安同庆[1]2004年在《利用噬菌体展示技术鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位》文中认为抗原表位，又称抗原决定簇，是抗原分子抗原性的基础。正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病的诊断、设计无毒副作用的多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。因此目前在预防医学领域许多关于以表位为基础的如表位疫苗和特异性诊断试剂等的研究也就成了热点。而噬菌体展示技术作为近年来新兴起的研究蛋白质抗原表位的有利工具，已经成功地鉴定出了多种病原微生物的抗原表位。这就为揭示一些病原体未知的抗原表位，从而进一步达到预防和控制疾病的发生提供了条件。 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRSV引起的，以妊娠母猪的繁殖障碍以及各年龄猪呼吸道症状为特征的一种传染病。该病于1987年首次在美国发现，目前，已广泛流行于世界各国，给养猪业造成了巨大的经济损失。1996年我国分离到第一株PRRS病毒，命名为CH-1a株。虽然对该病毒的一些分子生物学特已经进行了深入研究，但迄今为止，对于CH-1a株的抗原表位还没有报道。为深入了解CH-1a株的抗原结构，便于设计科学合理的疫苗和诊断试剂，我们对PRRSV CH-1a株进行了抗原表位的鉴定。 本研究利用噬菌体随机7肽库对PRRSV CH-1a N蛋白的单克隆抗体N3H2进行了3轮筛选，得到了3个模拟表位：“STTPFKK”、“TKHPQFV”和“STGNRLT”。为进一步研究表位结构，本研究构建了PRRSV ORF7基因特异性肽库，利用N3H2进行了3轮筛选，获得3个阳性噬菌体克隆。序列分析表明，这3个克隆都展示有“IQTAFNQGA”9个氨基酸的序列，对应于PRRSVCH-1a株N蛋白的79-87位氨基酸残基(aa 79-87)。人工合成这段表位编码序列并进行原核表达，利用单抗N3H2对表达产物进行Western blot分析和ELISA鉴定，均为阳性。由此表明IQTAFNQGA为PRRSV CH-1a株的一个线性B细胞抗原表位，并将其命名为Ep703。 通过序列比较发现，Ep703与Meulenberg等(1998)在LV株N蛋白中鉴定的一个构象表位(由aa 51-67与aa 80-90构成)的aa 80-88序列完全相同，而CH-1a株aa 50-66与LV株aa 51-67相比较，发现二者存在2个氨基酸的差异(LV A~(60)→CH-1a T~(59)和LV L~(65)→CH-1a R~(64))。LV株N蛋白含有2个半胱氨酸(C~(27)、C~(76))，而CH-1a株中含有3个半胱氨酸(C~(27)、C~(76)和C~(90))，因此二者的N蛋白在通过二硫键形成高级结构的方式可能不同，导致两种蛋白具有不同的空间结构和抗原性。二级结构分析发现，aa 79-87区域以β折叠为主，这种构型有助于表位的形成。蛋白的三维结构显示，Ep703的9个氨基酸多肽暴露于蛋白的表面。3个模拟表位与表位Ep703的序列“IQTAFNQGA”相比，相同的氨基酸很少，但是各表位氨基酸的极性却有一个共同的特征：亲水性氨基酸比例较大，疏水性氨基酸比例较少。通过与GenBank中41株美洲型分离株的N蛋白的序列进行比较，发现Ep703的序列在美洲型毒株中高度保守。因此，我们鉴定的表位Ep703是一个在美洲型毒株中保守的线性B细胞抗原表位。
安同庆, 周艳君, 仇华吉, 王云峰, 童光志[2]2004年在《利用噬菌体展示技术鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位》文中研究说明抗原表位,又称抗原决定簇,是抗原分子抗原性的基础.正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病的诊断、设计无毒副作用的多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义.猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRSV引起的,以妊娠母猪的繁殖障碍以及各年龄猪呼吸道症状为特征的一种传染病,广泛流行于世界各国,给养猪业造成了巨大的经济损失.本研究利用噬菌体随机7肽库对我国分离到第一株PRRS病毒CH-1a株的核衣壳(N)蛋白单克隆抗体N3H2进行了3轮筛选,得到了3个模拟表位:“STTPFKK”、“TKHPQFV”和“STGNRLT”.为进一步研究表位结构,本研究构建了PRRSV ORF7基因特异性肽库,利用N3H2进行了3轮筛选,获得3个阳性噬菌体克隆.序列分析表明,这3个克隆都展示有“IQTAFNQGA”9个氨基酸的序列,对应于PRRSV CH-1a株N蛋白的79-87位氨基酸残基(aa 79-87).人工合成这段表位编码序列并进行原核表达,利用单抗N3H2对表达产物进行Western blot分析和ELISA鉴定,均为阳性.由此表明IQTAFNQGA为PRRSVCH-1a株的一个线性B细胞抗原表位,并将其命名为Ep703.通过与GenBank中41株美洲型分离株的N蛋白的序列进行比较,发现Ep703的序列在美洲型毒株中高度保守.Ep703与Meulenberg等(1998)在欧洲株(LV)N蛋白中鉴定的一个构象表位(由aa 51-67与aa 80-90构成)的aa 80-88序列完全相同,而CH-1a株aa 50-66与LV株aa 51-67相比较,存在2个氨基酸的差异.LV株N蛋白含有2个半胱氨酸(C27、C76),而CH-1a株中含有3个半胱氨酸(C27、C76和C96),因此二者的N蛋白在通过二硫键形成高级结构的方式可能不同,导致两种蛋白具有不同的空间结构和抗原性.二级结构分析发现,aa 79-87区域以β折叠为主,这种构型有助于表位的形成.蛋白的叁维结构显示,Ep703的9个氨基酸多肽暴露于蛋白的表面.3个模拟表位与表位Ep703的序列“IQTAFNQGA”相比,相同的氨基酸很少,但是各表位氨基酸的极性却有一个共同的特征,即亲水性氨基酸比例较大,疏水性氨基酸比例较少.因此,我们鉴定的表位Ep703是一个在美洲型毒株中保守的线性B细胞抗原表位.
王明翠[3]2010年在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白亲和肽筛选与鉴定》文中研究表明本实验根据GenBank发表的PRRSV北美洲分离株(VR-2332)毒株的基因序列,利用Oligo和Primer 5.0软件设计了一对扩增GP5蛋白基因的引物。从疑似蓝耳病的猪内分离到PRRSV,在Marc-145细胞中盲传5-6代,出现较为明显的细胞病变,收获病毒液将其反复冻融3次进行病毒RNA的提取,反转录PCR,成功的扩增出全长为603个碱基的GP5基因片段。序列比较表明与已发表的VR-2332病毒毒株的GP5蛋白基因序列的同源率为91.5%;经BLAST搜索,扩增的GP5基因与CH-1α同源性最高,为99.2%。该毒株被命名为HH08。通过对PRRSV HH08株GP5基因序列分析,设计2对引物,通过PCR扩增获得了不含信号肽和跨膜功能区的GP5基因片段,长度分别为121bp和248bp。应用酶切位点相连构建融合基因技术,将两段基因亚克隆到原核表达载体中获得了重组质粒pET-GP5。构建的重组质粒在E.coli Rosetta中进行原核表达。SDS-PAGE结果表明有大小约为18 Ku的蛋白表达,与预计大小相符。Western-blot检测结果显示表达的蛋白能被天然PRRSV阳性猪血清所识别,同时此蛋白抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染。将重组蛋白免疫新西兰白兔,制备多抗,经间接ELISA结果显示多抗血清效价可达217。将PRRSV HH08包被ELISA检测多抗血清的特异性,发现血清特异性较好,GP5蛋白血清具有抗中和病毒的活性,间接免疫荧光结果显示多抗血清能够用于PRRSV的特异性检测。利用噬菌体随机十二肽库,以GP5重组融合蛋白为靶分子,对其进行了四轮生物淘选。对第四轮洗脱物随机选出的20个噬菌体单克隆的核苷酸序列测定及多肽序列的推导结果表明,经过对靶分子的四轮筛选后,最终筛选出8种高亲和力的十二肽。将最高亲和力的2个序列进行合成,分别为KHMHWHPPALNT (K); HWGNHSKSHPQR (H)。竞争ELISA方法对合成多肽的检测结果说明多肽K、H均能与GP5重组蛋白结合。病毒抑制试验表明所筛选出的多肽具有良好的生物活性。为了检测多肽体内的抗病毒活性,本实验以BALB/c小鼠为试验动物,进行免疫学实验。将小鼠分成5组,即V+K组(病毒加K噬菌体组)、V+H组(病毒加H噬菌体组)、V+S组(病毒加对照S噬菌体组)、V组(病毒加PBS组)和C组(空白对照组)。首免PRRSVHH08株,24 h后分别免疫K、H、S噬菌体,免疫后在第7 d、14 d、21 d、28 d进行血液采集,ELISA方法检测小鼠血清样本中抗PRRSV及GP5蛋白的特异性抗体水平变化。ELISA方法检测抗体效价表明,V+K、V+H组抗PRRSV及GP5蛋白的特异性抗体水平低于V+S组、V+P组。表明噬菌体K、H在小鼠体内起到了中和病毒PRRSV的作用。本研究为防治PRRSV感染提供了实验数据。
刘和[4]2013年在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白结合肽的筛选与鉴定》文中研究表明GP3蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒的次要结构蛋白之一，是由ORF3基因编码的一种高度糖基化糖蛋白，在病毒粒子中含量较少，研究的也不是很透彻，欧洲型与美洲型之间存在较大差异，但同型的不同毒株的GP3基因相似率较高。GP3可以诱导机体产生中和抗体，且不会引起抗体依赖性增强反应，GP3不仅是病毒粒子囊膜的组成部分，而且在病毒粒子被细胞受体识别的过程中，以及病毒变异等方面具有重要意义。鉴于此，本研究首先原核表达了PRRSV ORF3基因编码的GP3蛋白，并利用该蛋白制备了多克隆抗血清；同时，利用噬菌体展示技术，以原核表达的GP3重组蛋白为靶分子，对其进行了四轮生物筛选。从第四轮洗脱物中随机选出10个噬菌体蓝斑，扩增后提取其核苷酸序列进行测序并进行多肽序列推导。结果显示：经过对靶分子的四轮筛选后，最终筛选出一个结合率最高的十二肽，序列为SVSVGMKPSPRP，将其命名为S肽，并将其进行人工合成。进一步通过ELISA证实人工合成的S肽能与GST-GP3重组蛋白结合；各种体外抗病毒试验均表明所筛选出的多肽具有良好的生物活性，可以在体外细胞实验中产生明显的对病毒的抑制效果，且随着多肽浓度的不断提高，抑制效果也提高。综上所述，本研究为特异性鉴别PRRSV，以及鉴定GP3的功能性受体提供了一定参考，并为今后对于PRRS的小分子制剂的开发以及防治提供了一定的理论基础和试验依据。
周艳君[5]2005年在《猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定》文中指出猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome PRRS)是一种以妊娠母猪繁殖失败和仔猪出现呼吸困难为主要特征的传染病。由于PRRSV以侵害免疫系统为主,且易发生变异,可造成持续感染,而且具有抗体依赖增强作用,致使对该病的诊断和预防带来了很大困难。而通过单克隆抗体技术对PRRSV抗原表位进行深入研究,不仅有助于了解PRRSV抗原结构与功能的关系,而且对该病的诊断以及设计安全有效的基因工程表位疫苗等具有重要的意义。 本研究首先构建了含PRRSV CH-1a株各结构蛋白的重组表达载体pET30a-N、pGEX6p-rtM、pGEX6p-rtGP5、pET30a-GP4、pGEX6p-rtGP3和pGEX6p-rtGP2,并在大肠杆菌中进行了表达,利用PRRSV感染猪血清对表达产物进行Western blot分析,证实表达的六个融合蛋白都具有较好的反应活性。然后以PRRSV和表达的融合蛋白为抗原,免疫BAL B/c小鼠,最终共获得了16株针对N蛋白的单抗,15株针对GP5蛋白的单抗,5株针对GP3蛋白的单抗以及针对M蛋白、GP4蛋白和GP2蛋白的单抗各1株。 将N蛋白基因分为四个相互重迭的基因片段,对16株抗N蛋白的单抗进行鉴定,结果显示有7株单抗既能特异性识别ORF7-N2又能识别ORF7-N3的表达产物,其余9株单抗仅与全长的N蛋白发生反应,而不识别四个分段融合表达蛋白,推测9株单抗的抗原表位为构象依赖性抗原表位。将片段N2和N3相互重迭的部分(49-70aa)分成一系列小的基因片段,对7株单抗鉴定结果显示,有6株单抗能特异性识别融合多肽NEP3(49-58aa),而另外一株单抗N1H11对以上7个融合多肽均不识别,仅对49-70aa编码的肽段表现出了较弱的反应性,推测49-70aa仅是单抗N1H11抗原表位的一个组成部分。通过对NEP3从N端和C端进行一系列截短分析,确定了6株单抗抗原表位的主要功能区域,其中单抗N2H7识别的主要功能区域为H~(54)FPLA~(58)。单抗N2F7识别的主要功能区域为K~(52)PHFPLA~(58)。单抗N1A2、N1E3、N1G4、N2E5识别的主要功能区域为E~(51)KPHFP~(56)。对欧美分离株氨基酸的序列比较结果显示这叁个相互重迭的抗原表位在所有欧美分离株中都是高度保守的。而且利用PRRSV感染猪血清进行Western blot分析,结果表明抗原表位NEP3在PRRSV感染时具有较好的免疫优势。与LV株中由51-67aa和80-90aa共同组成的构象抗原表位不同,我们鉴定的抗原表位51-56aa、52-58aa和54-58aa虽然包含在这个构象表位之中,却是一个独立的线性免疫优势抗原表位,且位于核定位信号序列内部。 利用M基因两个相互重迭的片段M1(84-134aa)和M2(113-174aa)的融合表达产物对单抗M2B3进行检测,结果表明单抗M2B3既能识别M1又能识别M2基因片段的表达产物,推测其抗原决定区域位于二者相互重迭的部分112-134aa。选取二者重迭区域112-134aa并分别从N端和C端进行一系列截短,利用融合多肽ELISA对单抗M2B3进行鉴定,结果显示单抗M2B3不仅能特异性识别MEP1(112-134aa)而且还识别MEP2(117-134aa)和MEP3(112-129aa),但对其他融合多肽都不识别,据此确定117-129aa是单抗M2B3的主要抗原性区域。PRRSV感染猪血清中对MEP1～MEP3融合多肽进行Western blot分析结果显示,叁个融合多肽都能被感染猪血清特异性识别,因此确定表位117-129aa是PRRSV的优势抗原表位,
王玉娥[6]2003年在《猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白抗原表位的分析》文中指出猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine respiratory and reproductive syndrome virus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。本研究利用噬菌体展示技术，结合ELISA和基因表达等技术对PRRSV结构蛋白的抗原表位进行了鉴定与分析，为PRRSV的结构蛋白免疫特性与功能研究以及表位疫苗的设计等奠定了基础。 1．运用GoldenKey分子生物学软件对PRRSV BJ-4结构蛋白的抗原表位及其二级结构进行了分析和比较，从中筛选13段显示表位特征的氨基酸残基序列，用PCR技术扩增相应的核苷酸片段，将其插入到噬菌体表达载体M13KE，结果预测的13个表位可在噬菌体表面得以展示。 2．利用PRRSV BJ-4阳性血清和鼠源抗重组结构蛋白抗体，采用间接ELISA方法对噬菌体展示的表位进行了鉴定。结果表明，在预测的13个抗原表位中，鉴定出7个表位。GP2a的aa110～aa136(GP2110)可被鼠源抗重组GP2a抗体所识别；GP3的aa81～aa91(GP381)能够被PRRSV阳性血清和鼠源抗重组GP3抗体识别；GP4的aa53～aa67(GP453)和aa107～aa115(GP4107)可被PRRSV阳性血清和鼠源抗GP4抗体识别；GP5的aa30～aa39(GP530)、aa161～aa169(GP5161)和aa190～aa200(GP5190)可被PRRSV阳性血清和鼠源抗重组GP5抗体识别。其中，GP2110、GP453和GP530等3个抗原表位与已报道的抗原表位相似，其余4个抗原表位(GP381、GP4107、GP5161和GP5190)是新确认的PRRSV抗原表位。 3．采用噬菌体随机7肽库对单克隆抗体GE3识别的抗原表位进行了鉴定。从第叁轮亲和筛选的噬菌体中随机挑取17个克隆进行功能鉴定，结果表明8个克隆与mAb GE3具有较强的特异性结合力并可以被PRRSV阳性血清阻断，测序发现7个克隆具有核心序列：P／EKPHF，该序列与PRRSV N蛋白aa50～aa55(P／EKPHF)具有较高的同源性。用PRRSV阳性血清和鼠源抗PRRSV抗体采用间接ELISA进行鉴定，结果表明筛选到的噬菌体克隆可以与血清发生特异性反应，从而初步确定了单克隆抗体GE3所识别的抗原表位。 4．将编码单克隆抗体GE3所识别的抗原表位的核苷酸片段插入到原核表达载体pGEX-4T-2中，实现了GE3所识别的抗原表位在大肠杆菌中的表达。经SDS-PAGE分析表明，表达的GST-融合蛋白与预期大小相符。Western-blot分析表明表达产物与PRRSV阳性血清没有反应性，而ELISA分析表明表达产物可与PRRSV阳性血清和单克隆抗体发生反应。由此说明单克隆抗体GE3所识别的抗原表位可能是存在于N蛋白上以KPHF为核心的构象型表位。
袁庆[7]2015年在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白单克隆抗体制备与抗原表位筛选》文中进行了进一步梳理猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)属于套式病毒目(Nidovirales)动脉炎病毒科(Arteriviridae)动脉炎病毒属(Arterivirus),临床感染主要表现为发热,早产,流产,死胎和木乃伊胎等猪群的繁殖障碍和呼吸道症状。GP4蛋白是病毒粒子囊膜的组成部分,是该病毒的次要结构蛋白之一,是由ORF4基因编码的糖基化蛋白,少量存在病毒粒子中,由183或178个氨基酸残基组成,有4个糖基化位点,GP4能够诱导机体产生中和抗体,而且在细胞受体识别病毒粒子以及在病毒变异等方面具有重要意义。噬菌体展示技术研究抗原表位不仅可以证明抗原分子的具体结构与功能,还可以揭示抗原抗体的反应机制,已广泛用于研发多种多肽疫苗和新型药物。本实验以PRRSV-HUN4株为研究对象,制备了其GP4蛋白单克隆抗体并对其抗原表位进行了筛选和初步研究。本实验以原核表达的PRRSV GP4蛋白为免疫原免疫Balb/C小鼠,通过常规方法进行细胞融合,3轮亚克隆后,成功筛选出1株抗PRRSV GP4蛋白的单克隆抗体,经亚类鉴定为Ig G2b型,该株抗体的稳定性与特异性较好,不仅能够与重组GP4蛋白反应,而且能够与PRRSV有良好的反应性。应用噬菌体随机肽库对制备成功的5F12单抗进行4轮生物淘选,得到10株阳性噬菌体,测序后结果为:10个噬菌体中有4个氨基酸序列相同,其12肽序列分别为AKFEVCSPVVLG、GVNQENMLHFSF、NPRIRLNFIRIG和SGVYKVAYDWQH,命名为phage-Ⅰ-Ⅳ。序列比对发现phage-Ⅰ和Ⅱ的12肽序列分别与PRRSV Hu N4株GP4蛋白第112至123位和第84至95位氨基酸序列具有很高的相似性。噬菌体竞争抑制试验与ELISA方法证实筛选出的亲和噬菌体与PRRSV及其GP4蛋白有很高的反应性,可以用于检测PRRSV及相关表位疫苗的研究,这为PRRSV病毒特性及其临床防治研究奠定理论和实验基础。
王玉娥, 杨汉春, 郭鑫, 陈艳红, 查振林[8]2004年在《用噬菌体随机肽库分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白单克隆抗体识别的表位》文中研究说明利用噬菌体随机7肽库分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白B细胞抗原表位。以PRRSV BJ-4株N蛋白的单克隆抗体(mAb)GE3作为筛选分子,筛选噬菌体展示的随机7肽库。经序列测定和分子生物学软件分析,表明噬菌体展示的外源氨基酸序列与PRRSV BJ-4株N蛋白的50~55 aa的氨基酸序列有极高的同源性。ELISA分析结果表明, 筛选到的噬菌体能特异性地与PRRSV阳性血清结合,从而证实了该表位是单克隆抗体GE3所识别的抗原表位。
王玉娥, 杨汉春, 郭鑫, 查振林, 陈艳红[9]2004年在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5羧基端抗原表位的鉴定》文中进行了进一步梳理为了鉴定和分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5羧基端的抗原表位,采用Goldkey软件分析PRRSVGP5羧基端抗原表位,经人工合成的方法获得编码GP5的部分基因,Eag 酶切后插入经Eag 线性化处理的噬菌体M13KEgIII克隆载体,转化至ER2738细胞,得到多株重组噬菌体,提取噬菌体的ssDNA进行PCR及序列鉴定,获得了展示GP5羧基端11个氨基酸的重组噬菌体,用PRRS阳性血清检测重组噬菌体,结果显示噬菌体展示的表位可被PRRSV感染血清所识别,从而证明GP5羧基末端的11个氨基酸是PRRSV的一个抗原表位。
陶冶[10]2014年在《猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白单克隆抗体制备与抗原表位鉴定》文中指出猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)属于套式病毒目(Nidovirales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动脉炎病毒属(Arterivirus),主要的临床表现为发烧,早产,流产,死胎,木乃伊胎等猪群的繁殖障碍和呼吸道症状。GP3蛋白是病毒粒子囊膜的组成部分,是该病毒的次要结构蛋白之一,是由ORF3基因编码的糖基化糖蛋白,少量存在病毒粒子中,GP3能够诱导机体产生中和抗体,而且在细胞受体识别病毒粒子以及在病毒变异等方面具有重要意义。噬菌体展示技术研究抗原表位不仅可以证明抗原分子的具体结构与功能,还可以揭示抗原抗体的反应机制,并可广泛的用于研发多种多肽疫苗和新型药物。因此,本实验以PRRSV-HH08株为研究对象,制备了GP3蛋白单克隆抗体并对其抗原表位,进行了初步的研究。本实验以原核表达的PRRSV-GP3蛋白为免疫源免疫小鼠,通过常规方法进行细胞融合,3轮亚克隆后,成功筛选出1株抗PRRSV GP3蛋白的单克隆抗体,经亚类鉴定为IgG2a型,该株抗体的稳定性与特异性较好,不仅能够与重组GP3蛋白反应,而且能够与PRRSV有良好的反应性。应用噬菌体随机肽库对制备成功的这株1F7单抗进行4轮生物淘选,得到10株阳性噬菌体,测序后结果为：7个噬菌体序列一致为ATPLSSTTWLWR,这与PRRSV HH08株GP3氨基酸序列64-70位氨基酸有一定的相似度。噬菌体竞争抑制试验与ELISA方法证实筛选出的噬菌体多肽的空间构象和天然抗原表位相似,可以用于检测PRRSV及相关表位疫苗的研究,这对于PRRSV病毒的临床诊断奠定了一定的理论基础。
参考文献：
[1]. 利用噬菌体展示技术鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位[D]. 安同庆. 中国农业科学院. 2004
[2]. 利用噬菌体展示技术鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位[C]. 安同庆, 周艳君, 仇华吉, 王云峰, 童光志. 中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集. 2004
[3]. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白亲和肽筛选与鉴定[D]. 王明翠. 东北农业大学. 2010
[4]. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白结合肽的筛选与鉴定[D]. 刘和. 东北农业大学. 2013
[5]. 猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定[D]. 周艳君. 东北农业大学. 2005
[6]. 猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白抗原表位的分析[D]. 王玉娥. 中国农业大学. 2003
[7]. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白单克隆抗体制备与抗原表位筛选[D]. 袁庆. 东北农业大学. 2015
[8]. 用噬菌体随机肽库分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白单克隆抗体识别的表位[J]. 王玉娥, 杨汉春, 郭鑫, 陈艳红, 查振林. 农业生物技术学报. 2004
[9]. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5羧基端抗原表位的鉴定[J]. 王玉娥, 杨汉春, 郭鑫, 查振林, 陈艳红. 畜牧兽医学报. 2004
[10]. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白单克隆抗体制备与抗原表位鉴定[D]. 陶冶. 东北农业大学. 2014
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