基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立

基于血清4型禽腺病毒Fiber-2间接ELISA方法的建立

论文摘要

为建立一种快速监测鸡群中血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的方法,本研究通过PCR扩增FAd V-4 AQ强毒株的fiber-2基因截短体(112 bp~1 440 bp),克隆至p ET-32a(+)载体中进行原核表达,以重组表达的Fiber-2蛋白作为包被抗原,经优化反应条件,建立了快速检测FAd V-4的间接ELISA方法,该方法特异性试验结果显示,除FAd V-4外,与其它病原无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法检测血清最低稀释度为1∶12 800,具有较高的敏感性;重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10%。该方法对FAd V-4临床感染的阳性血清检出率为100%,与琼脂扩散试验结果完全吻合。本研究建立的以Fiber-2重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法能够用于FAd V-4灭活疫苗免疫后的血清学调查。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要实验材料
  •   1.2 FAdV-4 AQ株基因组提取
  •   1.3 fibe r-2基因的克隆与表达
  •     1.3.1 fiber-2基因的扩增
  •     1.3.2 p ET32a-fiber-2重组质粒的构建
  •     1.3.3 Fiber-2蛋白表达及纯化
  •   1.4 Fibe r-2间接ELIS A方法的建立
  •   1.5 阴性、阳性临界值的确定
  •   1.6 特异性试验
  •   1.7 敏感性试验
  •   1.8 重复性试验
  •   1.9 临床样品检测
  • 2 结果
  •   2.1 pET32 a-fibe r-2重组质粒的构建与鉴定
  •   2.2 Fibe r-2的表达与纯化
  •   2.3 Fibe r-2间接ELIS A方法的建立
  •   2.4 间接ELIS A阴阳性临界值的确定
  •   2.5 特异性试验
  •   2.6 敏感性试验
  •   2.7 重复性试验
  •   2.8 临床血清样品检测结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 梅楠,孙海伟,李允章,汪凯,王桂军,陈鸿军

    关键词: 血清型禽腺病毒,原核表达,间接

    来源: 中国预防兽医学报 2019年08期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 安徽农业大学动物科技学院,中国农业科学院上海兽医研究所

    基金: 上海科技兴农重点攻关项目(201702080008-F00068),上海科委实验动物专项(18140900700),国家重点研发专项(2017YFD0500702,2017YFD0502302),国家自然基金面上项目(31572502)

    分类号: S852.65

    页码: 807-811

    总页数: 5

    文件大小: 296K

    下载量: 100

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