一株产酸性蛋白酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化

论文摘要

化肥过度使用导致比较严重的耕地退化问题,极大影响了作物的产量与品质。本研究筛选产酸性蛋白酶菌株,结合现代发酵技术,尝试开发一种新型氨基酸生物有机肥。首先利用透明水解圈法和福林酚法,从鱼粉水解液中筛选得到一株产酸性蛋白酶菌株Zju-c,对其进行形态学观察及26S rRNA分子鉴定,并对鱼粉菌解条件和培养基成分进行部分优化。经生理生化分析发现,该菌株可直接利用大多数糖及少部分醇,能水解酪素、淀粉、明胶以及酒石酸盐,生长速度较快,可耐受13%NaCl;通过BLAST比对,确定为毕赤酵母属Pichia galeiformis （GenBank No. JF781422.1）。最佳发酵培养基成分为300 g/L鱼粉、50 g/L葡萄糖、30 g/L大豆蛋白胨、30 g/L NaCl和0.9 mg/mL Mg2+。在30℃、起始pH 5、3%接种量以及180 r/min的优化发酵条件下振荡培养7 d,以游离氨基酸含量和酶活为发酵水平衡量指标,发酵液中氨基酸含量由最初的29.4±2.1 mg/mL提高至88.4±1.4 mg/mL,酶活由190.2±2.9 U/mL提高到400.1±3.8 U/mL。上述研究结果提示,该菌株在利用发酵鱼粉研制液体生物有机肥中具有较好的应用价值。

论文目录

1 材料与方法

1.1 菌株来源

1.2 培养基

1.3 主要试剂

1.4 26S rRNA引物

1.5 产酸性蛋白酶菌株筛选

1.6 阳性菌株的分离纯化

1.7 发酵菌株Zju-c鉴定

1.7.1 菌落和个体形态学观察

1.7.2 生理生化分析

1.7.3 分子生物学鉴定

1.8 Zju-c菌株生长曲线绘制

1.9 Zju-c菌株盐度耐受性检测分析

1.1 0 Zju-c菌株温度耐受性检测分析

1.1 1 Zju-c菌株产酶曲线绘制

1.1 2 Zju-c菌株培养及发酵条件优化

1.1 2. 1 发酵时间对菌解鱼粉发酵效果的影响

1.1 2. 2 温度对菌解鱼粉发酵效果的影响

1.1 2. 3 初始pH值对菌解鱼粉发酵效果的影响

1.1 2. 4 接种量对菌解鱼粉发酵效果的影响

1.1 2. 5 碳源对菌解鱼粉发酵效果的影响

1.1 2. 6 氮源对菌解发酵效果的影响

1.1 2. 7 盐度对菌解鱼粉发酵效果的影响

1.1 2. 8 不同金属离子对菌解鱼粉发酵效果的影响

1.1 3 数据处理

2 结果与分析

2.1 产酸性蛋白酶菌株筛选

2.2 Zju-c菌株形态学观察

2.3 Zju-c菌株生理生化分析

2.4 Zju-c菌株分子生物学鉴定

2.5 Zju-c菌株生长曲线绘制

2.6 Zju-c菌株盐度耐受曲线

2.7 Zju-c菌株生长温度曲线

2.8 Zju-c菌株产酶曲线

2.9 Zju-c菌株的鱼粉菌解优化实验

2.9.1 亮氨酸标准曲线

2.9.2 发酵时间对菌解鱼粉发酵效果的影响

2.9.3 温度对菌解鱼粉发酵效果的影响

2.9.4 初始pH值对菌解鱼粉效果的影响

2.9.5 接种量对菌解鱼粉发酵效果的影响

2.9.6 碳源对菌解鱼粉效果的影响

2.9.7 氮源对菌解效果的影响

2.9.8 盐度对菌解效果的影响

2.9.9 不同金属离子对菌解效果的影响

2.9.1 0 优化前后发酵液组分分析

3 讨论

4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 杨城,姚善泾,杨志坚,肖金星,郑刚

关键词: 酸性蛋白酶,分离鉴定,毕赤酵母属,发酵,生物有机肥

来源: 农业生物技术学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 浙江大学舟山海洋研究中心,浙江大学化学工程与生物工程学院,浙江大学生命科学学院

基金: 舟山市科技计划项目(No.2017c21032和No.2017c22230),浙江省公益性项目(No.2015c33219)

分类号: TQ925.2

页码: 371-380

总页数: 10

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