鸭疫里默氏杆菌RA-GD株RecA基因的功能研究

论文摘要

鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer）是一种无鞭毛、无芽孢,瑞氏染色呈两极着色的革兰氏阴性菌。该菌感染家鸭后,引起的传染病称为鸭传染性浆膜炎,以纤维素性心包炎等广泛性纤维素性炎症为临床病理特征。该病在世界各地广泛分布,具有较高的发病率和死亡率,是造成养鸭业重大损失的主要传染病之一。细菌DNA损伤诱导反应又称为SOS反应,是指细菌应对基因组DNA损伤的重要保护机制。RecA/LexA蛋白在很多细菌的SOS反应诱导中起关键调控作用。研究清楚RecA基因的功能及其可能在DNA损伤修复反应（SOS应答）中发挥的作用,有助于理解减弱细菌毒力和进化,降低细菌致病性,同时有助于降低并控制日益严峻的细菌耐药性,以及为开发新型抗菌小分子及生物制剂,减少化学药物的使用以控制病原菌方面发挥着一定作用。首先在同源重组的基础上,通过改造后的自杀性质粒PRE112-RecA-Erm构建缺失株RA-GD?RecA。在缺失株的基础上,通过对回复质粒PCP29逐步引入多克隆位点（Mcs）、复制区（Ori）、启动子（Psr）和RecA基因序列,构建成功回复质粒Pcp29-Mcs-Ori-Psr-RecA,与亲本株RA-GD通过接合转移构建回复株cRA-GD?RecA。其次,对上述3种鸭疫里默氏杆菌（亲本株RA-GD、缺失株RA-GD?RecA和回补株cRA-GD?RecA）分别开展生长曲线、药敏试验、雏鸭毒力试验等生物学特性研究。结果表明,RecA基因并不影响鸭疫里默氏杆菌RA-GD株的生长速率;RecA基因在降低鸭疫里默氏杆菌对硫酸庆大霉素的敏感性方面发挥作用;与RA-GD相比,RecA基因的缺失显著降低了RA-GD?RecA对雏鸭的致死率,表明RecA基因可能参与影响并减弱了鸭疫里默氏杆菌毒力因子的表达。最后,比较亲本株RA-GD和回复株cRA-GD?RecA在UV损伤前后,细菌存活数、RecA基因的转录和蛋白表达水平。结果表明,在一定限度内,RecA基因的转录水平随UV辐照时间的延长而增加。在UV引起的DNA损伤试验中,UV因素可以引发细菌发生DNA损伤应答（SOS应答）,表明RecA基因可能在鸭疫里默氏杆菌RA-GD株的SOS应答中发挥正调控作用。亲本株RA-GD与回复株cRA-GD?RecA的Western blotting证实,RecA蛋白反应原性良好,但UV因素并不参与影响RecA蛋白水平的表达。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 吉果

导师: 郑福英

关键词: 鸭疫里默氏杆菌,基因,应答,损伤

来源: 中国农业科学院

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院

基金: 国家自然科学基金（项目编号:31572532）

分类号: S852.61

总页数: 62

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