导读:本文包含了晚期基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:晚期,病毒,基因,禽类,转染,多核,荧光。
晚期基因论文文献综述
汪萍,宛传丹,赵一琳,崔燕红,宫磊[1]（2019）在《HPV-18型晚期基因L1在宫颈脱落细胞中的表达与突变研究》一文中研究指出目的:研究人乳头瘤病毒HPV-18型晚期基因L1在不同宫颈上皮病变患者脱落细胞中表达分布与基因突变特征。方法:收集单纯感染人乳头瘤病毒HPV-18型宫颈上皮病变组织脱落细胞,免疫细胞化学分析其中L1基因的蛋白表达情况。提取总DNA,特异性引物针对HPV-18 L1基因进行PCR扩增检测,所得产物进行Sanger基因测序分析。结果:HPV-18 L1基因在宫颈炎、CINⅠ+Ⅱ级、CINⅢ级和宫颈癌组织中蛋白表达阳性率分别为100%、81.8%、34.6%和12.2%。在不同病理分级宫颈上皮病变患者脱落细胞标本中,HPV-18 L1蛋白表达阳性率差异有统计学意义(P<0.01)。Sanger法基因测序显示L1基因序列存在突变,突变率9.2%,共发现11类核苷酸变异,其中4类属错义突变。结论:HPV-18型晚期基因L1蛋白表达量与宫颈组织病理病变严重程度呈负相关趋势。HPV-18 L1基因突变较为突出,存在地区流行型突变株。L1基因突变与宫颈恶性病变程度可能存在一定关系。(本文来源于《皖南医学院学报》期刊2019年04期）
罗婧,郭军红[2]（2019）在《缺血预处理对神经保护作用的晚期基因管理机制研究进展》一文中研究指出缺血预处理(IPC)神经保护作用的神经化学基础较复杂,其过程包括:早期干预(磷酸化靶点、转运蛋白调节、干扰RNA)和晚期基因调控(低氧诱导转录因子、促红细胞生成素、血管内皮生长因子和诱导型一氧化氮合酶靶基因的调节)等。综述晚期基因管理机制的研究进展,深入了解其机制和开展新的研究,对缺血性脑卒中病人的治疗等方面提供重要的理论基础和临床价值。(本文来源于《中西医结合心脑血管病杂志》期刊2019年09期）
夏小帅[3]（2018）在《禽类多瘤病毒APV-1晚期基因agno-1a的突变体构建和表达》一文中研究指出本研究通过设计和构建基因组结构与野生型APV-1病毒相同,但在APV-1晚期基因agno-1a翻译起始ATG有突变的新型重组病毒,来研究APV-1晚期基因agno-1a对该病毒晚期多顺反子翻译起始调控的机制。首先大量提取APV-1的cDNA病毒克隆pHL1003质粒DNA,用限制性内切酶AccI(部分酶切)和EcoRI(完全酶切)对质粒pHL1003进行分步酶切,得到pHL1003载体大片段。通过PCR的方法用含起始密码ATG点突变(ACG或CTG)的设计引物扩增目的小片段并用限制性内切酶AccI和EcoRI进行双酶切,然后连入pUC19载体中,以此准确获取含ACG或CTG的目的小片段。最后,用T4连接酶将突变目的小片段与pHL1003载体大片段相连接,构建能进行真核表达的重组cDNA病毒载体。将构建的含ATG突变的cDNA病毒载体质粒转染到鸡胚成纤维细胞后,用Western blot来检测重组病毒基因的蛋白表达变化。用限制性内切酶NdeI和NarI对质粒pHL1003-GFP和pHL1003突变体分别进行双酶切,获得所需要的载体大片段和目的小片段。再将突变目的片段(ATG→CTG;ATG→ACG)与pHL1003-GFP载体片段分别相连构建含报告基因EGFP的表达载体(即用GFP基因替代VPs基因)。通过转染鹌鹑胚成纤维细胞后使用荧光显微镜观察荧光表达量。结果表明,质粒pHL1003表达了VP1/2和Agno-1a叁种蛋白,VP1为最大量的蛋白;质粒pHL1003-CTG也表达了Agno-1a和VP1蛋白,但VP1的数量和比例要比Agno-1a蛋白的表达量要少很多。叁种APV-1 cDNA-GFP表达质粒转染鹌鹑纤维细胞后,pHL1003-GFP转染的细胞内荧光蛋白量较多。而质粒pHL1003-GFP-CTG和pHL1003-GFP-ACG转染鹌鹑胚纤维细胞后,细胞内荧光蛋白的表达量比pHL1003-GFP转染细胞的表达荧光蛋白量要少的多。因此,在APV-1晚期基因中agno-1a ATG突变明显影响着下游基因的翻译表达。这暗示了Agno-1a蛋白作为病毒晚期多顺反子基因的前导蛋白可能对其下游基因(GFP或VPs)的翻译表达起关键的调控作用。(本文来源于《中南民族大学》期刊2018-03-01）
杨一帆[4]（2017）在《七成卵巢癌发现均为晚期 基因检测可减少发病风险》一文中研究指出编者按卵巢癌是复发率和死亡率最高的妇科恶性肿瘤，严重威胁着女性健康和生命。近日，“中国首个卵巢癌认知及患者生存现状调研结果”显示，70%的卵巢癌患者初诊时已是晚期，卵巢癌复发率高达70%，致使50%~60%的患者在五年内死亡。专家指出，卵巢癌早(本文来源于《中国妇女报》期刊2017-07-03）
刘琳[5]（2016）在《禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的初步研究》一文中研究指出为了研究禽类多瘤病毒(Avian polyomavirus,APV)晚期基因多顺反子翻译起始调控机制,Agno-1a前导蛋白对下游VPs蛋白合成的调控机制的影响作用。设计构建一系列新型cDNA重组病毒,在agno-1a mRNA编码序列的ATG区域,设计插入一个和插入两个含有ATG的最佳翻译起始信号的7个氨基酸in-frame片段。在agno-1a编码mRNA序列的ATG区域,设计PCR点突变,使起始密码子ATG变成ACG或CTG,从而关闭agno-1a的翻译并可能改变关键mRNA二级结构,形成ATG突变型重组克隆。片段插入型克隆:SDS碱裂解法,提取APV cDNA克隆pHL1003质粒DNA,用限制性内切酶Acc I部分酶切,得到回收的载体片段,人工合成的27bp DNA并磷酸化的目的片段,经T4连接酶与载体片段连接,筛选阳性重组质粒,通过测序验证,得到片段插入型cDNA克隆pHL1003+1、pHL1003+2。点突变型克隆:用限制性内切酶Nco I完全酶切和Acc I部分酶切pHL1003质粒DNA,得到载体片段,设计PCR点突变起始密码子ATG变为ACG和CTG的目的片段,与载体片段连接,筛选阳性克隆测序验证。设计构建GFP为下游报告基因荧光标记的APV-1晚期基因真核双顺反子表达载体,以EGFP报告基因替代野生型病毒APV-1编码晚期结构蛋白VPs基因的碱基序列。pHL1003质粒DNA为模板,PCR扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期agno-1a区序列,作为载体片段,载体片段黏性末端补齐平末端连接后,得到重组质粒pHL1003-1(可作为Agno-1a蛋白表达质粒)。质粒DNA pEGFP-N1为模板,PCR扩增出编码绿色荧光蛋白的EGFP片段,作为目的片段与上述载体片段经T4连接酶连接,构成重组质粒pHL1003-GFP,测序验证。用限制性内切酶NruI和NedI双酶切pHL1003+1、pHL1003+2和pHL1003-GFP,得到目的片段和载体片段连接,构建pHL1003+1-GFP,pHL1003+2-GFP克隆。通过磷酸钙和脂质体的转染方法,将构建成功的cDNA突变型质粒DNA,分别定量转染到鸡胚和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,分别利用Western blot和荧光显微镜观察检验。Western blot结果显示出部分特异性条带,荧光显微镜观察转染72 h后的鸡胚和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光。结果表明,GFP荧光标记的APV-1真核双顺反子cDNA表达载体在鸡胚和鹌鹑胚胎成纤维细胞中正常表达了GFP蛋白并产生荧光。转染实验过程中,对转染过程的时间,转染质粒DNA的用量和转染过程中培养基pH等方面条件不断优化,提高了转染效率。根据不同质粒DNA组合转染不同染禽类胚胎原代细胞及其荧光表达量的差异的结果分析提示,在APV晚期基因多顺反子上游基因插入额外起始密码ATG会影响下游顺反子的翻译;Agno-1a蛋白对其下游基因翻译起始起重要的正调控作用。(本文来源于《中南民族大学》期刊2016-06-01）
周新宇[6]（2016）在《AcMNPV中LEF-10过量表达与聚集对病毒晚期基因表达的影响》一文中研究指出lef-10基因作为苜蓿银纹夜蛾多核型多角体病毒(AcMNPV)的必需基因,其主要参与了病毒DNA的复制和晚期基因表达,属于晚期表达因子。在之前的研究中发现,LEF-10在大肠杆菌中能够形成高分子量的复合体并且这种复合体的存在是极其稳定的,而我们在Sf9细胞中也同样观察到了LEF-10在细胞质中形成的聚集体,这种聚集体对病毒的复制以及晚期基因的表达产生的影响,将是本实验研究的重点。本实验以p10启动子控制的mCherry作为报告基因,对宿主细胞中LEF-10的表达和分布情况以及mCherry的表达水平进行分析。实验发现当LEF-10均匀分布于细胞核中时,能够正常发挥其功能,使得极晚期基因正常表达,一旦LEF-10在细胞质中发生聚集,其不能进入到细胞核中,导致宿主细胞核中的LEF-10减少,不足以支撑某些晚期基因与极晚期基因的转录活动,从而使得极晚期启动子p10启动的mCherry表达量下降。我们根据这一结论,建立了LEF-10聚集对基因表达影响的模型。同时,我们发现LEF-101-65在自身启动子下表达量要稍低于野生型,它只能恢复全长LEF-10的部分功能。而为了进一步确定LEF-10的过量表达对LEF-10的聚集以及晚期基因表达的影响,我们根据截短型LEF-101-65的功能与野生型LEF-10相当,但不易在细胞中发生聚集的特点,分别构建了p10启动子下LEF-10和LEF-101-65过量表达的重组杆状病毒,在感染Sf9细胞后,对宿主细胞中LEF-10以及LEF-101-65的表达情况进行了分析并检测了某些晚期基因的表达水平,由于LEF-101-65在自身启动子下表达量要稍低于野生型,它只能恢复全长LEF-10的部分功能,发现由p10启动子启动的LEF-10的表达量要明显低于LEF-101-65的表达量,表明LEF-10的过量表达会导致极晚期基因p10的表达量下降。我们认为在LEF-10过量表达时,大量LEF-10在细胞质中发生聚集,病毒晚期基因以及极晚期基因的表达水平降低;而在LEF-101-65过量表达的宿主细胞中,则不会发生LEF-101-65的大量聚集,使得晚期基因以及极晚期基因的表达不受影响。为了验证这一观点,我们选取了五种晚期表达基因pp78/83,vp39,sod,odv-e56,vp-80并检测了其表达水平,进一步证实了上述观点。本实验通过构建LEF-10正常表达以及过量表达的重组病毒,验证了LEF-10在Sf9细胞中的聚集对晚期基因表达的影响,并由此构建了LEF-10的聚集与其功能的关系模型,为进一步研究LEF-10的功能奠定了基础,也为其他能形成复合物的蛋白的研究提供了新途径。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-05-01）
李劲,刘琳[7]（2016）在《禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达》一文中研究指出为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态.以APV-1的c DNA克隆(p HL1003)为模板,运用PCR技术扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期Agno-1a区序列作为载体片段;从质粒p EGFP-N1中扩增出编码绿色荧光的EGFP DNA片段;经连接构成重组质粒p HL1003-GFP,通过脂质体细胞转染方法将质粒DNA转染到鸡胚胎和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,通过细胞培养观察荧光表达状况.DNA序列分析证实了重组克隆中的EGFP序列与已知的质粒p EGFP-N1中EGFP序列一致.转染72 h后观察鸡和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光,说明GFP可以在构建的双顺反子重组质粒的下游中正常表达并产生荧光.p HL1003-GFP重组质粒的构建及其在禽类原代成纤维细胞中的高效表达,为我们研究多顺反子翻译起始调控中Agno-1a基因的表达对下游病毒结构蛋白基因的翻译调控机制提供了简洁易用的系统和模型.(本文来源于《中南民族大学学报(自然科学版)》期刊2016年01期）
王姗姗[8]（2013）在《AcMNPV RNA聚合酶基因敲除对病毒复制和晚期基因表达的影响》一文中研究指出杆状病毒是一类有囊膜包被的双链环状DNA病毒。其基因表达具有时序性,按照转录先后分为早期、晚期和极晚期表达。瞬时表达实验结果显示,杆状病毒早期基因表达依赖宿主RNA聚合酶；晚期表达依赖病毒自身编码的RNA聚合酶。病毒RNA聚合酶由LEF4、LEF8、LEF9和P47四个亚基组成。本文研究了病毒RNA聚合酶亚基基因缺失对杆状病毒复制和晚期基因表达的影响。1.利用λ-Red同源重组系统从苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedro virus)基因组分别敲除lef4、lef8、lef9和p47基因,再借助Bac-to-Bac系统,分别在突变体和野生型bacmid中插入增强型绿色荧光蛋白基因egfp构建对应的单个基因缺失和野生报告型bacmids。2.用包含早期表达报告基因的lef4、lef8、lef9或p47基因缺失突变体以及野生bacmids分别转染Sf9细胞,在荧光显微镜下监测荧光蛋白的表达。实验结果显示,在四种单个基因缺失和野生报告型bacmids转染的Sf9细胞培养皿中都可以见到荧光细胞。用被转染细胞培养上清液接种新鲜Sf9细胞培养,只有野生型bacmid转染上清液接种的培养皿中出现荧光细胞；而在四种单个基因缺失突变体转染上清液接种的培养皿中都未观察到荧光细胞。这些现象表明,lef4、lef8、lef9和p47基因是病毒复制必需基因；这些基因的缺失导致无感染性芽殖型病毒体产生3.用包含晚期表达egfp的left、lef8、lef9或p47基因缺失突变体以及野生bacmids分别转染Sf9细胞,在荧光显微镜下监测荧光蛋白的表达。实验结果显示,在野生报告型bacmids转染的Sf9细胞培养皿中可见大量荧光细胞；而在四种单个基因缺失突变体转染培养皿中只见少量荧光细胞。用包含晚期表达的荧光素酶基因luc的lef4、lef8、leJ9或p47基因缺失突变体以及野生型bacmids分别转染Sf9细胞,定量检测被转染细胞抽提物的荧光素酶活性。实验结果显示,lef4、lef8、lef9或p47基因缺失突变体表达的荧光素酶水平相较于野生bacmid分别下降99.79%、99.89%、99.87%和99.97%。这些实验结果表明,lef4、lef8、lef9或p47基因缺失导致晚期基因表达大部分丧失,但未完全丧失。4.在用lef4、lef8、lef9或p47基因缺失突变体以及野生型bacmids分别转染的Sf9细胞培养中分别加入DNA聚合酶抑制剂阿菲迪霉素或RNA聚合酶抑制剂α-鹅膏覃碱,定量检测被转染细胞抽提物的荧光素酶活性。实验结果显示,添加阿菲迪霉素使野生型和lef4、lef8、lef9、p47基因缺失突变体的荧光素酶表达量下降98.64%-99.96%。添加RNA聚合酶抑制剂α-鹅膏覃碱对各个基因缺失突变体表达荧光素酶活性水平无显着影响。(本文来源于《华中师范大学》期刊2013-06-01）
高奎[9]（2012）在《禽类多瘤病毒晚期基因表达调控机制的研究》一文中研究指出禽类多瘤病毒(Avian polyomavirus，APV)，早期称鹦鹉幼雏病病毒(Budgerigar Fledgling Disease Virus，BFDV)。能引起多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病。BFDV原属于乳多空病毒科多瘤病毒属。为了研究APV-1晚期基因多顺反子mRNA下游VP1基因的翻译调控机制,含AUG起始码的编码7个氨基酸的具有最佳翻译起始信号的核苷酸被设计插入到agno-1a mRNA的上游及AUG起始密码子的人工突变，以观察其对agno-1a mRNA下游VP1翻译的影响。本实验针对真核基因多顺反子mRNA的表达翻译的调控机制“Scan-Jumping及Internal Ribosome Entry Site (IRES)”模型，运用现代分子生物学方法在APV晚期基因中设计和构建基因组结构与野生型病毒APV-1相同的具有突变agno-1a区域的新型重组病毒。如片段插入（多重ATG区域迭加）碱裂解法提取APV cDNA克隆pHL1003DNA经Acc I部分酶切后回收全长线性目的片段，将合成的agno插入片段磷酸化后与目的片段用T4连接酶连接得到重组质粒,然后验证得到APV-1突变cDNA克隆；点突变（ATG→ACG或CTG，关键蛋白结合位点改变，关键RNA二级结构双链形成部位）pHL1003DNA经Acc I部分酶切和NcoI酶切后通过PCR技术将agno-1a区域基因的起始密码子ATG突变为ACG和CTG两种cDNA克隆并经测序验证。分别制备质粒DNA，经磷酸钙法介导单基因和多基因共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），利用Western blot检测重组病毒的基因表达和观察目的蛋白的异同，分析和研究多顺反子mRNA的表达翻译的调控过程。本研究旨在通过研究禽类多瘤病毒（Avian Polyoma Virus，APV）晚期基因多顺反子翻译调控分子机制，了解真核基因多顺反子mRNA表达翻译的复杂过程及其调控机理和建立具复制能力的感染性cDNA的重组病毒及转染和感染鸡胚成纤维细胞系统。由于禽类多瘤病毒能引起幼雏急性致死性疾病和其它鸟类的急性或慢性疾病，为防止禽类多瘤病毒病的大面积传播，减少重大经济损失，有必要在国内不同禽类中进行禽类多瘤病毒感染的流行病学调查，据此开展重点防治并开发安全的基因工程疫苗。该研究可以提供制备基因工程疫苗的理论指导并进行基因工程疫苗初期研制；与家禽养殖场和兽医站联合，建立该病规范化的疫情监测方法和系统。(本文来源于《中南民族大学》期刊2012-04-01）
张菊,向稚丹,刘兴楼,王慧,李革[10]（2011）在《大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期、早期和晚期基因转录水平的影响》一文中研究指出目的:研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期(ie)、早期(e)和晚期(l)基因在转录水平的影响,探讨大蒜新素抗HCMV效应的作用机制。方法:建立HCMV AD169株(MOI=2.5)感染细胞和大蒜新素(9.6 mg.L-1)处理感染细胞模型,并用相应剂量(2.3 mg.L-1)的更昔洛韦(GCV)作比较,用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞感染后0.5,2,4,6,12,24 h病毒ul122,ul123,ul54,ul83 mRNA水平的动态变化。结果:大蒜新素处理组ul122,ul123 mRNA的表达量始终明显低于感染对照组(P<0.05),而更昔洛韦处理组ul122 mRNA在0.5～6 h与病毒对照组无明显差异。大蒜新素对AD169ul122,ul123 mRNA的抑制率在感染后24 h分别为75.2%,70.4%。2药物处理组ul54 mRNA表达量始终低于病毒对照组(P<0.05),大蒜新素和更昔洛韦对ul54 mRNA的抑制率在感染后24 h分别为45.4%,27.2%。在感染后6 h各组ul83 mR-NA表达明显增多,以病毒感染对照组变化最为明显。大蒜新素和更昔洛韦对ul83 mRNA的抑制率在感染后24 h分别为45.9%,26.2%。结论:大蒜新素可显着抑制HCMVAD169毒株ie基因(ul122和ul123)的转录,导致其mRNA表达明显降低,对e基因(ul54)和l基因(ul83)转录水平亦有所抑制,表明病毒ie基因可能是大蒜新素抗HCMV作用的主要环节。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2011年14期）
晚期基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
缺血预处理(IPC)神经保护作用的神经化学基础较复杂,其过程包括:早期干预(磷酸化靶点、转运蛋白调节、干扰RNA)和晚期基因调控(低氧诱导转录因子、促红细胞生成素、血管内皮生长因子和诱导型一氧化氮合酶靶基因的调节)等。综述晚期基因管理机制的研究进展,深入了解其机制和开展新的研究,对缺血性脑卒中病人的治疗等方面提供重要的理论基础和临床价值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
晚期基因论文参考文献
[1].汪萍,宛传丹,赵一琳,崔燕红,宫磊.HPV-18型晚期基因L1在宫颈脱落细胞中的表达与突变研究[J].皖南医学院学报.2019
[2].罗婧,郭军红.缺血预处理对神经保护作用的晚期基因管理机制研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志.2019
[3].夏小帅.禽类多瘤病毒APV-1晚期基因agno-1a的突变体构建和表达[D].中南民族大学.2018
[4].杨一帆.七成卵巢癌发现均为晚期基因检测可减少发病风险[N].中国妇女报.2017
[5].刘琳.禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的初步研究[D].中南民族大学.2016
[6].周新宇.AcMNPV中LEF-10过量表达与聚集对病毒晚期基因表达的影响[D].西北农林科技大学.2016
[7].李劲,刘琳.禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达[J].中南民族大学学报(自然科学版).2016
[8].王姗姗.AcMNPVRNA聚合酶基因敲除对病毒复制和晚期基因表达的影响[D].华中师范大学.2013
[9].高奎.禽类多瘤病毒晚期基因表达调控机制的研究[D].中南民族大学.2012
[10].张菊,向稚丹,刘兴楼,王慧,李革.大蒜新素对人巨细胞病毒即刻早期、早期和晚期基因转录水平的影响[J].中国中药杂志.2011
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