导读:本文包含了重组分枝杆菌论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:分枝,杆菌,结核,质粒,蛋白,疫苗,基因。
重组分枝杆菌论文文献综述
王楚涵,马鹏娇,罗涛,鲍朗[1]（2019）在《优化分枝杆菌重组工程系统构建分枝杆菌突变株筛选方法》一文中研究指出目的通过为分枝杆菌重组工程系统(pJV53)加筛选标记,建立一种分枝杆菌突变株的筛选方法。方法为pJV53加入蔗糖反筛选基因SacB和突变的潮霉素抗性基因hyg~S,通过潮霉素抗性恢复指示耻垢分枝杆菌(Ms)体内同源重组的成功,为突变株的筛选提供标记;通过蔗糖反筛选挑选脱去质粒的突变株。结果成功构建重组质粒pJV53-SacB-hyg~S,筛选出MSMEG_4487 G188A突变株以及利福平耐药的Ms rpoB D516Y和Ms rpoB H526Q突变株,并成功将以上突变株脱去质粒。结论 pJV53-SacB-hyg~S能够有效帮助构建筛选突变株,并对突变株进行脱质粒操作,具有普遍应用价值;结核分枝杆菌rpoB基因D516Y和H526Q的突变与该菌对利福平的耐药有关。(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2019年05期）
江楠,刘娉婷,罗镇颉,吴晨,穆文美[2]（2019）在《猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其表达》一文中研究指出目的构建猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,分析猪带绦虫TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。方法采用PCR方法从重组质粒pGEX-TSOL18中扩增TSOL18基因,克隆入pMV361载体,构建pMV361-TSOL18穿梭质粒,经酶切和测序鉴定后电穿孔法转化入耻垢分枝杆菌,进行单克隆菌落筛选及PCR鉴定。构建的猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗经热诱导后,以SDS-PAGE分析及Western blot分析TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。结果成功扩增出TSOL18目的基因,大小约为393 bp,与预期值相符;经酶切验证,pMV361-TSOL18穿梭质粒构建成功;PCR鉴定猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗构建成功。SDS-PAGE电泳检测重组菌表达的目的蛋白TSOL18,相对分子质量为15×10~3与预期相符;Western blot分析该蛋白能被TSOL18兔抗血清识别。结论成功构建了猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,猪带绦虫TSOL18基因在耻垢分枝杆菌中成功表达,表达蛋白具有反应原性,其免疫原性有待进一步研究。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年06期）
夏露[3]（2019）在《重组结核分枝杆菌CFP10-ESAT6变态反应原(RP22)的Ⅰ期临床研究》一文中研究指出结核菌素皮肤试验是目前广泛使用的结核感染试验方法 ,但该方法 的特异性较差,无法区分卡介苗接种者和非结核分枝杆菌感染人群。浙江海正药业研发的新型重组融合蛋白CFP10-ESAT6变态反应原(RP22)在动物实验中显示出良好的安全性和特异性,但在人体没有临床试验。目的 评价RP22在健康人群中的安全性和有效性,探讨RP22作为结核分枝杆菌诊断皮肤试验试剂的安全剂量和判定时间,并为Ⅱ期临床研究提供安全的剂量范围。方法 采用随机、双盲、安慰剂对照设计,选取72名胸部X片正常的健康成人志愿者,所有人均接受QuantiFERON-TB(QFT)检测,随机分为6组,每组12名受试者,每组8名受试者接受试验药物做皮试,4名受试者接受安慰剂做皮试(男女比例均为1:1)。试验药物为RP22,安慰剂为RP22的佐剂。6个实验组的试验药物和安慰剂浓度逐渐升高,分别为0.1ug、0.25ug、0.5ug、1ug、2ug和4ug。每个剂量组的所有受试者均通过Mantoux方法 接受皮内注射试剂,在皮肤试验后不同监测时间点(15min、30min、2h、8h、24h、48h、72h)监测所有受试者的生命体征,并记录注射部位周围的皮肤反应和不良事件。结果 除1名受试者在皮肤试验72小时后发生轻微车祸外(与皮肤试验无关),所有组均未观察到严重不良事件。4ug组8例受试者皮肤试验后出现30mm以上红晕,皮肤试验后30 min全部红肿消失,可能与药物渗透压高有关。11例受试者有QFT阳性结果 ,其中10例有大于30mm的红晕,1例无皮肤反应。在60例阴性QFT受试者中,只有1例红晕大于30mm。结论 RP22作为结核分枝杆菌感染诊断的皮肤试验试剂,除4ug剂量组外,其他浓度均有良好的耐受性及安全性。(本文来源于《中华医学会结核病学分会2019年全国结核病学术大会论文汇编》期刊2019-06-12）
唐弘[4]（2019）在《携带Lipocalin 2基因重组减毒沙门氏菌的构建及其对分枝杆菌生长影响的研究》一文中研究指出目的:1.构建和鉴定脂质运载蛋白2(Lipocalin 2,Lcn2)基因重组减毒沙门氏菌。2.探讨携带Lipocalin 2的减毒沙门氏菌对分枝杆菌生长的影响。方法:1.以巨噬细胞RAW264.7提取RNA逆转录为c DNA为模版,采用PCR法扩增Lcn2基因,定向克隆到质粒p Bud CE4.1-orim的多克隆位点中,构建重组质粒p Bud CE4.1-orim-Lcn2;将重组质粒p Bud CE4.1-orim-Lcn2转染RAW264.7细胞,用RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达。2.将重组质粒转入减毒沙门氏菌SL7207得到重组菌株SL7207-p Bud CE4.1-orim-Lcn2;重组菌感染RAW264.7细胞,用Western blot检测Lcn2的蛋白表达,RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达;7H10平板上通过菌落计数观察重组菌对感染RAW264.7细胞的BCG生存的影响。3.用重组菌以灌胃的方式感染BALB/c小鼠后,检测脾组织中Lcn2表达,血清中IFN-γ和IL12的水平。4.建立BCG小鼠感染模型,以重组菌治疗后通过肺组织荷菌量和肺组织病理变化观察其对分枝杆菌生长的影响。结果:1.成功构建Lipocalin 2基因重组质粒,经双酶切及基因测序鉴定正确。重组质粒转染RAW264.7后用RT-q PCR法检测Lcn2的m RNA表达升高(P=0.000,F=22570)。2.成功构建重组菌株SL7207-p Bud CE4.1-orim-Lcn2,经PCR鉴定正确。重组菌感染RAW264.7细胞Lcn2的蛋白表达量较对照组增加(P=0.000)。RT-q PCR法检测重组菌m RNA表达较对照组明显升高(P=0.000,F=5.281)。7H10平板上重组菌组BCG数量与空载菌组相比明显减少(P=0.000,F=11.41)3.重组菌组与空载对照菌组相比小鼠脾组织Lcn2表达升高(P=0.000,F=4.449),重组菌组与生理盐水组相比血清IFN-γ升高(P=0.004,F=15.27),IL12未见明显差异(P>0.05,F=2.26)。4.空载菌组、重组菌组小鼠肺荷菌量分别为6.27±0.33log10、6.21±0.29log10。空载菌组与重组菌组肺荷菌量比较无统计学差异(P>0.05,F=1.30)。空载菌组、重组菌组肺组织病理变化未见明显差异。结论:1.成功构建了携带Lcn2基因的重组减毒沙门菌。2.重组菌感染RAW264.7细胞后Lcn2的表达增加,对感染RAW264.7的BCG存活起到一定的抑制作用。3.重组菌以灌胃的方式感染小鼠后,小鼠脾组织Lcn2表达增加,血清IFN-γ含量增加,血清IL-12含量未见明显变化,提示小鼠免疫状态有利于结核病转归。4.重组菌治疗BCG感染小鼠后,小鼠肺部BCG荷菌量与对照组无明显差异,肺部病理变化无明显差异。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
刘培[5]（2019）在《重组结核分枝杆菌PstS1诊断结核病的研究》一文中研究指出目的:克隆和表达结核分枝杆菌(MTB)磷酸盐特异性转运系统蛋白1(PstS1),分析其免疫学活性,评价其诊断结核病的价值。方法:根据Genbank中报道的MTB H37Rv株PstS1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因,与克隆载体pMD18-T连接,转化至宿主菌E.coli JM109,菌落PCR和质粒DNA测序鉴定阳性克隆。将双酶切的PstS1基因与表达载体pET-28a(+)连接,转化至宿主菌E.coli JM109,筛选阳性重组子,提取pET-28a(+)-PstS1重组表达质粒,经PCR和双酶切鉴定后,转化至宿主菌E.coli BL21(DE3);IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物。亲和层析纯化PstS1,Western-blot鉴定其反应原性。棋盘滴定法确定PstS1与病人血清反应的最适浓度。以PstS1作为诊断抗原,ELISA检测结核病患者血清抗体,评价其诊断价值。结果:PCR扩增得到PstS1基因,大小约1120bp,经DNA测序鉴定其与MTB标准菌株PstS1基因序列一致。成功构建重组表达质粒pET-28a(+)-PstS1,经IPTG诱导表达得到PstS1,亲和层析得到纯化的PstS1。Western-blot证实PstS1具有良好的反应原性。棋盘滴定法确定PstS1最适反应浓度为0.5μg/100μL,最适血清稀释度为1:100。PstS1的ELISA诊断结核病的灵敏度为85%,特异性为94.9%,阳性及阴性预测值分别为94.2%和86.2%,诊断效率为89.9%。结论:采用重组DNA技术获得有免疫学活性的PstS1,可用于结核病的诊断。(本文来源于《湖南师范大学》期刊2019-05-01）
孙卫国,侯江厚,李改平,杨栗坤,孙雯娜[6]（2019）在《结核分枝杆菌Lsr2蛋白原核重组表达及其多克隆抗体制备》一文中研究指出目的利用原核系统获得重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备抗Lsr2多克隆抗体。方法以临床标准株H37Rv DNA为模板,合成引物PCR扩增Lsr2核酸序列,插入原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,柱上复性纯化后,重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备并纯化抗Lsr2多克隆抗体,采用间接ELISA和Western-blotting实验对抗体进行验证。结果成功构建pET28a-Lsr2表达质粒,重组蛋白Lsr2经SDS-PAGE电泳鉴定分子量为14 kD。亲和层析及柱上复性后,纯化的重组蛋白纯度在95%左右。制备的抗Lsr2多克隆抗体效价在1:5.5×10~6以上,并能特异性识别纯化的重组蛋白和结核分枝杆菌菌体蛋白。结论成功在原核系统内表达并纯化了重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备了高效价的抗Lsr2多克隆抗体,为进一步研究Lsr2蛋白的功能,筛选其下游相互作用蛋白以及相关分子机制研究奠定了基础。(本文来源于《实用预防医学》期刊2019年04期）
李丹丹,张体银,王绥家,晁哲,高慎阳[7]（2019）在《副结核分枝杆菌MAP0862蛋白的重组表达及抗原性分析》一文中研究指出为了验证MAP0862蛋白在副结核分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,试验以从发病山羊消化道病料中提取的副结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆MAP0862基因并构建重组表达载体pET28a-MAP0862,然后对其进行诱导表达及Western-blot分析。结果表明:检测到的羊副结核分枝杆菌MAP0862基因与GenBank中K10菌株基因完全相同;重组表达载体pET28a-MAP0862经IPTG诱导表达出约40 ku的目标蛋白,与预期结果相符;Western-blot对比分析显示, MAP0862蛋白只与羊副结核阳性血清发生显色反应。说明MAP0862蛋白具有良好的免疫反应原性和特异性。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2019年05期）
单纯,吴培,苏瑞霞,高超,喻永新[8]（2019）在《重组酶聚合酶扩增技术检测结核分枝杆菌》一文中研究指出目的利用重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)技术检测结核分支杆菌。方法采用Axxin T8-ISO扩增仪(TwistDX公司),反应温度设置为39℃,反应时间20min。检测分为实验组、阳性对照组和空白对照组。实验组模板DNA从痰液中提取。阳性对照模板DNA为H37Rv标准菌株样本DNA及卡介苗提取的DNA。空白对照为蒸馏水。结果 RPA技术可在20min内明显区分103～106 copies/mL的阳性质粒与阴性对照。对分离培养的结核杆菌(H37Rv)DNA及卡介苗提取的DNA,阳性克隆质粒进行等温扩增,结果结核杆菌分离株DNA、卡介苗DNA、阳性克隆质粒均有阳性扩增反应,而非结核分枝杆菌分离株和阴性对照无阳性扩增反应。灵敏度为100%,特异性为82%。结论 RPA技术利用了重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶代替了传统PCR变性、退火、延伸的热循环过程,在常温25℃～42℃、15～30min内即可实现痕量核酸的快速扩增,可应用于快速检测人结核分枝杆菌,是一种全新的检测方法。(本文来源于《中国微生态学杂志》期刊2019年02期）
何黎,齐文静,郑雪婷,郭刚,李军[9]（2018）在《细粒棘球绦虫EgM123重组耻垢分枝杆菌疫苗在小鼠体内的表达及其免疫应答》一文中研究指出目的构建表达细粒棘球绦虫成虫特异性基因EgM123的耻垢分枝杆菌疫苗株,接种BALB/c小鼠,观察其免疫原性。方法 PCR扩增EgM123片段,定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261中,构建重组质粒pMV261-EgM123。连接产物转化至大肠埃希菌DH5α中,培养后提取质粒,测序确定阅读框架正确,后电穿孔转入耻垢分枝杆菌,构建表达EgM123的重组耻垢分枝杆菌疫苗(rMS-EgM123),经热诱导后采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白表达。在培养过程中连续检测菌液A600值,绘制重组菌生长曲线。取重组菌接种小鼠,检测基础接种和加强免疫接种后血清特异抗体水平。结果 PCR扩增出大小为594bp的EgM123片段,EgM123基因正确插入到穿梭质粒pMV261中,测序鉴定阅读框架正确。重组耻垢分枝杆菌连续传10代培养,重组质粒DNA序列未发生变异。Western blot检测表达产物能被抗EgM123鼠血清识别。用重组耻垢分枝杆菌疫苗加强免疫后的小鼠血清特异性抗体呈持续上升趋势,单次加强免疫8周后抗体水平(A405值为2.504±0.659)显着高于亚单位疫苗组(P<0.05)。结论重组耻垢杆菌疫苗菌能表达细粒棘球绦虫成虫EgM123蛋白,且该重组疫苗可通过加强免疫增强基础免疫诱导小鼠产生的抗体水平。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2018年12期）
张爱君,张彩芳,哈丽娜,王秀青[10]（2018）在《重组结核分枝杆菌38KDa蛋白的免疫学特性研究》一文中研究指出目的:探讨利用毕赤酵母表达体系表达的重组结核分枝杆菌38KDa蛋白的免疫学特性。方法:利用甲醇作为诱导剂诱导表达重组结核分枝杆菌38KDa蛋白,之后以高、低剂量免疫BALB/c小鼠,同时设BCG疫苗对照组和PBS空白对照组,每2周免疫1次,第3次免疫2周后剪尾取血,分离血清,ELISA法检测免疫小鼠血清中的抗体和IFN-γ表达水平。9周后,处死小鼠并分离各组小鼠的脾淋巴细胞,MTT法检测脾淋巴细胞的增殖。结果:重组结核分枝杆菌38KDa蛋白免疫小鼠后,能产生较高滴度抗体;38KDa蛋白高、低剂量诱导组脾淋巴细胞增值刺激指数(SI)均高于PBS对照组(P<0.05),与BCG组无差异(P>0.05);高、低剂量组IFN-γ的表达水平明显高于PBS对照组(P<0.05),与BCG组无差异(P>0.05),高低剂量组间SI、IFN-γ水平均无差异(P>0.05)。结论:重组38KDa蛋白在动物机体内表现有一定的免疫原性,可以作为结核病新疫苗的备选抗原之一。(本文来源于《长治医学院学报》期刊2018年05期）
重组分枝杆菌论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,分析猪带绦虫TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。方法采用PCR方法从重组质粒pGEX-TSOL18中扩增TSOL18基因,克隆入pMV361载体,构建pMV361-TSOL18穿梭质粒,经酶切和测序鉴定后电穿孔法转化入耻垢分枝杆菌,进行单克隆菌落筛选及PCR鉴定。构建的猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗经热诱导后,以SDS-PAGE分析及Western blot分析TSOL18基因在重组耻垢分枝杆菌中的表达情况。结果成功扩增出TSOL18目的基因,大小约为393 bp,与预期值相符;经酶切验证,pMV361-TSOL18穿梭质粒构建成功;PCR鉴定猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗构建成功。SDS-PAGE电泳检测重组菌表达的目的蛋白TSOL18,相对分子质量为15×10~3与预期相符;Western blot分析该蛋白能被TSOL18兔抗血清识别。结论成功构建了猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗,猪带绦虫TSOL18基因在耻垢分枝杆菌中成功表达,表达蛋白具有反应原性,其免疫原性有待进一步研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组分枝杆菌论文参考文献
[1].王楚涵,马鹏娇,罗涛,鲍朗.优化分枝杆菌重组工程系统构建分枝杆菌突变株筛选方法[J].四川大学学报(医学版).2019
[2].江楠,刘娉婷,罗镇颉,吴晨,穆文美.猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其表达[J].中国病原生物学杂志.2019
[3].夏露.重组结核分枝杆菌CFP10-ESAT6变态反应原(RP22)的Ⅰ期临床研究[C].中华医学会结核病学分会2019年全国结核病学术大会论文汇编.2019
[4].唐弘.携带Lipocalin2基因重组减毒沙门氏菌的构建及其对分枝杆菌生长影响的研究[D].重庆医科大学.2019
[5].刘培.重组结核分枝杆菌PstS1诊断结核病的研究[D].湖南师范大学.2019
[6].孙卫国,侯江厚,李改平,杨栗坤,孙雯娜.结核分枝杆菌Lsr2蛋白原核重组表达及其多克隆抗体制备[J].实用预防医学.2019
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[8].单纯,吴培,苏瑞霞,高超,喻永新.重组酶聚合酶扩增技术检测结核分枝杆菌[J].中国微生态学杂志.2019
[9].何黎,齐文静,郑雪婷,郭刚,李军.细粒棘球绦虫EgM123重组耻垢分枝杆菌疫苗在小鼠体内的表达及其免疫应答[J].中国病原生物学杂志.2018
[10].张爱君,张彩芳,哈丽娜,王秀青.重组结核分枝杆菌38KDa蛋白的免疫学特性研究[J].长治医学院学报.2018
论文知识图
