石长青[1]2003年在《繁殖季节母马垂体促性腺细胞特性及血液FSH和LH浓度变化的研究》文中进行了进一步梳理【前言】脑垂体(Hypophysis)是动物体内重要的内分泌腺体，能够产生和分泌多种激素，直接或间接地调节机体的各种生理活动。近几十年来，国内外学者对有关哺乳动物垂体及其对繁殖活动的影响进行了广泛地研究，获得大量的研究成果。研究表明，许多季节性繁殖动物垂体促性腺细胞及其分泌的促性腺激素根据繁殖周期的变化而变化。而迄今为止，尚未见到有关母马垂体促性腺细胞及其血液中垂体促性腺激素依繁殖季节而发生变化的研究报道。为了探明繁殖季节的马属动物垂体促性腺细胞及垂体促性腺激素的变化规律，本研究利用处于繁殖季节的蒙古利亚矮马垂体，探讨了不同年龄、怀孕状态对于母马垂体促性腺细胞的形态、数量和血清LH、FSH含量的影响。【材料与方法】1．繁殖季节蒙古利亚矮种母马垂体促性腺激素细胞形态和数量：根据年龄及妊娠状态的不同对母马进行分组，测量垂体重量和体积，然后进行常规石蜡切片，分别对各组垂体进行H.E染色、免疫组织化学染色。用H.E染色标本观察垂体的组织学形态；用免疫组织化学染色切片测定(形态计测学法)FSH和LH细胞数量和大小。2．繁殖季节蒙古利亚矮种母马血清中垂体促性腺激素浓度和促性腺激素细胞的超微结构：提取不同年龄和生理状态的蒙古利亚矮种母马垂体和血清，分别进行免疫电镜处理及FSH、LH的RIA测定。【结果与小结】1．垂体形状：幼年母马脑垂体的外形呈豆状或卵圆形，而青年、中年和老龄母马的脑垂体呈上下压扁的蚕豆状，表明马属动物的脑垂体的形状具有随年龄变化而发生变化。2．垂体重量和体积：非妊娠母马垂体的重量和体积随着年龄的增长而逐渐增大，而且老龄马的垂体重量和体积显着高于幼年马(P＜0.05)。此外，妊娠母马垂体的重量和体积均显着大于非妊娠母马(P＜0.05)，说明年龄和妊娠状态对于母马垂体重量和体积的变化有着重要影响，二者之间存在相关性。3．垂体促性腺细胞的大小：妊娠母马的FSH细胞和LH细胞的直径与非妊娠母马差异不显着；不同年龄的非妊娠母马FSH和LH细胞直径的变化不完全相同：除了老年母马外，其它母马的FSH细胞和LH细胞的直径随年龄的增长而增长，中年母马的FSH细胞直径显着大于其它母马，而青年和中年母马的LH细胞直径显着大于幼年和老年母马。结果表明 FSH和 LH细胞的大小与年龄有关，而妊娠与否对其影响不显着。4．垂体促性腺激素细胞的数量：非妊娠老年母马的FSH细胞数目显着地高于幼年、青年和中年母马fP。00Jj，但是其 LH细胞数目显着地低于 fP＜0．OJ J其它各年龄段的母马。此外，妊娠母马和非妊娠母马的FSH细胞和LH细胞数目存在显着差异，非妊娠母马显着地大于fP。00jj妊娠母马。表明年龄和妊娠状态是影响FSH和LH细胞数目的重要因素。5．母马垂体促性腺激素含量及垂体促性腺激素细胞中的分泌颗粒：妊娠母马的血清FSH和LH含量显着地低于非妊娠母马，但是二者之间的FSH细胞和LH细胞分泌颗粒的大小和数量却无明显差别；此外，虽然不同年龄非妊娠母马的LH细胞分泌颗粒大小和数量差异不明显，但是非妊娠母马血清LH含量表现出随着年龄增加而增高的趋势。以上结果表明，处于繁殖季节的母马垂体促性腺激素细胞的形态和数量依据年龄、妊娠状态的不同而发生变化，这种变化与血清中垂体促性腺激素变化之间的相关性极低。另外，幼年至成年母马不论是否妊娠，其垂体FSH细胞和 LH细胞胞质内的分泌颗粒无明显差别。
石长青, 安铁洙, 邹啸环[2]2006年在《繁殖季节蒙古母马垂体促性腺激素细胞分泌颗粒与血清FSH、LH浓度的相关性》文中研究表明研究证实[2,3],动物垂体FSH和LH呈脉冲式分泌,在接受适当刺激后开始释放,又能在接受另一些信息后调整分泌量或停止分泌,并且其血清FSH和LH含量随着年龄和生理状态的变化而变化[1],而与垂体促性腺激素细胞数量的相关性极低;但是,在繁殖季节蒙古利亚矮
史军红[3]2016年在《高原甘加型藏羊发情周期垂体FSH和LH细胞的表达及其激素分泌的动态变化研究》文中研究表明研究表明动物的生殖活动主要受下丘脑-垂体-性腺轴(Hypothalamic-pituitar y-gonadal axis,HPGA)的调控,而垂体作为动物繁殖重要的内分泌腺,其垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的促性腺激素对哺乳动物的性发育、性成熟、性周期等生理特点起着重要的主导因素。其中卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)和促黄体激素(Luteinizing hormone,LH)直接参与调控母畜的发情、排卵等生殖过程。因此,研究藏羊垂体组织FSH和LH细胞的形态与表达,对藏羊生殖活动具有重要意义和应用价值。为了阐明高原甘加型藏羊发情周期腺垂体FSH和LH细胞的表达及其激素分泌的动态变化在生殖活动中的作用。本研究(1)对甘加臧羊发情周期不同阶段的垂体组织促卵泡素和促黄体素细胞的分布及其基因mRNA表达和变化规律进行了研究;(2)对发情周期不同阶段垂体中促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)分泌的动态变化规律进行了研究,并观察了乏情期垂体FSH和LH变化。在繁殖季节选取年龄2.5~3.5岁,发育正常的健康未孕雌性高原甘加型藏羊32只,作为发情周期组,并按发情周期的不同阶段分为4组:发情前期、发情期、发情后期、间情期。在非繁殖季节选取8只年龄2.5-3.5岁,健康未孕的雌性甘加羊作为乏情期组。采集甘加藏羊发情周期不同阶段和乏情期的垂体组织,应用(1)HE染色观察各组甘加藏羊垂体细胞形态分布特征;(2)应用免疫组织化学SP法分别对各组藏羊垂体组织中FSH和LH细胞的分布表达变化进行研究,并应用Image pro-plus图像分析垂体组织中FSH和LH免疫反应阳性产物的光密度表达量;(3)应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术,对各组藏羊垂体组织中FSHβ和LHβ基因在mRNA水平的动态表达差异进行研究(4)应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组藏羊腺垂体中FSH和LH的含量,分析其在发情周期的动态变化规律。研究结果如下:1.HE染色结果显示:高原甘加型藏羊发情周期内腺垂体嗜酸性细胞体积较大,圆形或椭圆形,胞质嗜酸性着色,核圆形,着色较深;嗜碱性细胞体积最大,圆形或多边形,胞质嗜碱性着色,核圆形,着色较浅;嫌色细胞体积最小,胞质着色很浅,细胞界限不清,核圆形或不规则形,着色较浅的。并且在发情周期内叁种细胞的生理活动都有所变化。嗜酸性细胞在发情周期和乏情期分泌颗粒和胞质着色较稳定;嗜碱性细胞在发情前期、发情期、发情后期分泌颗粒和胞质着色数量逐渐增多,在间情期和乏情期降低:淡染的嫌色细胞几乎没有胞质颗粒,但在发情周期内数量变化明显,并在间情期和乏情期数量较多。2.免疫组织化学结果显示:甘加型藏羊发情周期FSH和LH免疫反应阳性细胞主要分布在垂体的远侧部,中间部很少;发情期FSH和LH阳性细胞较少,细胞形态不规则,胞浆淡染;发情后期和间情期数量增多,细胞为大中型,形态多角型或卵圆形,胞浆浓染,且间情期LH阳性细胞数达到最大;发情前期FSH数量增加达到最大,细胞大,圆形或卵圆形,胞浆浓染;FSH阳性细胞胞浆比LH细胞浓染。FSH和LH阳性反应细胞占垂体中数量的百分比(发情期、发情后期、间情期、发清前期):FSH为9.78%,11.37%,12.81%,13.05%;LH为8.72%,12.73%,14.25%,13.72%,且各时期二者均差异不显着(p>0.05)。3.IPP图像测算平均光密度显示:FSH表达量在发情期较低,发情后期有所增加,间情期和发情前期达到最大而与其他时期差异显着(P<0.05);LH表达量在发情期较低,发情后期、间情期和发情前期均增加且差异不显着(p>0.05)。LH表达量除在发情期低于FSH外,其他时期均高于FSH。4.实时荧光定量PCR显示:FSHβ和LHβmRNA在发情周期不同阶段甘加型藏羊垂体中均有表达。FSHβmRNA相对表达量(发清前期、发情期、发情后期、间情期)为0.2359±0.017、1±0.2805、3.5475±0.8017、3.6667±1.4492,发清前期与发情期、发情后期和间情期差异极显着(p<0.01),发情期与发情后期和间情期差异显着(p<0.05),发情后期与间情期差异不显着(p>0.05);LHβmRNA相对表达量为0.0259±0.0038、1±0.6318、16.1091±3.2674、0.5638±0.1962,发情前期与发情期、发情后期和间情期差异极显着(p<0.01),发情期与发情后期差异极显着(p<0.01),与间情期差异不显着(p>0.05),发情后期与间情期差异极显着(p<0.01)。5.酶联免疫吸附试验显示:甘加藏羊发情周期内腺垂体FSH浓度在间情期最大(8.228mIU/ml),与其他时期差异显着(P<0.05);腺垂体LH浓度在间情期最大(10.629mIU/ml),各时期差异不显着(P>0.05);
吴馨培[4]2006年在《莱芜黑山羊垂体—卵巢繁殖季节与非繁殖季节繁殖调控机理的研究》文中研究表明哺乳动物生殖活动的调节主要发生在下丘脑-垂体-性腺轴上,垂体远侧部促性腺激素细胞接受下丘脑促性腺激素释放激素信号(GnRH)后分泌生殖调节关键激素FSH和LH,主要作用于卵巢中相应靶细胞膜上FSHR和LHR这两种G蛋白偶联受体,介导激活胞内CAMP系统,使GTH信号由胞外转移至胞内,卵巢分泌雌激素反馈调节垂体FSH、LH的分泌释放。季节性明显的地区由于光周期长短的影响使得生殖轴系中垂体-卵巢功能出现交替性变化,FSH和LH的分泌和性腺调节作用由此也会受到影响。莱芜黑山羊是山东省地方优良山羊品种,属肉、绒、毛、皮兼用型,非常适宜山区放牧饲养。雌性莱芜黑山羊性成熟一般在4～5月龄。初配年龄一般在10月龄,是典型季节性发情哺乳动物,其生长繁殖地光照季节性变迁分明,以其垂体-卵巢轴中FSH和LH的分泌和调节的季节性活动为模型,通过比较其繁殖季节与非繁殖季节垂体组织内GTH细胞的FSH、LH分泌、水平变化和超微结构特点、卵巢内相应受体调节机制,揭示具有休繁特性一类哺乳动物的生殖内分泌季节性调节机制。实验一莱芜黑山羊繁殖与非繁殖季节垂体组织与外周血中FSH、LH浓度的放射免疫分析测定繁殖季节垂体组织液FSH浓度为10.120±0.408 mIU/ml,高于非繁殖季节的8.251±1.763mIU/ml,季节之间差异不显着(P>0.05)。垂体组织液繁殖季节LH水平(18.921±1.393 mIU/ml)较非繁殖季节LH水平(19.514±0.749 mIU/ml)略低并且季节间差异不显着(P>0.05)。血浆FSH水平繁殖季节(1.242±0.403 mIU/ml)高于非繁殖季节(0.778±0.083 mIU/ml),季节间差异不显着(P>0.05)。血浆LH水平繁殖季节水平(1.168±0.269 mIU/ml)高于非繁殖季节(0.832±0.189 mIU/ml)且季节间差异不显着(P>0.05)。
朱雪雁[5]2017年在《甘加藏羊发情周期血浆生殖激素分泌的动态变化规律研究》文中研究表明研究表明哺乳动物下丘脑-垂体-性腺轴(Hypothalamic-pituitary-gonadal axis,HPGA)是调控动物生殖活动的重要内分泌腺,由下丘脑、垂体和性腺分泌的生殖激素对哺乳动物的性发育、性成熟、性周期等生殖生理活动起着重要的调节作用。下丘脑分泌的促性腺激素释放激素(GnRH)作用于腺垂体分泌促性腺激素:卵泡刺激素(Follicle stimulating hormone,FSH)和促黄体激素(Luteinizing hormone,LH),促性腺激素作用于卵巢直接参与调控母畜的发情、排卵等生殖过程。卵巢分泌雌激素和孕酮,雌激素促使雌性动物生殖器官、子宫发育和内膜增生,刺激卵泡发育,并通过反馈调节控制下丘脑和垂体的激素分泌;孕酮可促进生殖道发育,维持家畜妊娠、保胎等生理作用。动物发情周期的不同阶段中,血浆中生殖激素的浓度存在着显着的动态变化规律。迄今为止,有关甘加藏羊发情周期生殖激素分泌的动态研究未见报道。因此,研究藏羊生殖激素分泌的动态变化规律,对揭示藏羊生殖调控机理,提高动物繁殖和生产性能具有重要科学意义和应用价值。为了阐明高原甘加藏羊发情周期生殖激素分泌的动态变化在生殖活动中的作用及其与藏羊生殖调控之间的关系,本研究对甘加藏羊发情周期不同阶段血浆中促卵泡素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌激素(E)和孕酮(P)分泌的动态变化规律进行了研究。在藏羊的繁殖季节选取年龄2.5~3.5岁,发育正常的健康雌性未孕高原甘加藏羊48只,按发情周期的不同阶段分为4组:发情前期、发情期、发情后期、间情期。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定每组藏羊发情周期各阶段血浆中FSH、LH、E和P的含量,分析其在发情周期的动态变化规律。研究结果如下:1.发情周期血浆中FSH分泌特点是:在发情期分泌量最高(3.406±0.294mIU/mL),发情后期降低至(2.492±0.641 mIU/mL),间情期又开始升高,至发情前期达(2.727±0.603 mIU/mL),发情期分泌量极显着高于发情后期、间情期和发情前期的分泌量(P<0.01)。2.发情周期血浆中LH分泌特点是:在发情期、发情后期、间情期、发情前期的分泌量分别为(4.145±0.260 mIU/mL)、(3.923±0.432 m IU/mL)、(4.377±0.250 mIU/mL)、(4.375±0.466 mIU/mL),发情后期显着低于发情期、间情期和发情前期(P<0.05)。3.发情周期血浆中孕酮分泌特点是:在发情前期最高(18.039±1.596ng/mL),发情期下降为(16.196±4.183 ng/mL),发情后期分泌量缓慢升高,到间情期时分泌量达(17.127±2.857 ng/mL),发情前期显着高于发情期与发情后期(P<0.05)。4.发情周期血浆中雌激素分泌特点是:在发情前期分泌量最低(29.625±3.166 pg/mL),发情期升高(36.035±2.784 pg/mL)、发情后期分泌量达到最高(38.573±2.557 pg/mL)、间情期又降低(35.531±6.385 pg/mL),间情期分泌量极显着高于发情前期(P<0.01),发情后期极显着高于发情期、间情期以及发情前期(P<0.01),发情前期极显着低于间情期与发情期(P<0.01)。上述研究结果,可为进一步研究高原甘加藏羊生殖激素对繁殖活动的调控、对不同发育时期卵泡的作用、繁殖性能的影响,提供试验数据。为研究哺乳动物发情、排卵等生殖内分泌调控机理、动物繁殖育种、提高动物生产性能等提供试验数据和科学理论依据。
魏锁成[6]2010年在《GnRH-A免疫对家兔生殖功能的调节作用及机理研究》文中提出目的:促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)为动物生殖过程中最重要的激素之一,GnRH的结构为9种不同氨基酸残基组成的10肽,它和脑垂体促性腺激素分泌细胞的特异性受体结合后刺激促性腺激素的产生和释放,但天然的GnRH计为量,多用其类似物(GnRH-A)替代。GnRH-A通过改变GnRH的结构使其与GnRH受体亲和力增强。然而,对GnRH-A的应用效果缺乏系统的定量研究,尤其其作用机理依然不清,看法不同。本研究的目的就在于系统深入的探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)对动物生殖免疫的调节作用和机理,通过GnRH-A对雄兔免疫去势和雌兔生殖免疫调节的系列实验研究,为动物临床和生产实际科学运用提供依据。方法:(1)以EDC.HCL为偶合剂,将GnRH-A阿拉瑞林(Alarelin)与BSA连接为复合物,再加入弗氏不完全佐剂制成抗原乳剂。(2)将16只3月龄健康日本大耳白兔雄兔随机均分为3个实验组兔(分别注射50μg/ml、100μg/ml和150μg/ml Alarelin抗原各1.0 ml)和对照组,于0、7、14、21、28、35、42 d采血分离血清,用间接ELISA法测定GnRH抗体效价。(3)30只3月龄健康日本大耳白兔雄兔,随机分为叁组, EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和对照组(CG); EG-Ⅰ与EG-Ⅱ颈背部皮下注射1.0 ml(100μg/ml)Alarelin抗原, EG-Ⅱ于20 d加强免疫一次,空白对照组不做任何处理。0、7、28、49、70、91、102 d采血5 ml分离血清,用ELISA测定血清GnRH抗体效价与睾酮含量;在第0、30、60、90和110 d分别称重,于实验第110 d摘取两侧睾丸,除去附睾及周围脂肪,用游标卡尺测量其长度并称重。以全自动血液分析仪检测15项血液细胞参数,i-STAT便携式血气分析仪分析10项血气指标。(4)用实时荧光定量PCR分析垂体中GnRHR、FSHβ和LHβmRNA的表达。( 5)应用DNAMAN、Tmpred、SignalP 3.0、TargetP 1.1、Expasy、PSORTⅡprediction等生物信息学分析软件和在线工具,对GnRHR序列和蛋白的理化特性、跨膜结构、信号肽、细胞定位、二级和叁级结构特征等进行分析和预测。(6)24只3月龄日本大耳白兔雌兔分为4组,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ颈背侧分别注射1.0mL(100μg/mL、100μg/mL和50μg/mL)GnRH-A抗原,EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于20 d加强注射一次,ELISA法测定血清GnRH抗体效价、促卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)含量。70 d采集卵巢和子宫,进行光学和电镜观察、拍照。(7)用免疫组织化学SP法及图像分析技术进行定位与分析。结果:(1)制备的GnRH-A抗原为乳白色均匀悬液,物理化学性状稳定良好,安全可靠,无任何不良反应.(2)以50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml免疫接种后,各组动物均在14 d检测到GnRH-A抗体,第4周左右达到高峰, ELISA效价分别为1:800、1:1600和1:1600,说明100μg/ml、150μg/ml剂量的抗原产生的抗体效价相同,故实践可用100μg/ml的剂量。(3)在免疫注射的30只兔中,EG-Ⅰ和EG-Ⅱ血清GnRH抗体水平在免疫注射后一直高于对照组,并分别在第28 d和49 d的达到高峰,但EG-Ⅰ抗体水平从28 d的1600急剧下降到49 d的800,抗体水平的高峰期持续时间很短,下降很快;而EG-Ⅱ抗体水平在70 d时仍与EG-Ⅰ相同,为1600,EG-Ⅱ的抗体水平也明显高于EG-Ⅰ,在免疫后28、49、70、91 d两实验组与对照组的有差异;102 d时,EG-Ⅱ血清睾酮浓度与对照组差异极显着(P<0.01);EG-Ⅰ与EG-Ⅱ在49 d血清睾酮水平差异显着(P<0.05);EG-Ⅱ睾丸平均长度与EG-Ⅰ差异极显着(P<0.01);EG-Ⅱ雄兔的体重和平均日增重均最大,而且显着高于EG-Ⅰ和对照组。(4)15项血液细胞指标到实验末与对照组正常值无显着差异(P>0.05),免疫后7～110d,实验组WBC、MCV、PLT和LYM轻度升高,其余指标正常;28d时仅TCO2HCO3-显着升高(P<0.05),10项血气指标值均在正常范围内。注射GnRH-A后,EG-Ⅱ的Cu含量无明显变化,28d时Zn含量显着低于注射前(P<0.05),;Fe含量呈轻度下降趋势,但与注射前无显着差异。(5)雄兔GnRHR的核苷酸为1179bp,同源性达96%,核苷酸中含A 338(28.7%),C 293(24.9%),G 224(19.0%),T 324(27.5%)。ssDNA分子量为362.66 kDa,dsDNA 726.78kDa。GnRHR二级结构有151(40.27%)个氨基酸组成α-螺旋,15(4.00%)个氨基酸组成β-折迭。GnRHR理论等电点(pI)5.02;不稳定指数58.08,脂肪指数28.67,疏水性平均值(GRAVY) 0.869,表明该蛋白为不稳定的疏水性蛋白,没有潜在糖基化位点。GnRHR蛋白TM螺旋长度为17～23,有34个强跨膜螺旋区,从内到外有35个螺旋,从外到内有37个螺旋,得出了GnRHR的质粒模板图。GnRHR信号肽的概率0.999,最可能的酶切部位在17和18位点。(6)雌兔注射GnRH-A后10d均出现GnRH抗体,对照组未检测到;EG-Ⅰ在第30d达到高峰, EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于40d～50d至峰值,但在实验结束时(70d)实验组均高于对照组(P<0.05),40d～70d时EG-Ⅱ显着高于EG-Ⅰ和EG-Ⅲ(P<0.01)。30d～50d时EG-Ⅱ的LH明显高于EG-Ⅰ和EG-Ⅲ及对照组。EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的FSH浓度在40d达到峰值,但EG-Ⅱ高于EG-Ⅰ、对照组(P<0.01)及EG-Ⅲ(P<0.05),EG-Ⅰ和对照组无显着差异。(7)GnRH-A能够增加卵巢初级卵泡数量,增大卵泡的纵径和横径(P<0.05),促进卵巢和卵泡发育与成熟,且与剂量相关;重复注射似乎不会加速卵巢和卵泡发育。GnRH-A能使细胞核和线粒体变大,细胞质内皮质颗粒、分泌物线和粒体嵴的数量增加,透明带和绒毛增宽增长,从而明显的加快卵母细胞的生长。(8)卵巢和子宫均有GnRHR和GnRH阳性细胞分布,阳性细胞主要见于卵母细胞、卵泡细胞、子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞,GnRHR的注射剂量不同GnRH和GnRH阳性细胞的染色强度也不同,染色强度越大,相应受体的表达水平就越高,但是两者分布和定位的数量并非完全一致,GnHR-A对在GnRHR和GnRH卵巢与子宫中的分布具有影响,EG-2的作用更为明显。结论:(1)GnRH-A(阿拉瑞林,Alarelin)抗原具有良好的免疫原性,为了延续抗体的高峰水平,有必要加强免疫。(2)GnRH-A主动免疫对家兔的睾丸发育、血清睾酮和性行为具有明显的影响,加强免疫效果更理想。用GnRH-A主动免疫时对雄兔血液细胞成分、血气指标和血清微量元素Fe、Zn和Cu均无显着影响。(3)兔体内注射GnRH-A可以明显提高GnRH抗体效价,增强LH和FSH的合成与分泌,加强注射效果更明显,且与注射剂量相关,持续时间为40d左右。GnRH-A能促进雌兔卵巢和卵泡发育与成熟,对卵巢和子宫的显微和超微结构具有明显的作用。(4)阿拉瑞林免疫可以降低垂体GnRHR、FSHβ和LHβ基因表达,GnRHR是一种含有信号肽序列的不稳定的疏水性跨膜蛋白,具有明显的生物信息学特征。(5)卵巢和子宫都有GnRHR和GnRH阳性细胞分布,GnRH-A主动免疫对在卵巢与子宫中GnRHR和GnRH的分布具有增强作用。
王丽[7]2011年在《沂蒙黑山羊性周期中GTH受体在输卵管的分布及其mRNA表达规律的研究》文中提出分布在鲁中南泰沂山区的沂蒙黑山羊是山东省优良的地方品种,该品种黑山羊以耐粗饲、抗病能力强、绒毛质量好、肉质鲜美而着称,属肉、皮、绒兼用型品种。本实验以沂蒙黑山羊为研究对象,就性周期外周血中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)的分泌变化、性周期不同阶段促性腺激素受体免疫反应阳性细胞在输卵管不同部位中的位置分布以及卵泡刺激素受体(FHSR)mRNA、黄体生成素受体(LHR)mRNA在输卵管不同部位表达量的差异进行了研究,结果如下:1.应用放射免疫测定法(RIA)对沂蒙黑山羊在性周期各阶段外周血中FSH、LH的含量进行了测定。结果表明:外周血FSH、LH含量的变化趋势相似,其基本走势为由发情前期到发情期降到最低,之后又有所升高。FSH含量在发情前期最高(1.6067±0.09955mIU/ml),与其它叁个时期之间差异显着(0.01<P<0.05),在发情期最低( 1.1±0.04726mIU/ml ) ; LH含量由发情前期到发情期降至最低( 2.01±0.18339mIU/ml ) ,之后逐渐升高,到间情期达到最高(2.143±0.09244mIU/ml),但四个时期之间差异均不显着(P>0.05)。2.运用免疫组织化学方法研究了性周期中促性腺激素受体免疫阳性细胞在输卵管的分布情况。FSHR免疫阳性细胞、LHR免疫阳性细胞在性周期不同阶段的输卵管各部位中都有存在,主要存在于输卵管的黏膜上皮细胞、固有层细胞以及血管内皮细胞中。3.利用RT-PCR技术,以GAPDH为内参基因,研究了沂蒙黑山羊性周期中FSHR mRNA、LHR mRNA在输卵管的表达差异。结果显示:性周期中FSHR mRNA、LHR mRNA在输卵管中都有表达。FSHR mRNA在漏斗部以间情期的表达量最高,发情期最低,发情期与其它叁个时期之间差异极显着(P<0.01);壶腹部在间情期的表达量最高,与其它叁个时期差异极显着(P<0.01),在发情前期表达量最低。在峡部则是发情后期表达量最高,发情前期最低,发情前期与其它叁个时期差异极显着(P<0.01)。LHR mRNA表达量与FSHR mRNA呈相反规律,漏斗部LHR mRNA表达量在间情期最低,发情期最高,且发情期与其它叁个时期之间差异极显着(P<0.01);壶腹部则是发情前期表达量最高,间情期最低,发情前期与其它叁个时期之间差异极显着(P<0.01);峡部在发情前期表达量最高,发情后期最低,发情前期与其它叁个时期之间差异均达极显着水平(P<0.01)。
魏锁成[8]2010年在《GnRH-A免疫对家兔生殖功能的调节作用及机理研究》文中指出促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)为动物生殖过程中最重要的激素之一,GnRH的结构为9种不同氨基酸残基组成的10肽,它和脑垂体促性腺激素分泌细胞的特异性受体结合后刺激促性腺激素的产生和释放,但天然的GnRH计为量,多用其类似物(GnRH-A)替代。GnRH-A通过改变GnRH的结构使其与GnRH受体亲和力增强。然而,对GnRH-A的应用效果缺乏系统的定量研究,尤其其作用机理依然不清,看法不同。本研究的目的就在于系统深入的探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRH-A)对动物生殖免疫的调节作用和机理,通过GnRH-A对雄兔免疫去势和雌兔生殖免疫调节的系列实验研究,为动物临床和生产实际科学运用提供依据。(1)以EDC.HCL为偶合剂,将GnRH-A阿拉瑞林(Alarelin)与BSA连接为复合物,再加入弗氏不完全佐剂制成抗原乳剂。(2)将16只3月龄健康日本大耳白兔雄兔随机均分为3个实验组兔(分别注射50μg/ml、100μg/ml和150μg/ml Alarelin抗原各1.0 ml)和对照组,于0、7、14、21、28、35、42 d采血分离血清,用间接ELISA法测定GnRH抗体效价。(3)30只3月龄健康日本大耳白兔雄兔,随机分为叁组, EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和对照组(CG); EG-Ⅰ与EG-Ⅱ颈背部皮下注射1.0 ml(100μg/ml)Alarelin抗原, EG-Ⅱ于20 d加强免疫一次,空白对照组不做任何处理。0、7、28、49、70、91、102 d采血5 ml分离血清,用ELISA测定血清GnRH抗体效价与睾酮含量;在第0、30、60、90和110 d分别称重,于实验第110 d摘取两侧睾丸,除去附睾及周围脂肪,用游标卡尺测量其长度并称重。以全自动血液分析仪检测15项血液细胞参数,i-STAT便携式血气分析仪分析10项血气指标。(4)用实时荧光定量PCR分析垂体中GnRHR、FSHβ和LHβmRNA的表达。( 5)应用DNAMAN、Tmpred、SignalP 3.0、TargetP 1.1、Expasy、PSORTⅡprediction等生物信息学分析软件和在线工具,对GnRHR序列和蛋白的理化特性、跨膜结构、信号肽、细胞定位、二级和叁级结构特征等进行分析和预测。(6)24只3月龄日本大耳白兔雌兔分为4组,EG-Ⅰ、EG-Ⅱ和EG-Ⅲ颈背侧分别注射1.0mL(100μg/mL、100μg/mL和50μg/mL)GnRH-A抗原,EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于20 d加强注射一次,ELISA法测定血清GnRH抗体效价、促卵泡刺激素(FSH)和促黄体生成素(LH)含量。70 d采集卵巢和子宫,进行光学和电镜观察、拍照。(7)用免疫组织化学SP法及图像分析技术进行定位与分析。(1)制备的GnRH-A抗原为乳白色均匀悬液,物理化学性状稳定良好,安全可靠,无任何不良反应.(2)以50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml免疫接种后,各组动物均在14 d检测到GnRH-A抗体,第4周左右达到高峰, ELISA效价分别为1:800、1:1600和1:1600,说明100μg/ml、150μg/ml剂量的抗原产生的抗体效价相同,故实践可用100μg/ml的剂量。(3)在免疫注射的30只兔中,EG-Ⅰ和EG-Ⅱ血清GnRH抗体水平在免疫注射后一直高于对照组,并分别在第28 d和49 d的达到高峰,但EG-Ⅰ抗体水平从28 d的1600急剧下降到49 d的800,抗体水平的高峰期持续时间很短,下降很快;而EG-Ⅱ抗体水平在70 d时仍与EG-Ⅰ相同,为1600,EG-Ⅱ的抗体水平也明显高于EG-Ⅰ,在免疫后28、49、70、91 d两实验组与对照组的有差异;102 d时,EG-Ⅱ血清睾酮浓度与对照组差异极显着(P<0.01);EG-Ⅰ与EG-Ⅱ在49 d血清睾酮水平差异显着(P<0.05);EG-Ⅱ睾丸平均长度与EG-Ⅰ差异极显着(P<0.01);EG-Ⅱ雄兔的体重和平均日增重均最大,而且显着高于EG-Ⅰ和对照组。(4)15项血液细胞指标到实验末与对照组正常值无显着差异(P>0.05),免疫后7～110d,实验组WBC、MCV、PLT和LYM轻度升高,其余指标正常;28d时仅TCO2HCO3-显着升高(P<0.05),10项血气指标值均在正常范围内。注射GnRH-A后,EG-Ⅱ的Cu含量无明显变化,28d时Zn含量显着低于注射前(P<0.05),;Fe含量呈轻度下降趋势,但与注射前无显着差异。(5)雄兔GnRHR的核苷酸为1179bp,同源性达96%,核苷酸中含A 338(28.7%),C 293(24.9%),G 224(19.0%),T 324(27.5%)。ssDNA分子量为362.66 kDa,dsDNA 726.78kDa。GnRHR二级结构有151(40.27%)个氨基酸组成α-螺旋,15(4.00%)个氨基酸组成β-折迭。GnRHR理论等电点(pI)5.02;不稳定指数58.08,脂肪指数28.67,疏水性平均值(GRAVY) 0.869,表明该蛋白为不稳定的疏水性蛋白,没有潜在糖基化位点。GnRHR蛋白TM螺旋长度为17～23,有34个强跨膜螺旋区,从内到外有35个螺旋,从外到内有37个螺旋,得出了GnRHR的质粒模板图。GnRHR信号肽的概率0.999,最可能的酶切部位在17和18位点。(6)雌兔注射GnRH-A后10d均出现GnRH抗体,对照组未检测到;EG-Ⅰ在第30d达到高峰, EG-Ⅱ和EG-Ⅲ于40d～50d至峰值,但在实验结束时(70d)实验组均高于对照组(P<0.05),40d～70d时EG-Ⅱ显着高于EG-Ⅰ和EG-Ⅲ(P<0.01)。30d～50d时EG-Ⅱ的LH明显高于EG-Ⅰ和EG-Ⅲ及对照组。EG-Ⅱ和EG-Ⅲ的FSH浓度在40d达到峰值,但EG-Ⅱ高于EG-Ⅰ、对照组(P<0.01)及EG-Ⅲ(P<0.05),EG-Ⅰ和对照组无显着差异。(7)GnRH-A能够增加卵巢初级卵泡数量,增大卵泡的纵径和横径(P<0.05),促进卵巢和卵泡发育与成熟,且与剂量相关;重复注射似乎不会加速卵巢和卵泡发育。GnRH-A能使细胞核和线粒体变大,细胞质内皮质颗粒、分泌物线和粒体嵴的数量增加,透明带和绒毛增宽增长,从而明显的加快卵母细胞的生长。(8)卵巢和子宫均有GnRHR和GnRH阳性细胞分布,阳性细胞主要见于卵母细胞、卵泡细胞、子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞,GnRHR的注射剂量不同GnRH和GnRH阳性细胞的染色强度也不同,染色强度越大,相应受体的表达水平就越高,但是两者分布和定位的数量并非完全一致,GnHR-A对在GnRHR和GnRH卵巢与子宫中的分布具有影响,EG-2的作用更为明显。(1)GnRH-A(阿拉瑞林,Alarelin)抗原具有良好的免疫原性,为了延续抗体的高峰水平,有必要加强免疫。(2)GnRH-A主动免疫对家兔的睾丸发育、血清睾酮和性行为具有明显的影响,加强免疫效果更理想。用GnRH-A主动免疫时对雄兔血液细胞成分、血气指标和血清微量元素Fe、Zn和Cu均无显着影响。(3)兔体内注射GnRH-A可以明显提高GnRH抗体效价,增强LH和FSH的合成与分泌,加强注射效果更明显,且与注射剂量相关,持续时间为40d左右。GnRH-A能促进雌兔卵巢和卵泡发育与成熟,对卵巢和子宫的显微和超微结构具有明显的作用。(4)阿拉瑞林免疫可以降低垂体GnRHR、FSHβ和LHβ基因表达,GnRHR是一种含有信号肽序列的不稳定的疏水性跨膜蛋白,具有明显的生物信息学特征。(5)卵巢和子宫都有GnRHR和GnRH阳性细胞分布,GnRH-A主动免疫对在卵巢与子宫中GnRHR和GnRH的分布具有增强作用。
张勇[9]2000年在《双峰驼和牦牛繁殖季节褪黑素与促性腺激素之间的关系》文中研究说明松果体褪黑素（MEL）对动物繁殖活动的季节性具有重要的调节作用，但是有关 繁殖季节双峰驼和牦牛MEL分泌范型、MEL与促性腺激素关系的资料未见报道。为 此，本研究测定了双峰驼和牦牛繁殖季节MEL分泌范型，探讨了MEL与促性脉激素 之间的关系以及静脉注射MEL后MEL在双峰驼和牦牛体内的药代动力学特征。 首先，本研究建立了血浆MEL的放射免疫分析测定法。根据甲醛缩合反应的基 本原理，成功地制备出MEL和牛血清白蛋白连接复合物，用此复合物免疫家兔获得 了两批高亲和力和高特异性的MEL抗血清。运用lodogen法制得了125l-MEL标记品， 并用硅胶薄层层析（TLC）纯化了标记品。本试验测得125IMEL标记率为73．4％，放 射性比活度为540．2KBq／mg，放化纯率为92％。双峰驼和牦牛血浆中的MEL用氯仿 进行提取。 双峰驼和牦牛血浆中的促性腺激素PRL、LH和FSH的含量也同样用放射免疫分 析法测定。 研究结果表明，间隔10min连续24h采样，双峰驼血浆MEL含量波动于96．39± 39．73至948．46±495．21pg/ml之间;间隔2h连续96h采样，MEL含量波动于101．56 ±9 ．61至 482．54±40．10pg／ml之间，昼夜差异均极显着（p＜0．01）。血浆 PRL、LH 和FSH昼夜含量差异不显着（p＞0．05）。24h节律组，双峰驼血浆MELL和PRL含量 具有极为明显的正相关性（P＜0．01）：MEL和FSH含量也呈明显相关（p＜0．05）。96h 采样，LH含量与FSH含量呈极明显的正相关（P＜0．01）。双峰驼静注MEL（10μg／kg BW）后,运用MCPKP程序分析了MEL血时数据，发现其变化属于二室开放模型， 主要药代动力学参数如下：t_(1/2α)，2．45±0．016min；t_(1/2β)，59．67±7．4min,Vb，0．0025 ±0．0002L／kg；CIB，0 0003±0．00001L／kg·min。 间隔30min连续24h采样，牦牛血浆MEL含量波动于64．56±7．42至268．56± 37．66pg／ml；间隔Zh连续72h采样，MEL含量波动于53．13±26．44至141．24± 2．80pg/ml之间，昼夜差异显着（0．05）；血浆PRL、LH和FSH昼夜含量差异不显 着（p＞0．05）。24h节律组，牦牛血浆 PRL和 FSH含量之间呈正相关中（p＜0．05）； 96h采样，LH和 FSH含量具有极为明显的正相关性（p＜0．01）。牦牛静注 MEL（10 μg／kg BW）后，MEL血时数据属于叁室开放模型，主要药代动力学参数如下：t_(1/2π)， 1．25±0．22min; t_(1/2α),18．47±1．54min，t_(1/2β)，167．68±23．58min;vb,0．013± 0．0007L／kg：CIB，0．0005±0．000001L／kg·min。 本研究结果表明，同其他家畜一样，双峰驼和牦牛MEL分泌也具有明显的昼夜节 律。
石长青, 安铁洙, 谭建华[10]2003年在《哺乳动物脑垂体研究进展》文中指出脑垂体 (Hypophysis) ,又称垂体腺或垂体 ,结构复杂 ,是机体内分泌中枢的重要组成部分 ,可分泌多种激素 ,在中枢神经的控制下 ,调节其它内分泌激素的合成和分泌 ,直接或间接地影响高等哺乳动物的各种生理活动。不断探索其在不同条件下的大体解剖学
参考文献：
[1]. 繁殖季节母马垂体促性腺细胞特性及血液FSH和LH浓度变化的研究[D]. 石长青. 中国人民解放军军需大学. 2003
[2]. 繁殖季节蒙古母马垂体促性腺激素细胞分泌颗粒与血清FSH、LH浓度的相关性[J]. 石长青, 安铁洙, 邹啸环. 中国兽医杂志. 2006
[3]. 高原甘加型藏羊发情周期垂体FSH和LH细胞的表达及其激素分泌的动态变化研究[D]. 史军红. 甘肃农业大学. 2016
[4]. 莱芜黑山羊垂体—卵巢繁殖季节与非繁殖季节繁殖调控机理的研究[D]. 吴馨培. 山东农业大学. 2006
[5]. 甘加藏羊发情周期血浆生殖激素分泌的动态变化规律研究[D]. 朱雪雁. 甘肃农业大学. 2017
[6]. GnRH-A免疫对家兔生殖功能的调节作用及机理研究[D]. 魏锁成. 甘肃农业大学. 2010
[7]. 沂蒙黑山羊性周期中GTH受体在输卵管的分布及其mRNA表达规律的研究[D]. 王丽. 山东农业大学. 2011
[8]. GnRH-A免疫对家兔生殖功能的调节作用及机理研究[D]. 魏锁成. 甘肃农业大学. 2010
[9]. 双峰驼和牦牛繁殖季节褪黑素与促性腺激素之间的关系[D]. 张勇. 甘肃农业大学. 2000
[10]. 哺乳动物脑垂体研究进展[J]. 石长青, 安铁洙, 谭建华. 塔里木农垦大学学报. 2003