花生FAD2基因CRISPR/Cas9多靶点敲除载体构建

花生FAD2基因CRISPR/Cas9多靶点敲除载体构建

论文摘要

ω-6脂肪酸脱氢酶控制花生中油酸向亚油酸的转化,该酶由AhFAD2基因编码。为了研究AhFAD2基因的功能,本研究根据前期已经克隆得到的AhFAD2基因序列,设计了gRNA前导序列,并构建了CRISPR/Cas9基因编辑载体,通过双酶切和Sanger测序确定载体构建成功。AhFAD2基因CRISPR/Cas9载体的构建为接下来的遗传转化及研究该基因的功能奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •     1.1.1 菌种与质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •   1.2 试验方法
  •     1.2.1 靶位点序列的设计与引物合成
  •     1.2.2 sgRNA表达盒的构建
  •     1.2.3 FAD2-1和FAD2-2的三个sgRNA表达盒片段与pEX-Cas9-At载体的连接
  •     1.2.4 第二个sgRNA表达盒串联片段与pEX-Cas9-At载体的连接
  • 2 结果与分析
  •   2.1 sgRNA表达盒的构建
  •   2.2 sgRNA表达盒与pEX-Cas9-At载体的连接
  •   2.3 第二个sgRNA表达盒串联片段与pEX-Cas9-At载体的连接
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李柯,赵昆昆,宁龙龙,马倩,李忠峰,马兴立,张幸果,殷冬梅

    关键词: 花生,基因敲除

    来源: 山东农业科学 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,农作物

    单位: 河南农业大学农学院

    基金: 国家自然科学基金项目(U1704232),河南省产业技术体系项目(S2012-05-G03)

    分类号: S565.2;Q943.2

    DOI: 10.14083/j.issn.1001-4942.2019.09.008

    页码: 56-62+67

    总页数: 8

    文件大小: 1319K

    下载量: 333

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