[7].张韦华,谢青,姜山,俞红,臧国庆.抗Caspase-7锤头状核酶在原代肝细胞内的切割活性研究[J].中国现代医学杂志.2009
[8].魏超君,田喜凤,王凤云,张西臣,卢思奇.蓝氏贾第鞭毛虫alpha-8贾第素特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定[C].中国动物学会寄生虫学专业委员会第十二次全国学术会议暨第叁次国际寄生虫学学术研讨会论文摘要集.2009
[9].吴开杰,贺大林.锤头状核酶靶向抑制HGF/SF的受体c-Met表达可降低前列腺癌细胞的体外侵袭和转移[J].现代泌尿外科杂志.2009
[10].樊丽,许景伟,邹宇.人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定[J].齐齐哈尔医学院学报.2008
论文知识图
