导读:本文包含了表达分泌载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:鸡α干扰素,真核表达,pPIC9k,分泌表达
表达分泌载体论文文献综述
曹丁,李学优,昝继清,兰玲峰,甘祥武[1]（2019）在《鸡α干扰素真核表达载体的改造及在毕赤酵母中的分泌表达》一文中研究指出旨在利用毕赤酵母密码子的偏好性和遗传简并性,将鸡α干扰素优化基因片段cIFN-α2连入毕赤酵母表达载体pPIC9k,再经重迭延伸PCR方法去除重组质粒的5′端非翻译区多余的8个核苷酸GGATCCAA,使其与毕赤酵母AOX1(醇氧化酶)的5′端非翻译区的序列完全一致,构建并筛选重组毕赤酵母,并进行摇瓶诱导表达试验。将表达产物用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测,并用微量病变抑制法检测其抗病毒效价。抗病毒活性检测结果显示,天然基因、优化基因、质粒5′端非翻译区改造后的优化基因重组质粒表达产物的抗病毒效价分别为10~5、10~6、1.5×10~6 U/mL。鸡α干扰素基因优化后的抗病毒效价提高了10倍,对质粒5′端非翻译区进行进一步改造后,表达蛋白的抗病毒活性提高了50%,从而为鸡α干扰素的工业化生产奠定了基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年19期）
邓小亮,马文康,付欣,洪玮,谭茵[2]（2019）在《新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达载体构建及在E.coli表达》一文中研究指出为了研究新西兰兔SOD1蛋白分子的结构与功能,设计了一对特异性引物,通过RT-PCR方法克隆得到了该基因编码序列。将该编码序列克隆到分泌型原核表达载体PET-25b,经菌落PCR、双酶切和测序鉴定证实成功构建了重组表达载体。将重组质粒转化大肠杆菌表达菌株E.coli BL21(de3) PlysS,建立了分泌型原核表达系统。IPTG诱导培养重组菌后收集样品检测,经SDS-PAGE、Western blot鉴定,证实在培养物上清中检测到了SOD1蛋白的表达。至此,成功建立了新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达系统,实现了蛋白的可溶表达,为进一步研究该蛋白的结构与功能打下了基础。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2019年08期）
胡增垒,刘晓文,胡娇,顾晗,石磊[3]（2018）在《表达分泌型与膜结合型HH7N9 AIV血凝素蛋白重组NDV载体疫苗的免疫原性比较》一文中研究指出研究以新城疫病毒(NDV)弱毒株LX为载体,构建了一株表达H7N9亚型禽流感病毒(H7N9 AIV)血凝素(HA)胞外区的重组病毒(LXs HA),并与一株前期构建的表达膜结合型HA的重组病毒(LXHAF)进行比较。生物学特性评价显示,两株病毒均为弱毒且在鸡胚中的繁殖性能较强。此外,LXs HA主要以分泌形式表达HA蛋白,而LXHAF则以膜结合形式表达HA。鸡的免疫试验显示,两株重组病毒在一次免疫后均能诱导针对NDV载体的血凝抑制抗体,但LXHAF能够诱导较高水平的H7N9 AIV特异性Ig Y抗体,而LXs HA不能诱导H7N9 AIV抗体应答。结果表明,表达膜结合型HA的重组病毒具有针对H7N9 AIV较好的免疫原性,而表达分泌型HA的重组病毒免疫原性较差。这为研发H7N9亚型禽流感载体疫苗提供新的信息与参考。(本文来源于《中国家禽》期刊2018年14期）
白娜[4]（2017）在《结核分枝杆菌38KD和ESAT-6蛋白真核表达载体的构建及其在HEK 293T中的分泌性表达》一文中研究指出结核分枝杆菌(M.tuberculosis),俗称结核杆菌,是结核病的病原体。据世界卫生组织统计,每年全世界新发生病例约900万例,每年死亡300万人,而这些死亡人口多集中在经济、卫生、医疗环境相对落后的发展中国家。而中国是结核病高发国,仅次于印度。目前对结核病的诊断方法主要为细菌学检查与结核菌素试验,试验周期长,因此,寻找和建立结核病快速诊断方法一直是人们所研究的重点。而结核分枝杆菌38KD蛋白因其在多种结核相关抗原中特异性和灵敏度均较高,更因其特有的强免疫原性成为结核分枝杆菌抗原的研究热点。结核分支杆菌早期分泌性抗原靶(ESAT-6)具有较强的细胞免疫活性,能够被有免疫活性的T细胞识别,生成大量的干扰素γ,从而产生保护性的细胞免疫,维持长期恒久的免疫记忆,因此有望成为人及动物结核病的特异性诊断试剂及疫苗开发侯选抗原。本研究利用本实验室早期建立的实验方法,对结核分枝杆菌38KD及ESAT-6蛋白进行序列优化合成、构建真核表达载体并实现其在哺乳动物细胞中的大量分泌性表达。本研究分为四个部分,第一部分我们成功构建了含结核分枝杆菌38KD蛋白基因的真核表达载体并转染HEK 293T细胞,实现高效表达分泌性38KD蛋白。设计合成的结核分枝杆菌38KD基因被克隆到T载体,然后亚克隆到真核表达载体pcDNA3.0,经酶切鉴定正确后,PEI转染法导入293T细胞。24h后换无血清的DMEM培养基继续培养3天后收集细胞及上清,采用Western Blot方法检测38KD蛋白的表达。酶切结果显示,获得正确的含38KD基因的重组表达载体;Western Blot结果显示,载体导入293T细胞后在细胞内及上清中都能检测到38KD蛋白表达。说明我们成功构建了含结核分枝杆菌38KD蛋白基因的重组真核表达载体pCDNA3.0-38KD,该载体可在哺乳动物细胞293T中高效分泌性表达38KD蛋白。第二部分我们构建了一个38KD蛋白与eGFP共表达的慢病毒载体pLV-38KD-IRES-eGFP 以及只表达 38KD 蛋白的 pLV-38KD,以研究 IRES-eGFP对38KD蛋白表达的影响。首先我们将携带有38KD基因的T载体及慢病毒载体用Mlu I和Nhe I双酶切后构建到慢病毒载体pLV-CMV-IRES-eGFP中得重到38KD蛋白与eGFP共表达载体pLV-38KD-IRES-eGFP;后者用Mlu I和Sal I双酶切,去掉IRES-eGFP片段得到只表达38KD蛋白的载体pLV-38KD。将上述两个表达载体用PEI转染法导入293T细胞,24h后换无血清的DMEM培养基继续培养3天后收集细胞及上清,采用Western Blot方法检测38KD蛋白的表达。酶切结果显示,获得正确的含38KD蛋白基因的慢病毒表达载体pLV-38KD-IRES-eGFP 及 pLV-38KD;Western Blot 结果显示,载体导入 293T细胞后在细胞及上清中均能检测到38KD蛋白的表达,且去除IRES-eGFP的慢病毒表达载体,38KD蛋白的表达量明显比38KD蛋白与eGFP共表达的慢病毒载体表达量高。说明我们成功构建38KD蛋白与eGFP共表达以及只表达38KD蛋白的慢病毒表达载体,这两种载体均可在哺乳动物细胞293T中高效分泌性表达38KD蛋白,IRES-eGFP对38KD蛋白的表达有明显抑制作用。基于第二部分的研究,我们继续探讨IRES-eGFP对其它基因表达的影响。通过类似方法,我们构建一个带有结核分枝杆菌ESAT-6基因的共表达载体pLV-ESAT-6-IRES-eGFP及只表达ESAT-6基因的慢病毒载体pLV-ESAT-6。酶切结果显示我们成功构建了含结核分枝杆菌ESAT-6蛋白基因的慢病毒表达载体pLV-ESAT-6-IRES-eGFP 和 pLV-ESAT-6,Western Blot 结果显示两个载体均可在哺乳动物细胞293T中高效分泌性表达ESAT-6蛋白,IRES-eGFP对ESAT-6蛋白表达也有明显抑制作用。第四部分,通过ELISA方法进一步验证38KD和ESAT-6蛋白的免疫原性。利用真核表达系统高效表达结核分枝杆菌38KD蛋白和ESAT-6蛋白,血清学鉴定结果显示,两种蛋白均能与结核病阳性血清发生免疫反应,ELISA反应阳性率为71.43%和100%,说明表达出来的蛋白均具有免疫原性和较高的灵敏度。通过上述方法,我们成功构建了含结核分枝杆菌38KD蛋白基因的真核表达载体,通过转染HEK-293T细胞初步鉴定38KD蛋白可以在哺乳动物细胞中高效分泌性表达;而我们构建的含38KD蛋白基因的重组慢病毒表达载体也成功在HEK-293T细胞中表达,且IRES-eGFP对38KD蛋白的表达有明显抑制作用。通过类似方法构建含结核分枝杆菌ESAT-6基因的慢病毒载体,实验结果也表明IRES-eGFP对ESAT-6蛋白表达同样有明显抑制作用,其原因尚待进一步研究。血清学结果显示,本研究中表达的38KD蛋白和ESAT-6蛋白均具有免疫原性和较高的灵敏度。本研究获得了高效表达重组结核分枝杆菌38KD和ESAT-6蛋白的真核表达载体,为后续建立稳定高量38KD蛋白和ESAT-6蛋白生产平台以及结核分枝杆菌诊断试剂盒的研发和疫苗的开发奠定基础。(本文来源于《南方医科大学》期刊2017-03-01）
蒋玉亮,兰萍,李艳,余赟,毛明星[5]（2016）在《一种基于OmpA的分泌型原核表达载体的构建及应用》一文中研究指出目的构建大肠杆菌周质分泌型表达载体并验证其表达效果。方法以pUC18-lpp为基础载体,构建含有核糖体结合元件(RBS)、信号肽(OmpA)、多克隆位点(MCS)的分泌型表达载体pUC-OmpA;通过分子克隆获得含有密码子优化的人生长激素(hGH)编码序列的pUC-OmpA-hGH,转化大肠杆菌JM109菌株并验证周质分泌性质。结果经IPTG诱导后,SDS-PAGE、Western印迹分析结果显示周质空间有hGH重组表达产物,分子量约为22kD,大小与预期一致,周质hGH约占菌体总hGH的43%。结论成功构建了基于OmpA信号肽的周质分泌型表达系统,为实现生物活性蛋白的原核表达奠定了基础。(本文来源于《成都医学院学报》期刊2016年04期）
庞敏,袁丽荣,张振霞,李冬艳,王海龙[6]（2015）在《小鼠无纤毛柱状上皮细胞分泌蛋白基因真核表达载体的构建及其生物活性的鉴定》一文中研究指出目的克隆小鼠无纤毛柱状上皮细胞分泌蛋白(CCSP)基因并构建其真核表达重组体,鉴定重组CCSP的生物学活性。方法采用TRIzol法提取小鼠肺组织总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对CCSP基因进行扩增,Bam H I和XhoⅠ双酶切扩增产物与真核表达载体p CDNA3.1(+),酶切产物连接并转化入感受态细胞Trans 5α,阳性重组质粒p CDNA3.1(+)-m CCSP经PCR、酶切和测序鉴定正确后,通过DNAfectin 2100 DNA转染试剂将重组质粒转染人胚肾(HEK293T)细胞,采用Western blot法检测表达产物。脂多糖分别刺激转染有p CDNA3.1(+)-m CCSP和p CDNA3.1(+)质粒DNA的HEK 293T细胞,利用磷脂酶A2的水解作用,以掺入大肠杆菌膜的[3H]标记的油酸为酶解底物,检测HEK 293T细胞内PLA2的活力。结果聚合酶链反应结果显示,从小鼠肺组织中扩增出约290 bp的片段。菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒p CDNA3.1(+)-m CCSP构建成功且序列正确。Western blot结果显示,在转染p CDNA3.1(+)-m CCSP的HEK293T细胞中有CCSP蛋白的表达,蛋白质分子量约为10 k Da,而转染空质粒组未见表达。CCSP蛋白可以显着降低脂多糖诱导的HEK 293T细胞内PLA2的活力。结论成功构建了真核表达重组体p CDNA3.1(+)-m CCSP,且重组蛋白CCSP具有生物学活性,为进一步研究其功能奠定了基础。(本文来源于《环境与健康杂志》期刊2015年10期）
郑敬民,尹广,恽时锋,赵文紧[7]（2015）在《C3a分泌性表达载体及过表达C3a肾小管上皮细胞株的构建》一文中研究指出目的已有的研究表明包括糖尿病肾病在内的多种肾病患者肾小管上皮细胞存在C3a/C3aR轴过度活化现象,但有关C3a/C3aR轴过度活化在肾小管上皮细胞中的病理意义未知。文中构建分泌性过表达C3a的肾小肾小管上皮细胞株,为探讨各种病理情况下C3a/C3aR轴过度活化的病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3a分泌性表达单元,将其克隆到慢病毒表达载体p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;将p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞,包装成C3a表达重组慢病毒LV-C3a;以LV-C3a感染人肾小管上皮细胞系HK2,根据LV-C3a上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点,以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆;利用荧光定量PCR和ELISA方法对稳定转染细胞克隆的C3a表达水平和分泌情况进行分析,从中鉴定出稳定分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株。结果 1成功构建了序列完全正确的C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;2成功进行了重组慢病毒包装,得到了高滴度(5×108个/m L)的C3a表达重组慢病毒LV-C3a;3成功进行了LV-C3a对HK2细胞的转染,得到了稳定转染LV-C3a的HK2细胞株;基于荧光定量PCR和ELISA的分析证实,与HK2细胞比较,HK2-C3a细胞株中C3a mRNA表达水平显着升高[(1.0±0.5)vs(1 321.0±18.0),P<0.01],分泌的C3a水平显着升高[(0.3±0.2)ng/m L vs(249.0±37.0)ng/m L,P<0.01]。结论成功构建的C3a分泌性慢病毒表达载体和分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株为进一步研究各种病理情景中C3a/C3aR过度活化在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3a/C3aR过度活化在其他细胞中的病理意义创造了条件。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2015年06期）
张莹莹[8]（2015）在《产TGase菌株的筛选、分泌型穿梭表达载体的构建及tgl的克隆表达》一文中研究指出微生物来源的谷氨酰胺转氨酶(Transglutaminase,TGase)能够催化蛋白的交联反应改善蛋白质结构、凝胶性和稳定性,使其在食品工业中有广泛应用前景。本研究先从土壤中筛选得到产TGase的菌株,并克隆了TGase编码基因,通过构建新的分泌型穿梭表达载体,将TGase编码基因分别在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中成功表达,为其酶学性质研究和食品工业中的应用打下了基础。1.从土壤样品中筛选到3株产TGase酶活较高的菌株,包括2株放线菌和1株细菌,分别编号为A109.5、A110.4、TGase1318,另有本实验室保存的具有TGase活性的菌株Bacillus subtilis subsp.natto TGase1319。根据TGase1318菌体和菌落形态、生理生化特征初步证明该菌株为枯草芽孢杆菌。该菌株16S r DNA序列比对结果表明其16S r DNA序列与B.subtilis的同源性最高,达到99%以上,进一步证明菌株TGase1318为B.subtilis。2.根据B.subtilis TGase编码基因tgl的序列设计引物,用PCR法克隆了TGase1318、TGase1319两株菌的tgl基因,两个基因均为738 bp长,编码由245个氨基酸组成的TGase蛋白,两个蛋白序列之间有两个氨基酸的差异。用分子生物学相关软件分别对tgl基因所编码的氨基酸序列、等电点、二级结构和叁级结构等进行分析,结果显示分子量均为28.29 k Da,p I 6.71,两个TGase蛋白的结构特性相近。BLAST比对后发现与NCBI上来自B.subtilis其他菌株的TGase有94%~100%的同源性。3.通过重迭PCR法将源于菌株TGase1319的碱性蛋白酶基因E的信号肽序列Apre与E.coli-B.subtilis穿梭表达载体p TL上的木糖启动子序列(Pxylr)融合,替换了p TL载体上的T7短肽,构建了一个由D-木糖进行诱导表达外源蛋白的E.coli-B.subtilis的分泌型穿梭表达载体p TZ。将PCR方法扩增得到β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因gus和来自粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的脂肪酶基因lipa,分别插入到p TZ载体的多克隆位点处构建重组质粒,转化B.subtilis WB800,获得工程菌W8-gus和W8-lipa。以GUS为报告基因,采用荧光分光光度法进行初步优化,得到W8-gus的诱导表达条件:37℃、200 r/min条件下,终浓度为2%的D-木糖诱导24 h后,W8-gus上清液出现了明显的蓝色。在同样条件下运用p-NPP比色法检测W8-lipa上清液的酶活,其活力达到了195.2±0.05 U/mg,与未经诱导的W8-lipa菌株的上清液相比提高了近300倍。结果表明二种基因均得到了很好的表达,证明载体p TZ是一个遗传操作简便、表达率高的E.coli-B.subtilis分泌型穿梭表达载体。4.将TGase1318、TGase1319两菌株的tgl基因分别克隆到分泌型穿梭表达载体p TZ和E.coli表达载体p ET-21b中,构建了分别包含两种tgl基因的重组质粒p TZ-tgl和p ET-21b-tgl,并转化B.subtilis WB800和E.coli BL21,获得了阳性转化子WB800-p TZ-t8、WB800-p TZ-t9和BL21-p ET21b-t8、BL21-p ET21b-t9。它们的发酵液和菌体裂解液都能在70℃下催化牛血清白蛋白(BSA)发生交联反应,大肠杆菌中活性达到0.45±0.06 U/m L,枯草芽孢杆菌中活性为0.17 U/m L,表明枯草芽孢杆菌的tgl基因得到了成功表达,且TGase活性高于已有报道。另外,该酶在70℃下仍表现出明显的对BSA的交联作用,这一特性表明TGase或可用于高温下的食品加工中。(本文来源于《河北农业大学》期刊2015-06-04）
李海勋[9]（2015）在《PR39与ADM共载体rAAV分泌表达后对心肌缺血再灌注损伤的保护性研究》一文中研究指出目的:探讨共载体r AAV-PR39-ADM分泌表达促血管生成因子(PR39)和血管扩张因子(ADM)对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用。本实验首先制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,然后将共载体r AAV-PR39-ADM注射在缺血心肌区域,通过B超、血流动力学等检测指标对缺血心肌功能进行评价,最后通过分子生物学手段检测给药区域心肌下游相关因子表达情况。方法:[1]实验一:选健康成年雄性SD大鼠36只,体重范围在280g±20g,随机分为对照组(I/R&Saline)、治疗1(TR1)、治疗2(TR2),每组各12只。实验二:选健康成年雄性SD大鼠48只,体重范围在280g±20g,随机分为治疗组1(TR1)、治疗组2(TR2)、对照组1(CG1)、对照组2(CG2),每组各12只。[2]各组大鼠首先建立心肌缺血再灌注损伤模型。实验一,对照组将0.3ml生理盐水通过鼠尾静脉注射;TR1组将0.3ml r AAV-PR39-ADM(3×109pfu)通过鼠尾静脉注射;TR2组将r AAV-PR39-ADM 0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部。实验二,TR1组,将共载体r AAV-PR39-ADM0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部;TR2组,将共载体r AAV-PR39 0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部;CG1组,将腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV)0.3ml(3×109pfu)注射在缺血再灌注损伤心肌局部;CG2组,将生理盐水0.3ml注射在缺血再灌注损伤心肌局部。3.使用心电图对模型进行监测,术后7天分别使用TTC染色、心肌称重实验、血流动力学等手段评价模型及给药方式;利用B超和血流动力学评价四组大鼠心功能,病理切片用masson染色对心肌梗死纤维化面积(MIA)评价分析。4.速取心肌组织进行研磨,提取蛋白,用western blot方法检测相关因子表达。结果:[3]TTC染色大鼠心肌缺血再灌注损伤确切,证明模型制备成功。[4]心肌局部给药优于外周给药。3.实验2:各组大鼠术后7天行B超检查,测量左室壁厚度及计算左心室射血分数(EF%);血流动力学检测,左室收缩末压(left ventricular systolic pressure,LVSP)、左室内压最大上升及下降速率(±LV dp/dt max),评价心脏功能;病理切片评价心肌梗死面积。TR1组EF%、LVSP、±LV dp/dt max各项指标明显高于TR2、CG1、CG2组;TR2组EF%、LVSP、±dp/dt max高于CG1、CG2组;而CG1、CG2组EF%、LVSP、±LV dp/dt max无统计学差异。TR1、TR2组梗死面积小于CG1、CG2组;而TR1组梗死面积小于TR2组;CG1、CG2组梗死面积无差异。4.在缺血心肌蛋白中,成功检测到下游低氧诱导因子(HIF-1α)、PR39标签肽(6His)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管扩张因子(ADM)的表达,并对其含量进行分析,TR组高于CG组。结论:1.SD大鼠心肌缺血再灌注损伤模型复制成功。2.治疗组缺血心肌功能得以提高,心肌收缩功能改善,梗死面积有所减小,共载体r AAV-PR39-ADM可能提高了大鼠缺血心肌的功能。3.心功能改善的机制可能与共载体r AAV-PR39-ADM高表达扩血管因子(ADM)和下游血管内皮生长因子(VEGF)有关。(本文来源于《第四军医大学》期刊2015-05-01）
郭敏,雷清,刘晓,蒋琳[10]（2015）在《戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出目的:将胞内表达载体p AO815改建成分泌型表达载体,并体外构建戊型肝炎病毒ORF2128-660多拷贝重组表达质粒,进一步比较不同转化子在毕赤酵母中的表达水平,以得到高表达重组菌株。方法:利用重迭PCR技术将α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660拼接后插入去磷酸化的p AO815载体,得到分泌型表达重组质粒α-ORF2128-660/p AO815(单拷贝),然后将Bam HⅠ和BglⅡ双酶切获得的目的基因表达盒(AOX-α-ORF2128-660)插入到去磷酸化的重组质粒α-ORF2128-660/p AO815中,得到2(AOX-α-ORF2128-660)/p AO815(2拷贝),电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导,SDS-PAGE分析不同拷贝数转化子的表达产量,ELISA检测表达产物的生物活性。结果:α-factor信号肽基因与目的基因ORF2128-660已克隆入表达载体中,目的蛋白分泌至诱导液上清中,相对分子质量约为59 000,与阴性对照比,单拷贝、2拷贝转化子表达的产物均有生物活性但表达水平无区别。结论:成功改建成分泌型表达载体,构建了多拷贝重组表达质粒,并且成功表达了目的蛋白,为利用改造的p AO815载体表达其他蛋白奠定了基础。(本文来源于《中国新药杂志》期刊2015年03期）
表达分泌载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了研究新西兰兔SOD1蛋白分子的结构与功能,设计了一对特异性引物,通过RT-PCR方法克隆得到了该基因编码序列。将该编码序列克隆到分泌型原核表达载体PET-25b,经菌落PCR、双酶切和测序鉴定证实成功构建了重组表达载体。将重组质粒转化大肠杆菌表达菌株E.coli BL21(de3) PlysS,建立了分泌型原核表达系统。IPTG诱导培养重组菌后收集样品检测,经SDS-PAGE、Western blot鉴定,证实在培养物上清中检测到了SOD1蛋白的表达。至此,成功建立了新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达系统,实现了蛋白的可溶表达,为进一步研究该蛋白的结构与功能打下了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达分泌载体论文参考文献
[1].曹丁,李学优,昝继清,兰玲峰,甘祥武.鸡α干扰素真核表达载体的改造及在毕赤酵母中的分泌表达[J].江苏农业科学.2019
[2].邓小亮,马文康,付欣,洪玮,谭茵.新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达载体构建及在E.coli表达[J].畜牧与兽医.2019
[3].胡增垒,刘晓文,胡娇,顾晗,石磊.表达分泌型与膜结合型HH7N9AIV血凝素蛋白重组NDV载体疫苗的免疫原性比较[J].中国家禽.2018
[4].白娜.结核分枝杆菌38KD和ESAT-6蛋白真核表达载体的构建及其在HEK293T中的分泌性表达[D].南方医科大学.2017
[5].蒋玉亮,兰萍,李艳,余赟,毛明星.一种基于OmpA的分泌型原核表达载体的构建及应用[J].成都医学院学报.2016
[6].庞敏,袁丽荣,张振霞,李冬艳,王海龙.小鼠无纤毛柱状上皮细胞分泌蛋白基因真核表达载体的构建及其生物活性的鉴定[J].环境与健康杂志.2015
[7].郑敬民,尹广,恽时锋,赵文紧.C3a分泌性表达载体及过表达C3a肾小管上皮细胞株的构建[J].医学研究生学报.2015
[8].张莹莹.产TGase菌株的筛选、分泌型穿梭表达载体的构建及tgl的克隆表达[D].河北农业大学.2015
[9].李海勋.PR39与ADM共载体rAAV分泌表达后对心肌缺血再灌注损伤的保护性研究[D].第四军医大学.2015
[10].郭敏,雷清,刘晓,蒋琳.戊型肝炎病毒多拷贝分泌表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达[J].中国新药杂志.2015