实时荧光定量PCR检测工程酵母制备重组单克隆抗体原液中的宿主DNA残余

论文摘要

目的:建立实时荧光定量PCR法检测基于新型工程化酵母制备的重组单克隆抗体原液中残留DNA的含量,完善临床前质量控制研究资料。方法:以毕赤酵母工程菌的基因组DNA作为标准品,选择在毕赤酵母中基因拷贝数高的5S rRNA基因作为检测基因,合成特异性引物;通过优化反应体系、加样回收方法,建立实时荧光定量PCR检测糖基工程酵母宿主DNA残余的方法。结果:优化后的实时荧光定量PCR法检测灵敏度达10-3pg/μL,标准品DNA浓度为10310-3pg/μL时具有很好的线性关系,R2值达0.9984。不同浓度加样实验回收率为80%120%,重组单克隆抗体原液的DNA残余量测定结果为2.45 ng/剂量。结论:建立了一种基于实时荧光定量PCR检测糖基工程酵母制备的单克隆抗体的宿主DNA残余的方法。该方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,可满足药典对毕赤酵母生物制品宿主DNA残余量的要求。为糖基工程酵母制备的重组单克隆抗体和其他生物制品的质量控制提供了一种普适性方法。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 鲁仕豪,石萍萍,王甜甜,吴军,刘波

关键词: 糖基工程酵母,实时荧光定量,单克隆抗体,宿主残余,重组蛋白

来源: 生物技术通讯 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 军事医学研究院生物工程研究所,安徽大学物质科学与信息技术研究院

基金: 重大新药创制科技重大专项（2018ZX09101005-013-002）,国家自然科学基金（81773619,81673339）

分类号: Q78

页码: 643-647

总页数: 5

文件大小: 3478K

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