导读:本文包含了丝素重链论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:丝素,家蚕,基因,蛋白,特异性,转录,转基因。
丝素重链论文文献综述
夏晓娟[1]（2017）在《人工丝素重链（artFibH）的设计及转基因家蚕品系的构建》一文中研究指出蚕丝是一种复杂的微细纤维集合性天然蛋白,因具优良的特性被广泛使用和研究。然而力学性能上的一些缺陷,使得蚕丝的应用范围具有局限性。因此,蚕丝纤维的改性是拓展应用振兴产业的当务之急。蚕丝纤维的改性研究已有较长历史,改性的方法可分为物理改性、化学改性和遗传改性。物理和化学的改性方法只是对蚕丝进行修饰,不能从本质上改变蚕丝蛋白特性,且成本高、工序繁琐。利用遗传操作技术对蚕丝基因进行人工改造,能够获得性能更优良且可稳定遗传的新品系。蜘蛛丝是已知动物纤维中力学性能最优越的丝纤维,其蛋白特性、组分及成丝过程与蚕丝具有相似性,因此不断有学者尝试在家蚕丝腺中表达蜘蛛丝来提高蚕丝的力学性能,但外源基因表达量低一直是无法攻克的难题。如果能通过编辑蚕丝自身的基因来实现蚕丝性能的改良则是最经济有效的途径。研究发现蜘蛛丝重复区域序列较比蚕丝的更加规则有序,这可能是蜘蛛丝强于蚕丝的重要原因。丝素重链Fib-H基因是丝蛋白最重要的结构基因,具有长片段的重复区域,决定着蚕丝力学性能。有研究者发现对Fib-H进行截短后蚕丝的力学性能变差。那么,如果人为改造丝素重链使其序列更规则,长度更长就有可能获得保持天然特性的超强人工蚕丝。丝素重链高度重复和高GC含量的特性,使得利用常规的PCR技术和测序技术难以对其进行简单地克隆及编辑。因此,我们采用人工组装基因的方法对此设想做了初步的探索。本论文取得的主要成果如下:1、人工丝素重链(artFibH)的设计根据Fib-H基因的序列特征,我们选择重复序列最长的第七个重复区(R07)和第六个非重复区(A06)作为一个重复单元,称为“A06R07”。为保证人工丝素重链保持原来的序列特征,我们选择了两个IIs型限制内切酶:Bbs I和BsaI,在基因的两条链上各含有一个Bbs I和一个BsaI的识别序列,并且均设计在质粒载体上。Bbs I识别序列设计在A06R07序列的下游,其中一个设计在“A06R07”两个碱基之后,酶切后A06R07序列露出3?端TTGT末端;Bsa I识别序列设计在A06R07序列的两端,其中一个设计在A06R07序列的上游五个碱基之前,酶切后A06R07序列形成5?端AACA末端,另一个BbsI和Bsa I识别序列之间相距7个碱基,二者共用一个酶切位点,切出的一对粘性末端正好碱基互补,利用酶切连接的方法实现重复单元之间无缝连接加倍。2、artFibH转基因家蚕品系的建立经酶切验证,我们共成功构建了由Fib-H启动子驱动人工Fib-H基因的piggyBac转基因载体如下:pBac[R01A06R07R12]、pBac[R01(A06R07)3R12]、pBac[R01(A06R07)5R12]、pBac[R01(A06R07)5-last-R12]、pBac[R01(A06R07)3-Red-R12]、pBac[R01(A06R07)3-SELR13-R12]。以家蚕实用品系932为受体材料,利用显微注射技术,制备了转基因家蚕。通过荧光观察筛选到阳性个体。其中pBac[R01(A06R07)3R12]有2个蛾圈,阳性蛾圈率为0.2%,pBac[R01(A06R07)5R12]有1个蛾圈,阳性蛾圈率为0.5%。3、artFibH转基因蚕丝的相关检测通过蛋白预测软件分析3?型和5?型的人工Fib-H蛋白大小分别约为203KDa和295KDa,均小于家蚕932品系Fib-H蛋白(350KDa)。通过SDS-PAGE银染和Western Blot检测,结果显示预测目的条带并不明显,因此推测可能是由于其蛋白分子量太大而且具有自组装的特性,而滞留在点样孔中;通过冷冻切片技术获得单根茧丝的横截面直径,结果显示野生型与人工型茧丝形态和直径并无明显差异,表明artFibH的插入不会影响茧丝的正常形态和直径大小;通过应力应变拉伸试验,结果显示,与WT型相比,人工3?型和5?型茧丝伸长率稍有提高,强度、韧性、弹性模量稍有降低,表明由于转基因插入位点的不确定性,artFibH插入后降低了蚕丝的力学性能;通过傅立叶红外光谱试验,进一步分析了茧丝蛋白二级结构,结果显示,与WT型相比,人工3?型和5?型的茧丝蛋白构象中,β-折迭、α-螺旋和无规则卷曲含量稍有提高,β-转角含量稍有降低,表明成丝过程中artFibH会促进β-折迭的形成。(本文来源于《西南大学》期刊2017-04-10）
唐若愚[2]（2016）在《棉大卷叶螟丝素重链基因的克隆、功能验证及在生产上的应用》一文中研究指出棉大卷叶螟(Sylepta derogataFabricius)是鳞翅目螟蛾科昆虫,分布范围广、寄主种类多,能对多种经济作物产生较大危害。为了进一步研究棉大卷叶螟的吐丝危害机理,本文以棉大卷叶螟的丝素重链基因为研究对象,克隆得到其cDNA全长序列,测定了不同发育阶段棉大卷叶螟吐丝基因的表达量,以及取食不同寄主后棉大卷叶螟吐丝基因的表达量。在此基础上,运用饲喂法干扰棉大卷叶螟丝素重基因的表达,进而影响卷叶螟的吐丝卷叶,并观察干扰表达后对棉大卷叶螟种群发育与蛹重的影响。结果如下:1.根据文献报导的其他昆虫的丝素重链基因,通过RACE法克隆得到棉大卷叶螟丝素重链基因cDNA全长。棉大卷叶螟丝素重链基因cDNA全长为1465bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAG,开放阅读框全长为1323bp。依据棉大卷叶螟丝素重链基因的核苷酸序列推导其氨基酸序列,估算该蛋白分子量为43.553kDa,等电点pI为6.26。将所获得的基因全长同其他已经登录到GenBank的昆虫丝素重链基因序列进行比对,发现与棉大卷叶螟丝素重链基因序列一致性最高的是外米缀蛾(Corcyra cephalonica),达到65%,其次为大蜡螟(Galleria mellonella)与琥珀蚕(Antheraea assama),一致性皆为 59%。2.通过实时定量PCR技术,分析了不同发育阶段棉大卷叶螟丝素重链基因的表达量,以及取食不同寄主后棉大卷叶螟丝素重链基因的表达量。结果表明,丝素重链基因表达量随虫态、虫龄的不同而不同:2龄、4龄幼虫以及预蛹期丝素重链基因表达量相对较高,其中2龄虫丝素重链基因表达量最高;3龄、5龄幼虫丝素重链基因表达量相对较低,蛹期及羽化后丝素重链基因的表达量更低,甚至近于零;取食不同寄主后棉大卷叶螟丝素重链基因的表达量不同,饲喂苘麻叶片的棉大卷叶螟丝素重链基因的相对表达量最高,棉花次之,木槿最低,且它们之间差异显着。3.通过饲喂法干扰棉大卷叶螟幼虫丝素重链基因的表达,并从菌液浓度、饲喂时间、饲喂的幼虫虫龄等方面研究其对棉大卷叶螟丝素重链基因表达量的影响。菌液浓度试验结果表明,随着饲喂棉大卷叶螟幼虫菌液浓度的增加,丝素重链基因相对表达量下降。喂食不同虫龄棉大卷叶螟幼虫不同天数菌液的试验结果表明,2L、3L、4L幼虫喂食表达dsRNA的菌液后其重链基因表达量均下降,且喂食表达dsRNA的菌液3天、5天后的丝素重链基因表达量比喂食1天的表达量显着下降。同时,2L、4L干扰效果比3L的好。试验结果说明,菌液浓度、饲喂时间、饲喂的幼虫虫龄均会对卷叶螟丝素重链基因的干扰效率产生影响。(本文来源于《扬州大学》期刊2016-11-10）
周春燕[3]（2016）在《MBF2家族鉴定及其成员MBF2-1参与丝素重链转录调控的研究》一文中研究指出家蚕能成为重要的经济昆虫,主要原因在于其可以分泌蚕丝。蚕丝是由家蚕高度特化的器官-丝腺合成分泌的。根据丝腺各区段的结构形态不同,将丝腺分成前部、中部及后部丝腺。丝的两大组成部分—丝素和丝胶,分别是由后部丝腺及中部丝腺合成。其中,丝素是蚕丝的主要组成部分,它由丝素重链蛋白、丝素轻链蛋白及P25蛋白组成的多聚体蛋白。丝蛋白的表达不仅具有组织特异性,还具有明显的时期特异性。丝蛋白在幼虫前几个龄期合成少量丝蛋白,主要用于眠期时,将自己固定在蚕座上,以便蜕皮。丝蛋白只有在幼虫最后一龄末期才被大量合成。先前研究表明,丝蛋白的调控主要在转录水平,并且丝蛋白的转录发生在每龄盛食期,在眠期则不再转录。虽然研究学者对丝腺高效的蛋白合成能力和基因表达的调控机制进行了持续的研究,但是目前只有少量的丝蛋白转录因子被鉴定,丝蛋白的高效特异表达的调控机制仍待进一步阐明。多蛋白桥梁因子MBF2最初在丝腺中被分离并证明作为转录调控因子发挥作用。刘庆信等人研究发现MBF2在丝腺中大量存在,且在丝腺并呈现周期性表达。我们推测MBF2在丝腺中发挥着重要功能。基于家蚕基因组数据库这一信息平台,对MBF2进行了分析并对其在丝素重链基因转录调控中的作用进行了研究,研究结果如下:1.家蚕MBF2家族基因的鉴定、表达分析及功能研究以MBF2氨基酸序列为质询序列,采用BLASTP程序检索家蚕9倍基因组数据库及NCBI库,获得了9个家族候选基因,并将其分别命名为MBF2-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9。信息分析结果显示,它们均有EST数据,且有些基因在染色体上成簇分布。氨基酸序列预测分析结果显示该家族基因编码的氨基酸残基数目范围为109-118个,且在N端均有信号肽,表明该家族基因在合成过程中需跨膜,很可能为分泌型蛋白。序列比对结果显示,家蚕MBF2成员有较高的同源性,序列一致性高达41%。进化分析结果显示,该家族基因为昆虫特有的一类基因,家蚕MBF2-1、MBF2-2、MBF2-3及MBF2-7在进化树中聚成一簇,并且它们与黑脉金斑蝶及樗蚕蛾的MBF2有着较近的进化关系。其他成员与参与免疫反应的病原体响应基因βREPAT聚成一簇,说明该基因家族很可能参与家蚕的免疫反应。组织表达谱分析结果显示该家族基因成员具有明显的组织特异性,MBF2-1在丝腺及马氏管中髙量表达,MBF2-5在中肠中髙量表达,MBF2-2、MBF2-3、MBF2-4、MBF2-6和MBF2-8在血液中髙量表达。而MBF2-7在脂肪体,精卵巢中较高的量的表达。时期表达谱分析结果则显示,该家族基因表达呈现明显的时期特异性,有些在预蛹期及蛹期髙量表达如MBF2-4、-6、-8和-9;而有些基因在蛹期的表达量较低但在幼虫期髙量表达,如MBF2-2、MBF2-3、MBF2-5;而MBF2-1与上述基因均不同,在五龄期及预蛹期髙量表达;MBF2-7则各时期均有表达,但在眠期的表达量较低。幼虫期是家蚕摄取食物获得能量的时期,而蛹期则是完成成虫组织器官的发生、形成、以及生殖细胞的发育、成熟的时期。丝腺、中肠、血液和脂肪体等组织均是是家蚕物质和能量代谢的主要组织,表达谱分析显示MBF2家族成员在这些组织及时期髙量表达,说明这些基因在家蚕代谢及发育过程中发挥着重要作用。Bb攻毒实验结果显示,MBF2-4、MBF2-7、MBF2-9在注射Bb后1h被明显的上调表达,然后在注射3h后下调;MBF2-8则在注射12h后才被上调表达然后恢复到正常水平;与上述基因相反,MBF2-2和MBF2-3在注射Bb后3h被明显的下调了,紧接着恢复到正常的表达水平。结果表明这些基因参与家蚕对Bb的免疫反应。饥饿及恢复食桑实验结果显示,MBF2-1、-4及-8在饥饿的条件下被下调表达,而当恢复食桑后,基因开始上调表达;而MBF-2、-3、-6及-7则呈现出相反表达模式,MBF2-5及MBF2-9的表达模式上来看,它们的表达同样被影响,但是与其他基因相比,变化的比较迟缓。以上结果表明该家族基因与营养代谢有着很紧密的关联。2.MBF2的原核表达及表达模式分析通过构建原核表达载体并诱导表达纯化MBF2蛋白,并制备了多克隆抗体并用于后续实验。丝腺不同区段q PCR结果显示,MBF2仅在后部丝腺发生转录。丝腺不同区段Western blot结果显示,不仅在后部丝腺检测到了MBF2蛋白的存在,在前部丝腺及中部丝腺也检测了MBF2蛋白的存在。蚕丝免疫荧光结果显示,MBF2蛋白定位在丝胶层,且茧的最外层含量最高。以上结果表明该蛋白是一个分泌型蛋白,这与前面的预测是一致的。MBF2家族成员MBF2-8已经被证明可以参与家蚕的免疫反应,说明茧中的MBF2很可能发挥抵御外来病原入侵的作用,这对以后研究MBF2在免疫方面的功能奠定了基础。对MBF2在后部丝腺的表达时期进行Western blot及q PCR分析,结果显示MBF2仅在后部丝腺发生转录,在四龄眠期髙量表达,在五龄前期也有较髙量的表达,而在五龄后期及上蔟其基本不表达。MBF2呈现出与fibH相反的表达模式,暗示MBF2可能参与丝素重链基因的转录。3.MBF2基因参与fibH的转录调控为了检测MBF2是否参与fibH的调控,我们采用了双萤光素酶报告系统,首先,构建了MBF2细胞过表达载体及fibH的萤火虫萤光素酶报告载体,将它们转入Bm E细胞,并进行了酶活测定。结果显示,过表达MBF2可以影响fibH启动子的活性。然而对MBF2的氨基酸序列分析,没有预测到可以与DNA结合的功能域。那么MBF2很可能通过与其他的转录因子相互作用调控fibH的转录。通过亚细胞定位,我们发现MBF2与Bmdimm共定位于细胞核。为进一步确定它们之间的关系,通过利用体外原核表达重组蛋白进行Far-western实验,结果显示,MBF2在体外可以与Bmdimm相互作用。此外,在家蚕Bm E细胞系中进行Bi FC实验,结果显示,MBF2与Bmdimm可以相互作用。以上结果表明MBF2可以与Bmdimm相互作用。有意思的是,Bmdimm已经证明参与丝素重链调控且对丝素重链起到正调控的作用,但是,当我们同时过表达MBF2和Bmdimm时,fibH启动子的活性下调。结果表明MBF2可以抑制Bmdimm对fibH的调控作用并下调fibH启动子的活性。4.FTZ-F1参与fibH转录调控已经有文献报道MBF2可以参与FTZ-F1对下游基因的转录调控,但是两者之间是否存在直接的相互作用关系尚未得知。我们首先原核表达,纯化FTZ-F1蛋白并制备抗体。qPCR及Western blot分析结果显示,FTZ-F1在五龄叁天的各组织中均有表达。其中,五龄叁天各组织Western blot结果显示FTZF1在丝腺、马氏管中的表达量较高。时期表达谱分析结果显示,FTZ-F1在眠期的后部丝腺表达量最高,五龄期以后表达量逐渐降低,在五龄末期及上蔟期基本不表达,这种表达模式与MBF2表达模式一致,而与fibH表达模式相反。亚细胞定位、Co-IP、BiFC及Far-western等实验结果显示FTZ-F1与MBF2可以相互作用。我们已经证明了MBF2可以参与fibH的转录调控。那么FTZ-F1是否也参与fibH的转录调控呢?我们对fibH启动子进行了分析,分析结果显示,在fibH启动子的-389~-397及-652~-659处存在FTZ-F1潜在的结合位点。EMSA及ChIP实验结果显示FTZ-F1可以与fibH(-389~-397)位点结合。当我们将启动子该位点突变或是截短时,fibH启动子的活性上调。为了对这一点进行进一步检测,将该位点突变后的fibH启动子萤光素酶报告载体与FTZ-F1过表达载体共转进行酶活检测,结果显示,对fibH启动子活性没有显着性变化。以上实验结果显示家蚕FTZ-F1通过结合该位点调控fibH启动子活性。我们已经证明单独过表达MBF2或FTZ-F1均可以下调fibH的启动子的活性,并且它们存在相互作用。为了研究两者是否可以一起作用调控fibH,我们将MBF2及FTZ-F1同时过表达,结果显示,fibH启动子的活性下调更加显着。结果说明MBF2与FTZ-F1相互作用并参与fibH的转录调控作用。qPCR分析FTZ-F1及MBF2在大造及高丝量的品种872中后部丝腺的表达量,结果显示MBF2及FTZ-F1在872中的表达量远远低于大造中的表达量。有趣的是,对fibH启动子进行分析,发现fibH启动子上FTZ-F1与Bmdimm的结合位点靠的很近,我们已经证明它们均与MBF2相互作用。那么它们之间是否存在相互作用呢?我们对此进行了研究。BiFC及Far-western实验结果显示,FTZ-F1可以与Bmdimm相互作用。双萤光素酶报告系统结果显示,单独过表达Bmdimm时,fibH启动子活性上调。当将FTZ-F1与Bmdimm共表达时,fibH启动子的活性无明显变化。结果表明Bm FTZ-F1可以抑制Bmdimm对fibH启动子活性的上调作用。5.蜕皮激素对fibH调控的影响到目前为止,关于蜕皮激素调控家蚕fibH的报道比较少。为了研究蜕皮激素对家蚕fibH转录调控的影响,我们将fibH启动子的萤光素酶报告载体转入细胞,然后用蜕皮激素处理细胞,酶活检测结果显示,20E可以调控fibH启动子活性,并呈现出剂量依赖性的影响。那么20E是怎么实现对fibH调控的呢?已经有文章报道,无论在体内还是在体外,当用20E处理后部丝腺时均可以诱导FTZ-F1的表达。MBF2与FTZ-F1在后部丝腺中有着相似的表达模式。那么MBF2是否受蜕皮激素调控呢?我们对MBF2启动子进行了预测分析,分析结果显示,在MBF2启动子上游有BrC、EcR、E74A等多个核激素受体的作用元件。蜕皮激素的诱导实验结果显示,无论是在体内还是体外,MBF2均被20E上调表达,我们还发现当MBF2被上调表达时,fibH的表达量却下调了。该结果说明20E很可能通过调控MBF2参与fibH的转录调控。我们已经证明MBF2可以与FTZ-F1相互作用并参与fibH的调控。有文献报道20E可以诱导后部丝腺内FTZ-F1的表达。综合以上结果表明蜕皮激素可以通过MBF2及FTZ-F1介导调控fibH的转录。综合上述结果,20E诱导FTZ-F1及MBF2表达,而这两个蛋白可以与Bmdimm相互作用并抑制其对fibH的调控,从而实现fibH低量表达或是不表达。(本文来源于《西南大学》期刊2016-11-01）
宋菲,王欣,钱平,唐顺明,赵巧玲[4]（2014）在《家蚕Bmo-miR-2739对丝素重链基因Fib-H表达的调控作用》一文中研究指出MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的非编码小RNAs,可通过序列互补配对的方式对靶基因mRNA的转录进行调控。丝素重链(Fib-H)是家蚕丝蛋白的重要组成成分,研究miRNAs对Fib-H基因mRNA的调控作用,有助于理解丝腺高效合成蚕丝蛋白的分子机制。用靶基因预测软件RNA22和RNAhybrid对Fib-H基因的3'-UTR及已知的家蚕miRNA进行分析,发现Fib-H基因的3'-UTR有一个Bmo-miR-2739的潜在靶位点。进一步将人工合成的Bmo-miR-2739模拟物和带有Fib-H基因3'-UTR的荧光素酶报告基因载体共转染BmN细胞,48 h后检测到荧光素酶表达上调约13%。初步推测Bmo-miR-2739对Fib-H具有正调控作用。(本文来源于《蚕业科学》期刊2014年03期）
高志宏,刘春,任静波,刘品彦,魏丽婉[5]（2010）在《不同截短的丝素重链基因启动子驱动报告基因在家蚕组织中的表达》一文中研究指出应用重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)为基因转移载体,以绿色荧光蛋白基因(EGFP)为报告基因,研究不同截短的丝素重链基因启动子(-2127/+23、-925/+23和-238/+23)驱动报告基因在家蚕5龄幼虫组织中的表达情况。结果发现,通过病毒感染介导,3种长度丝素重链基因启动子驱动的报告基因在脂肪体和血细胞中存在异位表达,从个体体表可直接观察到明显的绿色荧光;3种长度的启动子都能在后部丝腺中高效起始EGFP的转录,产生绿色荧光;长度为0.9kb和0.2kb的启动子0.9KH、0.2KH在中部丝腺能起始EGFP转录产生绿色荧光,而2.1kb的启动子(2.1KH)能起始EGFP转录,但未能检测到绿色荧光;3种长度的启动子也能在Sf9培养细胞中起始EGFP基因表达。上述结果表明,丝素重链基因启动子没有严格的组织特异性。(本文来源于《蚕业科学》期刊2010年03期）
彭云,潘远旺,钱琰琰,郑清银,姜岚[6]（2009）在《带有丝素重链信号肽序列的家蚕丝胶蛋白启动子驱动DsRed的瞬时分泌表达》一文中研究指出为了探讨家蚕Bombyxmori丝素蛋白重链信号肽序列在中部丝腺组织中是否具有功能活性,根据家蚕丝蛋白基因的启动子活性高、丝蛋白具有高效分泌的特性,构建了带有丝素重链基因fib-H信号肽的家蚕丝胶-1(ser-1)启动子(ser-HS),用ser-HS驱动DsRed基因构建了分泌型瞬时表达载体pSK-SerHS-DsRed-polyA。转染细胞实验显示,该载体能在家蚕BmN细胞中瞬时表达DsRed。家蚕注射载体后,可在中部丝腺腔中检测到红色荧光,表明瞬时表达的DsRed已分泌到丝腺腔内。据此提出克隆的fib-H信号肽序列在家蚕中部丝腺组织中具有信号肽的功能。(本文来源于《昆虫学报》期刊2009年11期）
李艳梅,陈慧梅,贾海芳,薛仁宇,贡成良[7]（2009）在《家蚕丝腺表达hGM-CSF的丝素重链基因打靶》一文中研究指出为了通过基因打靶实现外源基因在丝腺组织特异表达,克隆并测定了丝素重链基因(fib-H)启动子及其旁侧序列、fib-H内含子和第二外显子部分序列,并分别作为基因打靶的同源臂,构建了带有A3启动子驱动GFP的表达盒、丝素轻链启动子驱动hGM-CSF的打靶载体;体外翻译和体内瞬时表达结果显示,该基因打靶载体可以在后部丝腺组织匀浆中表达hGM-CSF,在丝腺可以检测到GFP的表达;将该基因打靶载体用脂质体转染BmN细胞后可获得GFP荧光细胞;将混有脂质体的基因打靶载体通过精子介导法注入到处女蛾中得到转基因家蚕,并已传代到第四代,PCR及PCR产物测序表明GFP和hGM-CSF基因均稳定遗传。(本文来源于《中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集（1）》期刊2009-05-01）
丝素重链论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
棉大卷叶螟(Sylepta derogataFabricius)是鳞翅目螟蛾科昆虫,分布范围广、寄主种类多,能对多种经济作物产生较大危害。为了进一步研究棉大卷叶螟的吐丝危害机理,本文以棉大卷叶螟的丝素重链基因为研究对象,克隆得到其cDNA全长序列,测定了不同发育阶段棉大卷叶螟吐丝基因的表达量,以及取食不同寄主后棉大卷叶螟吐丝基因的表达量。在此基础上,运用饲喂法干扰棉大卷叶螟丝素重基因的表达,进而影响卷叶螟的吐丝卷叶,并观察干扰表达后对棉大卷叶螟种群发育与蛹重的影响。结果如下:1.根据文献报导的其他昆虫的丝素重链基因,通过RACE法克隆得到棉大卷叶螟丝素重链基因cDNA全长。棉大卷叶螟丝素重链基因cDNA全长为1465bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAG,开放阅读框全长为1323bp。依据棉大卷叶螟丝素重链基因的核苷酸序列推导其氨基酸序列,估算该蛋白分子量为43.553kDa,等电点pI为6.26。将所获得的基因全长同其他已经登录到GenBank的昆虫丝素重链基因序列进行比对,发现与棉大卷叶螟丝素重链基因序列一致性最高的是外米缀蛾(Corcyra cephalonica),达到65%,其次为大蜡螟(Galleria mellonella)与琥珀蚕(Antheraea assama),一致性皆为 59%。2.通过实时定量PCR技术,分析了不同发育阶段棉大卷叶螟丝素重链基因的表达量,以及取食不同寄主后棉大卷叶螟丝素重链基因的表达量。结果表明,丝素重链基因表达量随虫态、虫龄的不同而不同:2龄、4龄幼虫以及预蛹期丝素重链基因表达量相对较高,其中2龄虫丝素重链基因表达量最高;3龄、5龄幼虫丝素重链基因表达量相对较低,蛹期及羽化后丝素重链基因的表达量更低,甚至近于零;取食不同寄主后棉大卷叶螟丝素重链基因的表达量不同,饲喂苘麻叶片的棉大卷叶螟丝素重链基因的相对表达量最高,棉花次之,木槿最低,且它们之间差异显着。3.通过饲喂法干扰棉大卷叶螟幼虫丝素重链基因的表达,并从菌液浓度、饲喂时间、饲喂的幼虫虫龄等方面研究其对棉大卷叶螟丝素重链基因表达量的影响。菌液浓度试验结果表明,随着饲喂棉大卷叶螟幼虫菌液浓度的增加,丝素重链基因相对表达量下降。喂食不同虫龄棉大卷叶螟幼虫不同天数菌液的试验结果表明,2L、3L、4L幼虫喂食表达dsRNA的菌液后其重链基因表达量均下降,且喂食表达dsRNA的菌液3天、5天后的丝素重链基因表达量比喂食1天的表达量显着下降。同时,2L、4L干扰效果比3L的好。试验结果说明,菌液浓度、饲喂时间、饲喂的幼虫虫龄均会对卷叶螟丝素重链基因的干扰效率产生影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
丝素重链论文参考文献
[1].夏晓娟.人工丝素重链（artFibH）的设计及转基因家蚕品系的构建[D].西南大学.2017
[2].唐若愚.棉大卷叶螟丝素重链基因的克隆、功能验证及在生产上的应用[D].扬州大学.2016
[3].周春燕.MBF2家族鉴定及其成员MBF2-1参与丝素重链转录调控的研究[D].西南大学.2016
[4].宋菲,王欣,钱平,唐顺明,赵巧玲.家蚕Bmo-miR-2739对丝素重链基因Fib-H表达的调控作用[J].蚕业科学.2014
[5].高志宏,刘春,任静波,刘品彦,魏丽婉.不同截短的丝素重链基因启动子驱动报告基因在家蚕组织中的表达[J].蚕业科学.2010
[6].彭云,潘远旺,钱琰琰,郑清银,姜岚.带有丝素重链信号肽序列的家蚕丝胶蛋白启动子驱动DsRed的瞬时分泌表达[J].昆虫学报.2009
[7].李艳梅,陈慧梅,贾海芳,薛仁宇,贡成良.家蚕丝腺表达hGM-CSF的丝素重链基因打靶[C].中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集（1）.2009
论文知识图
