导读:本文包含了钠氢交换子论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:皮肤黑素瘤,痣细胞痣,NHERF1,β-联蛋白
钠氢交换子论文文献综述
张韡[1]（2013）在《钠氢交换子调节因子-1及β-联蛋白在皮肤黑素瘤组织及细胞株中的表达和意义》一文中研究指出皮肤黑素瘤是一种高度恶性的黑素细胞肿瘤,不易受化疗药物的干扰且易发生转移,预后不良。对其发病机制、治疗方法的研究是国内外皮肤肿瘤研究的热点。钠氢交换子调节因子-1(NHERF1)是一种支架蛋白,其在调节离子转运、运输中发挥着重要作用,同时它还与膜-细胞骨架连接蛋白相互作用,可以稳定跨膜蛋白,并参与构成上皮顶端微绒毛结构。它还是一种调节蛋白,能与30余种蛋白质作用并调节其功能。随着近年来研究的深入,有学者发现其在多种肿瘤中发挥着重要作用：其基因的突变或杂合性丢失可导致肿瘤细胞的恶性程度增高。其在正常细胞中通常为胞膜表达,发挥抑癌作用；胞膜不表达或在胞浆及胞核中过表达则提示肿瘤恶性程度增加。然而,尽管越来越多的研究表明其在癌症中发挥着重要的作用,但目前对其在肿瘤、尤其在皮肤恶性黑素瘤中的作用及作用机制仍知之甚少。在进一步的研究中除了不断探索其抗肿瘤的机制,其对肿瘤生物学行为的影响及临床意义将成为研究重点。(1) NHERF1及β-联蛋白在皮肤黑素瘤及痣细胞痣组织中的表达及意义为了探讨NHERF1是否参与了皮肤黑素瘤的发生发展过程,我们收集47例皮肤黑素瘤组织及37例痣细胞痣组织,应用免疫组化方法对NHERF1和β-联蛋白在组织中的表达模式(膜表达、浆表达及核表达)进行检测。结果显示：原位皮肤黑素瘤组织中NHERF1胞浆中等/强阳性表达率为38%；而侵袭性皮肤黑素瘤组织中NHERF1胞浆中等/强阳性表达率为71%,两组相比具有统计学显着性差异。同时,全部皮肤黑素瘤组织中NHERF1胞浆中等/强阳性表达率为60%,而痣细胞痣组织中NHERF1胞浆中等/强阳性表达率为0,有明显统计学差异。原位皮肤黑素瘤组织中可见β-联蛋白胞浆中等/强阳性表达率为50%；而侵袭性皮肤黑素瘤组织中可见β-联蛋白胞浆中等/强阳性表达率为84%。全部皮肤黑素瘤组织中β-联蛋白胞浆中等/强阳性表达率为72%,而在痣细胞痣组织中β-联蛋白胞浆中等/强阳性表达率为30%,两组相比具有统计学显着性差异。NHERF1及β-联蛋白在痣细胞痣、原位黑素瘤及侵袭性黑素瘤组织中的胞浆阳性表达率均随着病变组织的恶性程度增加而升高。为了进一步探讨NHERF1对β-联蛋白及黑素瘤的影响,我们将在实验的第叁部分,利用shRNA干扰技术进行深入的了解。(2) NHERF1及β-联蛋白在黑素瘤细胞株A375,M14,MV3中的表达及意义从第一部分的研究中观察到NHERF1及β-联蛋白在痣细胞痣、原位黑素瘤及侵袭性黑素瘤组织中的异常胞浆阳性表达率随着病变组织的恶性程度增加而升高。为了研究NHERF1及β-联蛋白在黑素瘤细胞株A375,M14,MV3中的表达及意义。培养黑素瘤细胞株A375、M14、MV3及黑素细胞；使用免疫细胞化学法、实时荧光定量-PCR法、免疫印迹法对黑素瘤细胞株A375、M14、MV3及黑素细胞中NHERF1及β-联蛋白的表达情况进行观察；并使用MTT法对黑素瘤细胞株A375、M14、MV3及黑素细胞的增殖情况进行检测。结果发现：NHERF1及β-联蛋白在黑素细胞中同时表现为细胞膜阳性表达,而在黑素瘤细胞株A375, M14, MV3中均出现膜表达的缺失,同时呈现不同程度的细胞浆和/或细胞核阳性表达。在叁株黑素瘤细胞株中,MV3细胞中的NHERF1免疫细胞化学染色仅呈少部分细胞胞质弱阳性表达,实时荧光定量-PCR检测NHERF1的mRNA表达水平最低,免疫印迹法中未见NHERF1蛋白表达条带,而其在MTT法中检测到的的增殖速度最快,明显高于另外两株细胞；A375细胞中的NHERF1免疫细胞化学染色呈细胞浆及细胞核的强阳性表达,实时荧光定量-PCR检测NHERF1的mRNA表达水平最高,免疫印迹法中可见NHERF1蛋白最强阳性表达,而其增殖速度却明显慢于MV3细胞。同时,p-联蛋白在MV3细胞中免疫细胞化学染色呈细胞浆及细胞核的强阳性表达,实时荧光定量-PCR检测的mRNA表达水平最高,免疫印迹法检测到蛋白最强阳性表达；而A375细胞及M14细胞中,p-联蛋白在免疫细胞化学染色呈相对弱的细胞浆阳性表达,实时荧光定量-PCR检测的mRNA表达水平明显较低；免疫印迹法中的蛋白表达较MV3中的表达低。与正常黑素细胞相比,黑素瘤细胞A375, M14, MV3中的NHERF1的mRNA表达水平都呈不同程度升高,而β-联蛋白表达水平(mRNA表达水平及蛋白水平)亦存在不同程度升高,同时,黑素瘤细胞中的NHERF1与p-联蛋白存在着差异性表达,黑素瘤细胞胞浆中的NHERF1表达量可能与细胞的增殖速度相关,NHERF1在黑素瘤细胞中表达程度越低则细胞的增殖可能越快。为了深入探讨NHERF1在黑素瘤细胞中对β-联蛋白及黑素瘤细胞增殖的影响,我们将在实验的第叁部分,利用慢病毒载体shRNA干扰技术进行深入的了解。(3) A375细胞中NHERF1的基因沉默对β-联蛋白的表达及A375细胞增殖、凋亡的影响作用从第二部分的研究中观察到,黑素瘤细胞中的NHERF1与β-联蛋白存在着差异性表达。黑素瘤细胞胞浆中的NHERF1表达量可能与细胞的增殖速度相关,NHERF1在黑素瘤细胞中表达程度越低则细胞的增殖可能越快。因此在本部分实验中,我们设计并合成NHERF1的shRNA干扰片段,并载入pLVX-shRNA-puro载体中,载体转化到Ecoli感受态中。采用PCR及基因测序等方法对重组质粒进行鉴定。慢病毒包装,慢病毒感染靶细胞,多克隆细胞的验证,单克隆筛选稳定干扰NHERF1的A375细胞株,并采用酶切鉴定、基因测序、qPCR和Western blotting对转染效果进行鉴定。使用Western blotting检测稳定干扰NHERF1的A375细胞株中NHERF1及β-联蛋白的蛋白表达量,以对照序列干扰细胞为对照,并使用MTT法检测两种细胞的增殖情况,Annexin-V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果发现设计的shRNA-NHERF1干扰片段载入pLVX-shRNA-puro载体中,并稳定转染A375细胞后,经qPCR和Western blotting检测NHERF1表达明显下降,NHERF1沉默的A375细胞中β-联蛋白较对照细胞中的表达增高,同时A375细胞的增殖速度较对照细胞明显增快。所设计的shRNA-NHERF1干扰片段对A375细胞中NHERF1的表达起到了明显的抑制作用,NHERF1基因沉默导致β-联蛋白的表达增高,细胞增殖加快,细胞凋亡减少。结论在皮肤黑素瘤细胞中NHERF1与β-联蛋白呈差异性表达,并可能通过与β-联蛋白的相互作用而调节β-联蛋白的表达水平,从而影响细胞增殖和凋亡。NHERF1在皮肤黑素瘤组织及细胞中的表达较良性痣细胞痣组织及正常黑素细胞均呈不同程度的异常细胞浆阳性表达模式。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2013-05-01）
李月红,王梅[2]（2010）在《吡格列酮经PPARγ/ERK通路刺激胚胎成纤维细胞钠氢交换子的转运》一文中研究指出目的研究吡格列酮对钠氢离子转运体(NHE1)的转运作用及传导通路,探讨噻唑烷二酮类药物引起水肿的机制。方法野生及PPARγ~(-/-)鼠胚胎成纤维细胞分为:对照组(DMEM培养液),ERK抑制剂(10μmol/L PD98059)组,PPARγ拮抗剂(5μmol/L GW9662)组,基因转录抑制剂(5μmol/LActiomycin D)组。测定各组细胞在0.3μmol/L吡格列酮灌注下NHE1的活性,Western blot法测定ERK磷酸化。结果吡格列酮增加野生鼠NHE1活性48.1%±3.1%,其作用被ERK抑制剂及PPARγ拮抗剂阻止,而不被基因转录抑制剂阻止;吡格列酮刺激野生鼠ERK磷酸化,对PPARγ~(-/-)鼠无此作用。结论吡格列酮经PPARγ/ERK通路,不依赖基因转录,刺激鼠胚胎成纤维细胞NHE1的转运,促进钠潴留。(本文来源于《中国糖尿病杂志》期刊2010年09期）
张敏敏[3]（2008）在《钠—氢交换子1在醛固酮所致大鼠肾小球硬化中的作用及机制探讨》一文中研究指出第一部分钠氢交换子1在醛固酮所致大鼠肾小球硬化中的作用体内研究目的:近年来研究发现,醛固酮与脏器纤维化等病变密切相关,并且可作为一个独立的致病因素直接参与纤维化过程。钠氢交换子1(NHE1)是一种糖蛋白,除了调节酸碱平衡、稳定细胞内pH的作用外,目前有研究发现NHE1还能对细胞周期进行调节,NHE1也被证实参与了肾脏纤维化的发生,但是在肾脏纤维化过程中醛固酮的致纤维化作用是否与NHE1有关尚不清楚。为了证实NHE1在醛固酮所致大鼠。肾小球硬化中的作用,我们在本部分的研究中拟通过体内实验证明大鼠肾小球也是醛固酮作用的靶目标,并在体内环境直接探讨醛固酮是否参与慢性肾小球损伤的发展以及NHE1在其中的作用和相关机制。(一)MR和11β—HSD2在大鼠肾小球中的表达方法:用正常SD大鼠的肾脏分别制备石蜡和冰冻切片,并用筛网法提取肾小球蛋白,同时分别提取肾脏皮质和髓质蛋白。选择醛固酮作用的特异性受体MR和保证醛固酮和其受体特异性结合的酶11β—HSD2作为局部醛固酮系统存在的关键指标,分别用免疫组化、免疫荧光和Western blot检测上述指标在肾脏的分布区域和表达量。结果:1.免疫组化结果显示阳性11β—HSD2表达在肾皮质的远曲小管和集合管,染色阳性细胞在上皮细胞的胞核和胞浆中都有大量分布,但是在肾小球和近曲小管也可见到少量表达,高倍镜下可见在肾小球中的阳性部位主要位于肾小球系膜区和近曲小管的胞浆;采用免疫荧光的方法,发现11β—HSD2主要表达在肾脏的远曲小管和集合管上皮细胞,在肾小球也有少量表达;2.免疫组化结果显示阳性MR表达在肾皮质的远曲小管和集合管,染色阳性细胞在上皮细胞的胞核和胞浆中都有大量表达,但是在肾皮质的肾小球和近曲小管也可见到少量表达;采用免疫荧光的方法,用绿色荧光FITC标记,发现MR主要表达在。肾脏的远曲小管和集合管上皮细胞,在肾小球的系膜区也有少量表达;3.采用免疫荧光的方法,用绿色荧光FITC标记,发现11β—HSD2和MR主要表达在肾脏的远曲小管和集合管上皮细胞,在肾小球的系膜区也有少量表达;4.Western blot检测发现,MR在髓质中表达量最高,在皮质中由于有大量肾小管的存在,也有所表达,我们发现新鲜肾脏获得的肾小球蛋白中能检测到MR的少量表达。结论:在本部分的研究中,我们在体内证实大鼠肾小球内存在MR和11β—HSD2的阳性表达,大鼠肾小球也是醛固酮体内作用的靶目标。(二)钠氢交换子1在醛固酮所致大鼠肾小球硬化中的作用体内研究方法:用体重180—200g雄性SD大鼠建立5/6肾大部切除模型,实验分组如下:(1)假手术组(SHAM组);(2)5/6肾切组(SNX组);(3)SNX+醛固酮组(ALDO组);(4)ALDO+NHE1抑制剂DMA组(DMA组),成模后12周处死大鼠,进行常规血、尿生化检测及尾动脉收缩压测定,PAS和Masson染色观察大鼠肾小球硬化和肾小管间质纤维化程度;免疫组化和Western blot检测各组大鼠肾组织的FN、TGF—β1和PCNA的表达情况。结果:1.成模后12周,5/6肾大部切除大鼠均出现明显的高血压,蛋白尿和肾功能严重损害。和SNX组相比,ALDO组的血压(mmHg)升高更显着(ALDO∶224±9.4 vs.SNX∶194±6.36,p＜0.01),蛋白尿(mg/24h)(ALDO∶237.93±10.06 vs.SNX∶82.76±4.65,p＜0.01)和肾功能损害(血清肌酐值:μmol/L)(ALDO∶123.57±11.12 vs.SNX∶85.5±4.96)更严重,DMA组大鼠比ALDO组大鼠蛋白尿有明显减轻(DMA∶163.73±10.15 vs.ALDO∶237.93±10.06,p＜0.01),但是对高血压和肾功能损害并没有明显的改善作用;2.PAS染色显示,除SHAM组外的四个实验组大鼠肾小球均呈局灶节段性硬化甚至全小球硬化,其中以ALDO组最为显着;与ALDO相比,DMA组的肾小球增殖和硬化程度明显减轻(DMA∶3.1±0.176 vs.ALDO∶3.35±0.15,p＜0.01)。Masson染色显示与SHAM组相比,手术实验组均有明显的的肾小管间质纤维化,伴小箭扩张和蛋白管型。ALDO组和SNX组相比,大鼠的间质纤维化程度明显加重(ALDO∶2.225±0.117 vs.SNX∶1.9±0.085,p＜0.05),DMA对ALDO所致间质纤维化和蛋白管型没有明显改善作用;3.免疫组化指数评分结果表明,FN在肾大部切除大鼠肾小球和小管间质内均有大量表达,表达水平均显着高于SHAM组。ALDO组和DMA组FN表达明显高于SNX组(ALDO∶0.733±0.04,DMA∶0.725±0.062 vs.SNX∶0.617±0.047,p＜0.01),但是这两组之间没有明显差异;4.免疫组化和Western blot结果均提示各组大鼠肾组织TGF-β1表达水平显着高于SHAM组,免疫组化指数的评分结果表明,ALDO组TGF-β1表达水平高于SNX组,但是无明显统计学差异(ALDO∶0.73±0.024 vs.SNX∶0.69±0.03,p＞0.05),和ALDO组相比,DMA组的TGF-β1表达有所下降(DMA∶0.64±0.047 vs.ALDO∶0.73±0.024,p＜0.01)。Western blot结果提示ALDO组TGFβ1蛋白水平比SNX组进一步升高(ALDO∶431.33±19.04 vs.SNX∶207.83±9.61,p＜0.01)。和ALDO组相比,DMA组的TGF-β1表达有所下降(DMA∶0.64±0.047 vs.ALDO∶0.73±0.024,p＜0.05);5.免疫组化和Western blot结果均提示,肾大部切除后PCNA表达明显高于SHAM组,其中ALDO组表达最高,DMA组的PCNA表达和ALDO组相比有所下降。结论:我们的体内研究结果提示,NHE1介导了醛固酮所致大鼠肾小球硬化的作用,而且不依赖于血流动力学作用。其抑制剂DMA能显着改善5/6肾大切动物模型的肾小球硬化,其机理可能是通过抑制细胞外基质的积聚以及肾小球系膜细胞的增殖。第二部分醛固酮通过钠氢交换子1诱导肾小球系膜细胞外基质增生的作用探讨目的:我们在前面第一部分的体内研究中已经发现,NHE1介导了醛固酮所致大鼠肾小球硬化的作用,而且不依赖于血流动力学作用。其抑制剂DMA能显着改善5/6肾大切动物模型的肾小球硬化,且其机理可能是通过抑制系膜细胞外基质的积聚以及系膜细胞的增殖。由于体内环境比较复杂,为了排除众多体内因素的干扰,我们在本部分的研究中,选择与肾小球硬化细胞外基质分泌密切有关的重要固有细胞——系膜细胞,旨在探讨在肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)上醛固酮是否能够激活NHE1,以及是否能通过NHE1诱导肾小球系膜细胞外基质增生。从而进一步在体外实验中证实NHE1介导了醛固酮所致大鼠肾小球硬化的作用。方法:体外培养大鼠系膜细胞(MC),并进行如下分组:对照组(普通培养液),醛固酮组(10~(-7)mol/L)(Aldo),醛固酮+安体舒通(10~(-9)mol/L)组(Aldo+Spir),醛固酮+NHE1抑制剂Dimethylamiloride(DMA,25μmol/L)组(Aldo+DMA)。24小时后收集培养上清液和各组细胞,抽提总RNA。用酸负荷后钠依赖的pHi(细胞内pH值)的变化来检测NHE1活性,同时采用Real-time PCR检测NHE1基因表达,采用流式细胞术和Western blot检测NHE1蛋白表达;采用ELISA方法检测细胞外基质成分纤连蛋白FN的蛋白表达。结果:1.与对照组相比,醛固酮组肾小球系膜细胞NHE1的活性(△pHi/100S)与对照组相比显着增高(Cont 4.48±0.25%vs.Aldo 5.29±0.11%,p＜0.05),加入安体舒通和DMA后活性均有所降低(Aldo+Spir 4.92±0.35%,Aldo+DMA 4.07±0.23%,vs.Aldo 5.29±0.11%,p＜0.05);2.Real-time PCR结果显示Aldo组NHE1 mRNA水平有所增高,是对照组的1.16倍(p＜0.05),而Aldo+Spir组NHE1的mRNA水平明显下降,是Aldo组的81.9%(p＜0.05),安体舒通本身对NHE1的基因表达没有影响;3.Western blot结果显示Aldo组NHE1蛋白水平显着增高(Cont 401.74±17.96;vs.Aldo 535.84+8.67,p＜0.01),而Aldo+Spir组NHE1蛋白水平明显下降(Aldo535.84±8.67 vs.Aldo+Spir 457.64±11.27,p＜0.05),安体舒通本身对NHE1的蛋白表达没有影响。流式细胞术检测结果与Western blot相似;4.ELISA方法检测纤连蛋白(Fibronectin,FN)的水平,结果显示Aldo组FN水平有所增高(Cont 17.84±3.77 vs.Aldo 51.66±1.40,p＜0.01);和Aldo组相比,Aldo+Spir组和Aldo+DMA组FN水平(ng/ml)有所下降(Aldo+Spir 29.60±1.99,Aldo+DMA 25.75±4.66,vs.Aldo 51.66±1.40,p＜0.01)。结论:醛固酮能够刺激肾小球系膜细胞分泌细胞外基质,其作用可能是由于醛固酮激活系膜细胞NHE1活性、上调其基因和蛋白表达所致。第叁部分ERK1/2通路介导钠氢交换子1在醛固酮诱导大鼠肾小球系膜细胞外基质增生中的作用目的:在第二部分的研究中,我们的结果提示醛固酮能够刺激肾小球系膜细胞分泌细胞外基质,其作用可能是由于醛固酮激活系膜细胞NHE1活性、上调其基因和蛋白表达所致。而ERK1/2通路在肾小球系膜细胞的细胞外基质积聚的过程中又发挥了极为重要的作用。因此本部分研究拟通过构建NHE1的短发夹状RNA抑制NHE1表达,从而探讨ERK1/2通路是否介导了醛固酮通过NHE1致大鼠系膜细胞外基质增生的作用。方法:构建靶向NHE1的短发夹状双链RNA的真核表达质粒(shRNA-NHE1)并将该质粒转染体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,分别于转染后1天、3天、4天采用荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot法从mRNA和蛋白水平观察对NHE1的抑制作用。转染4天成功抑制NHE1的表达后,实验分组如下:(1)对照组:只加入培养液;(2)醛固酮组:培养液中加入醛固酮10~(-7)mol/L;(3)醛固酮+shRNA—NHE1组:shRNA-NHE1质粒DNA转染96小时后加入醛固酮10~(-7)mol/L;(4)醛固酮+安体舒通组:用安体舒通10~(-9)mol/L先孵育3小时后加用醛固酮10~(-7)mol/L;(5)醛固酮+PD98059(ERK1/2拮抗剂)组:同时加入醛固酮10~(-7)mol/L和25μM PD98059。干预24h后,分别提取各组细胞蛋白以及上清液,用于NHE1,ERK1/2和phosphor—ERK1/2的Western blot检测以及ELISA方法检测培养上清液中细胞外基质成分纤连蛋白的表达。结果:1.Real-time PCR结果显示转染后24小时shRNA-NHE1组NHE1的mRNA表达即开始下降36.9%,转染3天、4天后NHE1的基因表达可进一步降低,分别下降69.2%和77.9%;2.Western blot显示转染后24小时NHE1的蛋白表达无明显变化(Control426.56±12.17,Negative 434.9±23.91 vs.1day 368.47±13.7,p＞0.05);3天后蛋白水平显着下降(negative 434.9±23.91 vs.3day 260.59±12.04,p＜0.01),4天后抑制作用更明显(negative 434.9±23.91 vs.4day 107.585±7.66,p＜0.01);3.ELISA方法显示在无该质粒转染的系膜细胞中,醛固酮刺激后可导致上清液中FN水平明显升高,而当细胞转染shRNA-NHE1质粒,醛固酮的上述作用被明显抑制(Control 17.74±1.38ng/ml,Aldo+shRNA-Negative 51.78±1.15ng/ml Vs.Aldo+shRNA-NHE 128.07±1.73ng/ml,p＜0.01);安体舒通或PD98059干预24h后也可拮抗醛固酮刺激所刺激的FN增生的作用(Aldo+Spir 29.60±1.99ng/ml,Aldo+PD98059 29.82±1.39 ng/ml,vs.Aldo+shRNA-Negative 51.78±1.15ng/ml,p＜0.01);4.Western blot结果发现醛固酮刺激24h后系膜细胞NHE1的表达增强(Control139.31±9.95 vs.Aldo 351.4±42.16,P＜0.01)可以被PD98059所抑制(Aldo351.4±42.16,vs.Aldo+PD98059 225.68±21.13,p＜0.05);相反,醛固酮作用24h后,大鼠系膜细胞磷酸化ERK1/2的水平明显增高(Control 280.52±33.46vs.Aldo 513.22±24.77,p＜0.01),且醛固酮对ERK1/2磷酸化的激活作用在转染shRNA—NHE1成功抑制NHE1表达后依然存在(Aldo 513.22±24.77 vs.Aldo±shRNA-NHE1 462±24.34,p＞0.05)。结论:通过构建靶向NHE1的shRNA真核表达载体导入细胞可以特异性抑制大鼠肾小球系膜细胞NHE1的表达,同时显着抑制醛固酮引起的细胞外基质增生,且该作用可能是通过ERK1/2通路的激活所导致,因此我们认为ERK1/2通路介导了醛固酮通过NHE1致大鼠系膜细胞外基质增生的作用。(本文来源于《复旦大学》期刊2008-04-18）
张敏敏,尤莉,杨海春,朱蔚钰,陈靖[4]（2007）在《醛固酮可通过钠氢交换子1诱导肾小球系膜细胞外基质成分增生》一文中研究指出【目的】本研究的目的是探讨在肾小球系膜细胞上醛固酮是否能够激活 NHE1,以及是否能通过 NHE1 诱导肾小球系膜细胞外基质增生,通过构建 NHE1的短发夹状 RNA 抑制 NHE1表达,进一步明确 NHE1是(本文来源于《2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编》期刊2007-05-01）
张敏敏,顾勇,赖凌云,陈靖,杨海春[5]（2006）在《醛固酮可通过钠氢交换子1诱导肾小球系膜细胞外基质增生》一文中研究指出目的探讨醛固酮能否在肾小球系膜细胞(GMC)激活钠氢交换子1(NHE1),以及能否通过NHE1诱导GMC细胞外基质增生。方法体外培养大鼠GMC,并按如下分组:对照组(Con,普通培养液);醛固酮组(Aldo,10-7mol／L);醛固酮+安体舒通组(Aldo+Spir 10-9 mol／L);醛固酮+NHE1抑制剂DMA组(Aldo+DMA 25μmol／L)。24 h后收集培养上清液和各组细胞,抽提总RNA。用酸负荷后钠依赖的pHi(细胞内pH值)的变化来检测NHE1活性,同时采用实时PCR以及流式细胞术检测NHE1基因和蛋白的表达。采用实时PCR和ELISA方法检测纤连蛋白(FN)基因和蛋白的表达。结果与对照组比较,Aldo组肾小球系膜细胞NHE1的活性(△pHi／100S)显着增高[Con(4．48±0．25)％,Aldo(5．29±0．11)％,P<0．05]。加入安体舒通和DMA后,上述NHE1活性均有所降低[Aldo+Spir(4．92±0．35)％,Aldo+DMA(4．07±0．23)％,与Aldo组比较,P<0．05]。实时PCR结果显示Aldo组NHE1 mRNA水平有所增高,是对照组的1．16倍(P<0．05),而Aldo+Spir组NHE1 mRNA水平明显下降,是Aldo组的81．9％(P<0．05)。流式细胞术结果显示Aldo组NHE1蛋白水平显着增高,是对照组的2．9倍(P<0．01),而Aldo+Spir组NHE1蛋白水平明显下降,仅为Aldo组的52．3％(P<0．05),安体舒通本身对NHE1的基因和蛋白表达没有显着影响。实时PCR结果显示Aldo组FN mRNA水平有所增高,是对照组的1．03倍(P<0．05); Aldo+Spir组和Aldo+DMA组FN mRNA水平有所下降,分别是Aldo组的91．21％(P<0．01)和92．30％(P<0．01)。ELISA结果显示培养上清液中分泌的FN(ng／ml)也表现为相同的趋势[Con(17．84±3．77),Aldo(51．66±1．40),P<0．01;Aldo+Spir(29．60±1．99),Aldo+DMA(25．75±4．66),与Aldo组比较,P<0．01]。结论醛固酮能够刺激肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分FN,其作用可能是由于醛固酮激活系膜细胞NHE1活性、上调其基因和蛋白表达所致。(本文来源于《中华肾脏病杂志》期刊2006年08期）
张敏敏,陈靖,顾勇[6]（2006）在《钠氢交换子1在醛固酮导致脏器纤维化中的可能作用》一文中研究指出研究表明醛固酮和脏器纤维化关系密切,而Na+/H+交换子1(NHE1)可能也参与了脏器纤维化的发生,本文就NHE的结构和活性调节、醛固酮的合成和作用机制以及NHE1在醛固酮导致脏器纤维化中可能起到的作用作一综述。(本文来源于《国际泌尿系统杂志》期刊2006年04期）
钠氢交换子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究吡格列酮对钠氢离子转运体(NHE1)的转运作用及传导通路,探讨噻唑烷二酮类药物引起水肿的机制。方法野生及PPARγ~(-/-)鼠胚胎成纤维细胞分为:对照组(DMEM培养液),ERK抑制剂(10μmol/L PD98059)组,PPARγ拮抗剂(5μmol/L GW9662)组,基因转录抑制剂(5μmol/LActiomycin D)组。测定各组细胞在0.3μmol/L吡格列酮灌注下NHE1的活性,Western blot法测定ERK磷酸化。结果吡格列酮增加野生鼠NHE1活性48.1%±3.1%,其作用被ERK抑制剂及PPARγ拮抗剂阻止,而不被基因转录抑制剂阻止;吡格列酮刺激野生鼠ERK磷酸化,对PPARγ~(-/-)鼠无此作用。结论吡格列酮经PPARγ/ERK通路,不依赖基因转录,刺激鼠胚胎成纤维细胞NHE1的转运,促进钠潴留。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
钠氢交换子论文参考文献
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